בידוד תאים ממורין דרמיס

בצע את הפרוטוקול בתוך ארון בטיחות ביולוגית על העכבר שעבר המתת חסד, מגולח כראוי ומחוטא באתנול 70%. צור חתך שטחי של 0.5 אינץ 'בבטן החיה באמצעות מספריים. חותכים לאורך קו האמצע לכיוון הצוואר והבטן התחתונה.

בנוסף, בצעו חתכים רוחביים כדי לפתוח את העור. בעזרת מלקחיים קהים, מפרידים בעדינות את העור מהרקמות הסובבות, תוך כדי הליכה סביב פלג הגוף העליון של החיה וחותכים את העור לרוחב סביב הצוואר והבטן התחתונה. מניחים בזהירות את העור כשצד הדרמיס פונה כלפי מטה בצלחת תרבית רקמה בקוטר 100 מ"מ.

ולוודא שהעור מתוח ככל האפשר. הוסף שישה מיליליטר של תמיסת Dispase לצלחת, להבטיח את העור מכוסה לחלוטין. לאחר מכן, מכסים את הצלחת.

עוטפים את הצלחת בפרפילם. דוגרים על הצלחת בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות כדי לשטח את החציל. למחרת, באמצעות פיפטה, להסיר את הנוזל מן הצלחת המכילה את העור המבודד.

לאחר מכן, בעזרת מלקחיים, להפריד את הדרמיס מן האפידרמיס תוך הסרת כל רקמת שומן גלוי ממנו. ומניחים את הדרמיס המבודד בצלחת תרבית רקמה נקייה. הוסף מיליליטר אחד של DMEM המכיל 1X תמיסה אנטיביוטית-אנטי-מיקוטית לדרמיס בצלחת התרבית.

הטו את הצלחת כדי לצבור את הנוזל בצד אחד של הצלחת. לאחר מכן, לטחון את הדרמיס לחתיכות של מילימטר אחד עד שני מילימטרים רבועים. ולהעביר אותם צינור חרוטי חדש 50 מיליליטר.

הוסף 10 מיליליטר של פתרון collagenase סוג II לצינור. לדגור אותו במשך שעתיים ב 37 מעלות צלזיוס עם תסיסה מתמשכת ב 30 עד 50 סל"ד כדי לעכל את הדרמיס. סנן את תרחיף התא דרך מסננת תאים של 70 מיקרון.

וצנטריפוגה אותו ב-250 גרם למשך חמש דקות. לאחר השלכת supernatant, להשעות מחדש את הגלולה ב 10 מ"מ של DMEM המכיל פתרון אנטיביוטי-אנטי-מיקוטי. סנן את תרחיף התא דרך מסננת תאים של 40 מיקרון לפני הצנטריפוגה, כפי שהודגם בעבר.

להשעות מחדש את גלולת התא המתקבלת במיליליטר אחד של מדיה LEC מלאה. לאחר מכן, צלחת את התאים במדיה LEC מלאה בצלחת תרבית רקמה 60 מ"מ מצופה קולגן. החלף את המדיה כל יומיים על ידי שטיפת תאים עם PBS פעמיים והוספת מדיה LEC טרייה.

תמונות בהגדלה נמוכה של תאים שבודדו מהדרמיס המוריני הראו אוכלוסיית תאים מעורבת.