mitochondrial function analysis in ethidium bromide&#45;induced petite colonies of candida glabrata

Analyse de la formation de petites colonies et de la résistance aux médicaments chez Candida glabrata

Fungal infections, particularly those caused by Candida albicans and increasingly drug-resistant Candida glabrata, pose a serious global threat1. These infections can be deadly, especially for hospitalized patients and those with weakened immune systems. Rising antifungal resistance threatens the control of invasive candidiasis, a severe fungal infection with high mortality, especially from Candida albicans2. Resistant strains hinder effective treatment, potentially increasing both complexity and death rates. In Alameda County, California, USA, C. glabrata has become the most prevalent invasive species3. This shift in the prevalence and distribution of Candida species may be influenced by local healthcare practices, patient demographics, the utilization of antifungal agents, and the prevalence of risk factors for Candida infections.
Petite mutants in Candida, lacking functional mitochondria, reveal how this organelle affects drug response, virulence, and stress resistance4,5. C. glabrata readily forms these colonies, gaining sensitivity to polyenes while losing it to azoles6. Azole sensitivity and respiratory function are intricately linked, with diminished respiration leading to resistance via mitochondrial DNA loss7. Petite colonies of C. glabrata with azole resistance have been isolated from human stool samples from a bone marrow transplant recipient undergoing fluconazole treatment8 and from blood culture bottles of patients with bloodstream infections9. Their potential implications in drug resistance, virulence, and stress response highlight their clinical significance. Additionally, their distinct properties make them valuable tools for investigating fundamental questions in mitochondrial biology5. As research into petite mutants continues, their applications in both clinical and basic research are likely to expand.
This study discovered that photodynamic therapy (PDT) can induce petite colonies in C. glabrata, expanding the range of methods beyond the traditional techniques of exposing C. glabrata to ethidium bromide or fluconazole.

Pleins feux sur l’auteur : La thérapie photodynamique comme nouvelle approche pour induire de petites colonies dans le candida résistant aux médicaments pour la recherche antifongique

Induction de petites colonies chez Candida glabrate via la thérapie photodynamique médiée par Rose Bengal

The research aims to use photodynamic therapy, also known as PDT, to fight against drug-resistant Candida infection. In this study, we are trying to answer how effectively PDT kills the fungi, and how the virulence of the fungi changes after the treatment. We found petite colonies from the after PDT.Present methods for inducing petite colonies rely on ethidium bromide or fluconazole, which may work through different pathways on drug resistance and the stress responses, compared to PDT. Recently, petite colonies of Candida have become a significant concern in the clinic because they may resist medication and increase mortality rates. Photodynamic therapy has become one of the antifungal treatments and our finding helps breach the gap between traditional methods used to study petite colonies.Our findings provide evidence that PDT can induce petite colonies in drug resistant Candida in-vitro, presenting a groundbreaking method to study petite colonies. We'll definitely delve deeper into this field. There are many questions to be answered.How and why do petite colonies form after PDT stress? Do different Candida species respond differently? I believe it's a never ending story to be explored.

Analyse de la fonction mitochondriale dans de petites colonies de Candida glabrata induites par le bromure d’éthidium

Pour commencer la culture de Candida glabrata, disposez tout le matériel expérimental sur la plate-forme de travail. Prélever une seule colonie de C. glabrata dans une plaque de levure, de peptone dextrose ou de gélose YPD. Et transférez-le dans un tube à essai en verre contenant 3 millilitres de milieu YPD.Incuber pendant 14 à 16 heures à 25 degrés Celsius en secouant à 155 tr/min. Après l’incubation, diluer la culture dans du YPD frais pour obtenir une densité optique de 600 nanomètres de 0,1. Incuber la culture diluée à 25 degrés Celsius pendant six heures en agitant à 155 tr/min.Préparez une suspension de levure à une densité optique de 600 nanomètres de 0,1 en YPD à 3 millilitres. Ajoutez 30 microlitres de bouillon de bromure d’éthidium et incubez la suspension de levure pendant la nuit à 25 degrés Celsius à 155 tr/min à un angle de 45 degrés. Le lendemain, ajustez la densité optique de la culture à 0,65 avec un milieu YPD frais.Dans une plaque à 96 puits, ajoutez 20 microlitres de suspension de levure à 180 microlitres de PBS par puits pour une dilution décuplée. Plaque de 20 microlitres de chaque dilution sur quatre quadrants de la plaque de gélose YPD. Incuber l’assiette toute la nuit à 37 degrés Celsius.Le lendemain, sélectionnez des quadrants de cinq à 80 colonies et ajoutez 20 microlitres de tétrazolium de triphényle à 20 %. Et ajoutez 20 microlitres de chlorure de tétrazolium à 20% de triphényle directement au centre de chaque colonie. Incuber l’assiette à 37 degrés Celsius pendant 30 à 40 minutes.Numérisez des plaques à 1200 DPI à l’aide d’un scanner optique couleur 48 bits. L’agent intercalateur de l’ADN, le bromure d’éthidium, induit efficacement de petits mutants de C. glabrata.

Research

JoVE Journal

Biology

Mitochondrial Function Analysis in Ethidium Bromide&#45;Induced Petite Colonies of Candida glabrata

Induction of Petite Colonies in Candida glabrate via Rose Bengal-Mediated Photodynamic Therapy

Facing a 40% mortality rate in candidemia patients, drug-resistant Candida and their petite mutants remain a major treatment challenge. Antimicrobial ...

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Biologie

Mitochondrial Function Analysis in Fluconazole&#45;Induced Petite Colonies of Candida glabrata

Analyse de la fonction mitochondriale dans de petites colonies de Candida glabrata induites par le fluconazole

Mitochondrial Function Analysis in Antifungal Photodynamic Therapy Induced Petite Colonies of Candida glabrata

Analyse de la fonction mitochondriale dans la thérapie photodynamique antifongique induite par de petites colonies de Candida glabrata