Name: laser capture microdissection of drosophila peripheral neurons
Uploaded: 2010-05-24T17:00:00
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Nous remercions les Drs. Yuh-Nung Jan et Wes Grueber pour fournir des stocks volantes utilisées dans cette étude, et Virginia Espina, Dr Emanuel Petricoin et le Dr Lance Liotta d&#39;aide à la LCM. Les auteurs remercient F. Thomas et Kate Miller Jeffress Memorial Trust pour le soutien de cette recherche (DNC) et l&#39;Université George Mason Provost s de bureau (EPRI).

Commentaires généraux sur LCM de Drosophila périphérique neurones Laisser partir de 6 heures, jusqu&#39;à une semaine ou plus pour LCM selon le type de tissu et le nombre de cellules nécessaires. Toutes les procédures sont menées en stricte RNAse free conditions suivant les procédures standard. Les larves exprimant soit 21-7-GAL4, SAMU-mCD8:: GFP ou PPK-GAL4, SAMU-mCD8:: GFP lignes journaliste transgéniques ont été utilisées ...

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Le protocole présentés ici décrit notre méthode optimisée pour l&#39;isolement des neurones chez la drosophile périphérique via LCM. Alors que ce protocole a été conçu LCM pour l&#39;isolement spécifique de simple, spécifiques à chaque classe ou de plusieurs neurones da drosophile de l&#39;étape de troisième stade larvaire de développement, des modifications mineures du protocole pourrait être facilement adaptée à la capture d&#39;autres types de cellules de drosophile de to...

Equipement: <ul><li> Cryostat </li><li> Tube de 50 ml conique pour la fixation de diapositives, rinçage, traitement à la trypsine et de l&#39;éthanol / déshydratation xylène </li><li> Congélateur à -80 ° C </li><li> Incubateur </li><li> PixCell IIe LCM Instrument avec Fluor 300 optique à épifluorescence optimisé pour l&#39;EGFP (Molecular Devices-Molecular Devices) </li></ul>

laser capture microdissection of drosophila peripheral neurons

L&#39;arborisation dendritique (da) des neurones du système nerveux périphérique chez la drosophile (SNP) fournissent un excellent modèle dans lequel d&#39;étudier les mécanismes moléculaires sous-jacents spécifiques à chaque classe 1,2 morphogenèse dendrite. Pour faciliter les analyses moléculaires des classes spécifiques de développement da neurone, il est vital d&#39;obtenir ces cellules dans une population pure. Bien que toute une gamme de cellules différentes, et tissu-spécifique des techniques d&#39;isolement d&#39;ARN existent pour les cellules de drosophile, y compris magnétiques purification cellulaire perles basée 3,4, fluorescent tri cellulaire (FACS) 5-8, et l&#39;ARN protéine de liaison des stratégies basées sur neuf, aucun des ces méthodes peuvent être facilement utilisées pour isoler une ou plusieurs classes spécifiques drosophile neurones DA avec un haut degré de précision spatiale. Microdissection par capture laser (LCM) a émergé comme un outil extrêmement puissant qui peut être utilisé pour isoler des types cellulaires spécifiques des sections de tissus avec un haut degré de résolution spatiale et de précision. L&#39;ARN obtenu à partir de cellules isolées peuvent ensuite être utilisées pour des analyses, y compris qRT-PCR et profilage de l&#39;expression biopuces dans un type cellulaire donné 10-16. À ce jour, LCM n&#39;a pas été largement appliquée dans l&#39;analyse des tissus et des cellules de drosophile 17,18, y compris les neurones DA à l&#39;étape du stade larvaire tiers de développement. Ici, nous présentons notre protocole optimisé pour l&#39;isolation des neurones DA drosophile en utilisant l&#39;infrarouge (IR) classe de LCM. Cette méthode permet la capture d&#39;unique, spécifiques à chaque classe ou de plusieurs neurones DA avec une haute spécificité et la résolution spatiale. Appariés selon l&#39;âge des larves troisième stade exprimer une HES-mCD8:: GFP 19 transgène sous le contrôle soit de la classe IV da neurone spécifique PPK-GAL4 20 conducteur ou le pan-da neurone spécifique 21-7-21 GAL4 chauffeur ont été utilisés pour ces expériences. L&#39;ARN obtenu à partir des neurones da isolé est de très haute qualité et peuvent être directement utilisés pour des applications en aval, y compris les qRT-PCR ou microréseau analyses. Par ailleurs, ce protocole LCM peuvent être facilement adaptées pour capturer d&#39;autres types de cellules de drosophile à divers stades de développement dépend du type de cellule spécifique, le modèle d&#39;expression GAL4 axée sur la GFP.

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Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

Dans cette vidéo, article, nous présentons une méthode pour isoler un ou plusieurs<em&gt; Drosophile</em&gt; Neurones DA à partir de larves du tiers utilisant la capture infrarouge (IR) classe de microdissection par capture laser (LCM). L&#39;ARN obtenu à partir des neurones isolés peuvent être facilement utilisés pour des applications en aval, y compris qRT-PCR ou microréseau analyses.

Microdissection laser des Drosophile Neurones périphériques

The dendritic arborization (da) neurons of the Drosophila peripheral nervous system (PNS) provide an excellent model system in which to investigate the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

Morphological Analysis of Drosophila Larval Peripheral Sensory Neuron Dendrites and Axons Using Genetic Mosaics

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Neurosciences

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Préparation d&#39;<em&gt; Drosophila</em&gt; Les neurones centraux pour<em&gt; In situ</em&gt; Patch de serrage

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