Börja med att tina trombin och aprotinin på is och placera en fibrinogenflaska i ett vattenbad med 37 grader Celsius. Använd en pipett för att homogenisera dem under huven. Använd sedan en steril tång för att placera insatserna i odlingsbrunnarna och lämna minst en kolumn eller rad tom på plattan.
Tillsätt först de nödvändiga volymerna fibrinogen och aprotinin till ett rör på 0,25 milliliter. Tillsätt sedan trombinet i röret och spola snabbt två gånger utan att skapa bubblor. Rita upp hela rörets innehåll.
Placera pipetten vertikalt ovanför mitten av insatsen och spola försiktigt en reagensblandning utan att generera bubblor. Inkubera i minst en timme vid 37 grader Celsius för stelning tills blandningen blir ogenomskinlig vit. För organoidsådd, bekräfta under ett mikroskop att mikromassorna bildar sfäriska cellmassor, med en kompakt kör omgiven av en halo med lägre densitet av tidiga tymiska stamceller.
Skär av spetsen på en P200-kon och tvätta den med en anti-vidhäftande lösning. Luta plattan till ett nästan vertikalt läge och aspirera cellmassorna från botten av brunnen. Deponera försiktigt massan på toppen av hydrogelerna utan att röra vid gelen.
Kontrollera under mikroskopet att det inte finns någon organoid kvar i plattbrunnarna. Tillsätt sedan långsamt en fjärdedel av volymen odlingsmedium i toppen av hydrogelen utan att röra vid den, och tillsätt de återstående 3/4 i botten av brunnen. Tillsätt en milliliter PBS till de tomma odlingsbrunnarna för att bibehålla luftfuktigheten i plattan och inkubera vid 37 grader Celsius med 5 % koldioxid.
Organoiderna bildar sfäriska till avlånga strukturer och smälter ibland samman för att bilda större strukturer i hydrogelerna.
