먼저 이미지 J2.1.0에서 타임랩스 미토콘드리아 이미지를 엽니다. 시야에 따라 위치 스택을 분리하려면 메뉴 표시줄로 이동하고 Image를 클릭합니다. 그런 다음 [복제], [슬라이스 입력] 또는 [프레임 번호]로 이동하고 [확인]을 클릭합니다. 다음으로 자유 선택 도구를 사용하여 셀 주위에 관심 영역을 그립니다.
매크로를 실행하려면 이미지 J를 열고 메뉴 바에서 플러그인, 매크로, 실행을 클릭합니다. 그런 다음 배경 지우기를 선택하고 이미지의 매크로를 저장합니다. 픽셀 크기와 복셀 심도를 확인하려면 영상 J를 열고 영상을 선택하십시오.
메뉴 표시줄에 액세스하여 Image(이미지)를 선택하고 Properties(속성)를 클릭합니다. 픽셀 크기와 복셀 심도를 결정한 후 자유 선택 도구를 사용하여 전체 셀을 포함하는 관심 영역을 그려 15개 프레임 전체에 전체 셀을 포함합니다. 메뉴 바(Menu bar) 로 이동하여 플러그인(Plugins), 매크로(Macros) 를 클릭하고 배경 지우기(Clear the Background) 를 선택하고 이미지의 매크로(MACRO) 를 저장합니다.
원하는 저장 폴더를 선택하고 저장을 클릭하여 파일을 TIFF 형식으로 저장합니다. 그런 다음 All Tracks(모든 트랙), Perinuclear Tracks(핵 주변 트랙) 및 Telenuclear Tracks(원격 핵 트랙)라는 세 개의 기본 폴더를 만듭니다. 각 기본 폴더 내에서 처리할 각 이미지에 대해 번호가 매겨진 하위 폴더를 1부터 시작합니다.
두 루틴 최적화 보충 파일의 사본을 각 이미지 폴더에 추가하십시오. 기본 mat 파일 버전을 식별하거나 변경하려면 환경 섹션의 홈 탭으로 이동하여 기본 설정을 클릭합니다. 그런 다음 MATLAB을 선택합니다.
컴퓨터에서 MATLAB을 열고 메뉴 표시줄로 이동한 다음 앱을 선택하고 Mitometer를 엽니다. 3D 시작을 선택하고 픽셀 크기를 0.1395089마이크로미터로, 프레임 사이의 시간을 15초로, Z 평면 수를 8로, Z 평면 사이의 축 거리를 0.418809마이크로미터로 설정합니다. 입력할 이미지를 선택합니다.
이제 Mitometer 사이드 메뉴로 이동하여 Image를 선택하고 Select Highlighted를 클릭합니다. Mitometer 메뉴 모음으로 이동하여 Select Tracks(트랙 선택)를 선택한 다음 Track Views(트랙 뷰)를 선택합니다. 그런 다음 모든 트랙, Telenuclear 또는 Perinuclear 옵션 중에서 선택합니다.
txt에 저장을 선택하여 결과를 텍스트 파일에 저장하고, 생성된 폴더에 결과 파일의 압축을 풉니다. 이미지 인코딩을 위한 키가 포함된 무작위화 xlsx 파일을 준비합니다. 1부터 시작하는 연속된 정수 시퀀스를 열 A에 삽입하고 열 B를 분석 변수를 구성하는 영숫자로 채웁니다.
실행 파일 mlx를 두 번 클릭하고, 폴더 수를 입력하고, 폴더의 디렉터리 지정을 클릭하고, 디렉터리 저장을 선택합니다. 출력 파일에서 스프레드시트 이름을 선택하고 실행을 클릭합니다. 그런 다음 필요한 통계 분석을 수행합니다.
치료 후 미토콘드리아의 대표 이미지, 각 표면 플롯 및 자동 분할이 제시됩니다. AM580으로 처리된 세포에서 평균 미토콘드리아 길이의 현저한 감소가 관찰되었습니다. 미토콘드리아 표면적은 AM580 및 BMS493으로 처리된 세포에서 현저히 감소했습니다.
미토콘드리아 부피에 대해 정규화된 TMRM 강도는 레티노산과 CH55로 처리된 세포에서 현저한 감소를 보여주었습니다.
