Para comenzar, coloque el ratón anestesiado en decúbito supino sobre el campo quirúrgico. Aplique i-gel y asegure el cono de la nariz con cinta quirúrgica. A continuación, asegure las patas delanteras y traseras del ratón con cinta quirúrgica.
Examina la parte inferior del abdomen del ratón en busca de vejiga. Para ayudar a crear espacio dentro del abdomen durante la cirugía, induzca la micción aplicando suavemente presión externa a la vejiga entre los dedos pulgar, índice y medio. Usa un pedazo de gasa para absorber la orina.
Desinfecte el abdomen con yodo o un exfoliante a base de clorhexidina, comenzando desde el centro y trabajando hacia afuera con movimientos circulares. Luego repita tres veces con 70% de alcohol. Realice un pellizco en el dedo del pie para confirmar la profundidad de la anestesia.
A continuación, coloque un paño quirúrgico sobre el ratón con la abertura directamente sobre el abdomen preparado quirúrgicamente. Cambie los guantes por guantes estériles. Use un bisturí para hacer una incisión abdominal en la línea media de aproximadamente 2-3 centímetros de largo.
Levante los músculos rectos con pinzas para identificar la línea alba translúcida. Utilice unas tijeras para entrar en la cavidad abdominal a través de la línea alba. Luego se extiende a lo largo de la línea alba proximal y distalmente.
Humedece una tira de gasa y dos bastoncillos con punta de algodón con solución salina tibia. Crea un rollo abdominal enrollando firmemente un extremo de la gasa hasta la mitad, dejando una cola generosa. Con un retractor de piel, retraiga la pared abdominal derecha.
Con la ayuda de hisopos humedecidos con punta de algodón, realice una rotación visceral medial derecha barriendo suavemente los intestinos delgado y grueso hacia el cuadrante superior izquierdo para visualizar la aorta y la vena cava inferior. Después de retraer el intestino fuera de la vista, meta el extremo enrollado de la gasa debajo del intestino. A continuación, lleve la cola y alrededor y fuera del cuerpo para envolver suavemente el intestino.
Aplique una tensión suave a la cola de la gasa para mantener el intestino fuera del campo de visión. Ajuste el balanceo abdominal y el retractor cutáneo para obtener una visión óptima de los órganos retroperitoneales. Después de confirmar que la vena cava inferior y la aorta infrarrenal están a la vista, exponga la aorta entrando y dividiendo la fascia retroperitoneal.
Identificar las arterias gonadales que corren paralelas a lo largo de la aorta infrarrenal anterior. Con fórceps, divida sin rodeos la fascia entre las arterias gonadales y continúe longitudinalmente para exponer la aorta anteriormente. Ahora, con las puntas de las pinzas, separe suavemente las fibras del tejido conectivo entre la aorta y la vena cava inferior y continúe trabajando circunferencialmente alrededor de la aorta a este nivel.
Continúe diseccionando sin rodeos el plano entre la aorta y la vena cava inferior, trabajando caudalmente hacia la bifurcación aórtica. Una vez que el borde derecho de la aorta está separado de la vena cava inferior, se regresa proximalmente al nivel de la vena renal izquierda. Diseccionar la fascia retroperitoneal del borde lateral izquierdo de la aorta, trabajando circunferencialmente hasta que la aorta esté completamente aislada.
Después de examinar la aorta aislada, coloque una tira de guantes a lo largo de los bordes derecho e izquierdo de la aorta. Con pinzas de mano estériles, mida el diámetro aórtico más ancho. Frote el exceso de sangre o líquido de la aorta con un hisopo con punta de algodón.
Coloque un trozo de gasa seca de 10 x 2 milímetros encima de la aorta. Con una pipeta, agregue 5 microlitros de elastasa para saturar la gasa y la aorta. Dobla suavemente los pedazos del guante alrededor de la aorta durante 5 minutos.
Después de 5 minutos, restablezca las retracciones intestinales y despliegue las piezas del guante. Irrigar la cavidad abdominal con 1 mililitro de solución salina estéril tibia al 0,9% mientras se retiran con cuidado la gasa y los guantes de la aorta. Absorber la solución salina en el abdomen con una gasa.
Con pinzas de mano, vuelva a medir el diámetro aórtico más amplio después de la aplicación de elastasa. Retire con cuidado el rollo abdominal de debajo del intestino y fuera del cuerpo. Observe para asegurarse de que el intestino se vea rosado y adecuadamente perfundido.
Vuelva a aproximar la fascia abdominal con una sutura de monofilamento no absorbible 5-0 en funcionamiento. Cierre la piel con 3-4 grapas cutáneas. Los ratones machos tratados con elastaso demostraron un aumento del 43,4% en el diámetro aórtico después de 5 minutos de exposición en comparación con los diámetros aórticos basales no tratados, mientras que las aortas femeninas tratadas aumentaron en un 33,6%.
De los ratones tratados con hembras, tres de seis murieron por ruptura de AAA, mientras que no se observaron rupturas de AAA entre los machos tratados. A los 28 días, el diámetro promedio de AAA de los machos tratados fue de aproximadamente 2.86 milímetros, con un cambio porcentual promedio de 257. Mientras que los diámetros AAA de los ratones hembra tratados supervivientes fueron de 3,6 milímetros, con un cambio porcentual promedio de 417.
Los ratones simulados no mostraron relativamente ningún cambio en los diámetros aórticos.
