Resim J2.1.0'daki hızlandırılmış mitokondriyal görüntüleri açarak başlayın. Menü çubuğuna gidip Görüntü'ye tıklayarak konum yığınlarını görsel alana göre ayırın. Ardından, Çoğalt, Dilim veya Çerçeve Numarası Girin'e gidin ve Tamam'ı tıklayın. Ardından, Serbest Seçim Aracını kullanarak hücrenin etrafına ilgi çekici bir bölge çizin.
Makroyu çalıştırmak için Image J'yi açın, Menü çubuğuna gidin ve Eklentiler, Makrolar ve Çalıştır'a tıklayın. Ardından, Arka Planı Temizle'yi seçin ve görüntünün MAKRO'sunu kaydedin. Piksel boyutunu ve voksel derinliğini belirlemek için Image J'yi açın ve Image (Görüntü) öğesini seçin.
Menü çubuğuna erişin, Görüntü'yü seçin ve Özellikler'e tıklayın. Piksel boyutunu ve voksel derinliğini belirledikten sonra, tüm hücreyi 15 karenin tümüne dahil etmek için Serbest Seçim Aracını kullanarak tüm hücreyi kapsayan bir ilgi alanı çizin. Menü çubuğuna gidin, Eklentiler, Makrolar'a tıklayın ve Arka Planı Temizle'yi seçin ve görüntünün MAKRO'sunu kaydedin.
İstediğiniz kaydetme klasörünü seçin ve dosyayı TIFF Formatında saklamak için Kaydet'e tıklayın. Ardından, Tüm İzler, Perinükleer İzler ve Telenükleer İzler başlıklı üç ana klasör oluşturun. Her bir ana klasörde birden başlayarak işlenecek her görüntü için numaralandırılmış bir alt klasör oluşturun.
Her görüntü klasörüne iki rutin optimizasyon ek dosyasının bir kopyasını ekleyin. Varsayılan mat dosyası sürümünü tanımlamak veya değiştirmek için, Ortam bölümündeki Ana Sayfa sekmesine gidin ve Tercihler'e tıklayın. Ardından MATLAB'ı seçin.
Bilgisayarda MATLAB yazılımını açın, Menü çubuğuna gidin, uygulamaları seçin ve Mitometer'ı açın. 3D Başlat'ı seçin ve piksel boyutunu 0,1395089 mikrometreye, kareler arasındaki süreyi 15 saniyeye, z düzlemi sayısını 8'e ve z düzlemleri arasındaki eksenel mesafeyi 0,418809 mikrometreye ayarlayın. Girilecek görüntüleri seçin.
Şimdi, Mitometre yan menüsüne gidin, Görüntü'yü seçin ve Vurgulanmış Seç'i tıklayın. Mitometre Menü çubuğuna gidin, Parçaları Seç'i ve ardından Parça Görünümleri'ni seçin. Ardından, Tüm Parçalar, Telenükleer veya Perinükleer Seçenekler arasından seçim yapın.
Txt'ye kaydet'i seçerek sonuçları bir metin dosyasına kaydedin ve sonuç dosyalarını oluşturulan klasörlere çıkarın. Görüntü kodlaması için anahtarı içeren rastgeleleştirme xlsx dosyasını hazırlayın. A sütununa birden başlayarak ardışık tamsayılar dizisi ekleyin, B sütununu analitik değişkenleri oluşturan alfasayısal karakterlerle doldurun.
Yürütülebilir mlx'e çift tıklayın, klasör sayısını girin, Klasörün dizinini belirtin'e tıklayın ve Dizini Kaydet'i seçin. Çıktı dosyasında e-tablo adını seçin ve Çalıştır'ı tıklayın. Bunu takiben, gerekli istatistiksel analizi yapın.
İşlemden sonra mitokondrinin temsili görüntüleri, ilgili yüzey grafikleri ve otomatik segmentasyon sunulmaktadır. AM580 ile tedavi edilen hücrelerde ortalama mitokondriyal uzunlukta önemli bir azalma gözlenmiştir. Mitokondriyal yüzey alanı, AM580 ve BMS493 ile tedavi edilen hücrelerde önemli ölçüde azaldı.
Mitokondriyal hacim için normalize edilen TMRM yoğunluğu, retinoik asit ve CH55 ile tedavi edilen hücrelerde önemli bir azalma gösterdi.
