Börja med att starta programvaran för dataanalys på en stationär dator. Klicka på Arkiv, följt av webbläsare och välj mapp för att öppna mappen som innehåller de inhämtade bilddata. Markera flera rader som är relaterade till de valda bilderna, inklusive de icke-infekterade kontrollerna och exklusive de övermättade bilderna.
Skriv ned avbildnings-ID:t i en labbanteckningsbok tillsammans med den information som registrerades under en andra avbildningssession. Klicka på ladda som grupp för att sätta ihop de valda bilderna. Klicka nu på spara-ikonen för att spara den nya sekvensbilden i en ny mapp för omanalys av rådata om det behövs.
Klicka sedan på alternativ följt av display och välj binning-faktor för att identifiera den binning som används för varje bild. Den förvärvade diskretiseringsfaktorn visas högst upp på varje bild i sekvensen. För att korrigera alla binning-faktorer till samma värde, dubbelklicka först på bilden som ska justeras.
I verktygsfönstret klickar du på alternativet för bildjustering och väljer sedan lämplig binning-faktor. Dubbelklicka på bilden av icke-infekterade möss och välj sedan antalet alternativ i enhetsfältet. Justera färgskalan till ett minimivärde på 600.
Välj alternativ för utstrålning i enhetsfältet för att visa utstrålningen för den resulterande bilden. När sekvensfönstret är aktivt väljer du alternativet radiance i enhetsfältet. Inaktivera den enskilda rutan i området för färgskalegränser för att justera färgskalan och färgtabellen i verktygspaletten.
Markera rutorna för logaritmisk skala och manual och ställ sedan in de maximala skalvärdena enligt den icke-infekterade kontrollen och området med den högsta signalen som maximum. När du har ställt in samma skala för alla bilder, dubbelklicka på varje bild, maximera fönstret och använd alternativet exportera grafik för att exportera bildvyn i ett bildformat. Namnge filerna efter behandling, följt av mössens ID och tidpunkt.
Dubbelklicka på bilden från sekvensen. I verktygspalettfönstret klickar du på avsnittet ROI-verktyg och trycker sedan på den fyrkantiga ikonen. Rita en rektangel över hela musen.
Klicka på kanten av den skapade ROI och kopiera och klistra in samma ROI för varje mus. Namnge sedan de ROI:er som ska registreras. Klicka sedan på spara-ikonen i avsnittet ROI-verktyg.
Markera rutan, tillämpa på sekvens. Tillämpa sedan de sparade ROI:erna för alla bilder genom att klicka på ladda. Justera positionen för ROI för varje mus så att den bättre passar dem i mätområdet.
När alla möss har märkts klickar du på alternativet mät ROI. Tabellen för ROI-mätningar bör visas. Ställ in mättyperna till utstrålning, bilden attribut till alla möjliga värden och ROI-måtten till centimeter.
Klicka sedan på alternativet välj alla följt av kopiera. Klistra in data direkt i programmet för tabellanalys. Ordna datakolumnerna för att sortera grupperna på rätt sätt.
Färgkoda sedan data efter grupper i kalkylbladet. Ordna de totala flödesvärdena så att de matchar samma muss ventrala och dorsala totala flödesvärden. Summera dem sedan för att få varje mus bioluminiscens för hela kroppen.
Beräkna medelvärdet och standardavvikelsen för de summerade värdena för varje grupp. Plotta data i ett statistiskt program för att generera grafer. Skapa slutligen en panel med bioluminescerande bilder.
Placera varje mus i kolumner och tidpunkterna i rader för att skapa en matris för läkemedelseffekt. När bioluminiscensmetoden används för att utvärdera antiparasitära medel, byggs en läkemedelseffektivitetsmatris för att jämföra testföreningar, här exemplifierat av posakonazol mot standardläkemedelsbehandlingen som används för Chagas sjukdom, bensnidazol med 100 milligram per kilogram administrerat en gång dagligen. I denna longitudinella studie illustreras infektionsförloppet genom att jämföra en icke-behandlad grupp med behandlade.
Resultaten visar antingen en minskning av parasitbördan, vilket indikeras av minskad bioluminiscens, eller ett återfall som visas av ökad parasitbelastning och därav följande ljusdetektion, vilket tyder på en ineffektiv förening eller behandlingsregim. Det kvantifierade ljuset representeras av summan av det ventrala och dorsala totala flödet i fotoner per sekund som en funktion av infektionstiden.
