Preparación de medio líquido anaeróbico en garrafón para el cultivo de microorganismos anaeróbicos ambientales en un biorreactor

Para preparar la configuración de la garrafa, abra la válvula de una bola de púas de manguera de 6,4 centímetros. Conecte dos centímetros de tubo de silicona en cada extremo de la válvula de bola de lengüeta de la manguera. Conecte un accesorio adaptador de lengüeta de manguera de 7,9 a 6,4 milímetros en un extremo del conjunto.

Conecte el otro extremo del conjunto a la lengüeta de la manguera de una garrafa de ocho litros. Use una brida para asegurar la conexión entre la lengüeta de la manguera de la garrafa y el tubo y la conexión entre el accesorio adaptador de la lengüeta de la manguera y el tubo. Mida y agregue los componentes de medios necesarios a la garrafa de ocho litros.

Después de ajustar el pH requerido, mezcle los componentes hasta homogeneidad revolviendo en una placa caliente y deje hervir el líquido durante 30 minutos. A continuación, conecte una pipeta de vidrio estéril de 10 mililitros a una configuración de colector de gas nitrógeno. Abra el colector para ventilar el oxígeno y permitir que el gas nitrógeno fluya.

Después de apagar el fuego, coloque la punta de la pipeta en el líquido y enjuáguelo con gas nitrógeno durante 30 minutos, moderadamente vigoroso, pero no desbordado. A continuación, tire de la punta de la pipeta hacia arriba en el espacio de cabeza de la garrafa. Agregue dos gramos de bicarbonato de sodio y 4,8 gramos de sulfuro de sodio nonahidratado y espere hasta que la resazurina se vuelva incolora.

Una vez que la resazurina sea incolora, retire la pipeta de vidrio e inmediatamente tape la garrafa con un tapón número 10. Enrolle un alambre sobre el tapón y alrededor del borde de la garrafa para asegurar el tapón.