Commencez par ouvrir les images mitochondriales en accéléré dans l’image J2.1.0. Séparez les piles de positions en fonction du champ visuel en accédant à la barre de menu et en cliquant sur Image. Ensuite, allez dans Dupliquer, Entrer une tranche ou Numéro d’image, puis cliquez sur OK. Ensuite, dessinez une région d’intérêt autour de la cellule à l’aide de l’outil Sélection libre.
Pour exécuter la macro, ouvrez l’image J, accédez à la barre de menus et cliquez sur Plugins, Macros et Exécuter. Ensuite, sélectionnez Effacer l’arrière-plan et Enregistrer la MACRO de l’image. Pour déterminer la taille des pixels et la profondeur du voxel, ouvrez l’image J et sélectionnez Image.
Accédez à la barre de menu, sélectionnez Image et cliquez sur Propriétés. Après avoir déterminé la taille des pixels et la profondeur du voxel, dessinez une région d’intérêt englobant la cellule entière à l’aide de l’outil de sélection libre pour inclure la cellule entière dans les 15 images. Accédez à la barre de menu, cliquez sur Plugins, Macros, sélectionnez Effacer l’arrière-plan et enregistrez la MACRO de l’image.
Choisissez le dossier d’enregistrement souhaité, puis cliquez sur Enregistrer pour stocker le fichier au format TIFF. Ensuite, créez trois dossiers principaux intitulés Toutes les pistes, Pistes périnucléaires et Pistes télénucléaires. Créez un sous-dossier numéroté pour chaque image à traiter dans chaque dossier principal, en commençant par un.
Ajoutez une copie des deux fichiers supplémentaires d’optimisation de routine dans chaque dossier d’image. Pour identifier ou modifier la version par défaut du fichier mat, accédez à l’onglet Accueil de la section Environnement et cliquez sur Préférences. Ensuite, sélectionnez MATLAB.
Ouvrez le logiciel MATLAB sur l’ordinateur, accédez à la barre de menus, sélectionnez des applications et ouvrez Mitometer. Sélectionnez Démarrer la 3D et définissez la taille des pixels sur 0,1395089 micromètre, le temps entre les images sur 15 secondes, le nombre de plans z sur 8 et la distance axiale entre les plans z sur 0,418809 micromètre. Sélectionnez les images à saisir.
Maintenant, allez dans le menu latéral Mitomètre, sélectionnez Image et cliquez sur Sélectionner en surbrillance. Accédez à la barre de menu Mitomètre, choisissez Sélectionner des pistes puis Vues de piste. Ensuite, choisissez parmi toutes les pistes, télénucléaire ou périnucléaire.
Enregistrez les résultats dans un fichier texte en sélectionnant Enregistrer au format txt et extrayez les fichiers de résultats dans les dossiers créés. Préparez le fichier xlsx de randomisation, qui contient la clé pour l’encodage de l’image. Insérez une séquence d’entiers consécutifs, à partir de un, dans la colonne A, remplissez la colonne B avec des caractères alphanumériques, qui constituent les variables analytiques.
Double-cliquez sur l’exécutable mlx, entrez le nombre de dossiers, cliquez sur Spécifier le répertoire du dossier et sélectionnez Enregistrer le répertoire. Sélectionnez le nom de la feuille de calcul dans le fichier de sortie et cliquez sur Exécuter. Ensuite, effectuez l’analyse statistique nécessaire.
Des images représentatives des mitochondries après traitement, des tracés de surface respectifs et une segmentation automatisée sont présentés. Une diminution significative de la longueur mitochondriale moyenne a été observée dans les cellules traitées avec AM580. La surface mitochondriale a diminué de manière significative dans les cellules traitées avec AM580 et BMS493.
L’intensité de la TMRM normalisée pour le volume mitochondrial a montré une diminution significative des cellules traitées avec de l’acide rétinoïque et du CH55.
