Name: preparation of mouse brain tissue for immunoelectron microscopy
Uploaded: 2010-07-20T17:45:00
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Wir danken Shao-Ming Lu und Harris A. Gelbard für den Einsatz einer Schlauchpumpe und Vibratom sowie Karen L. Bentley und Gayle Schneider am Elektronenmikroskop Forschung Core Facility der University of Rochester Medical Center für technische Unterstützung. Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse der NIH (EY019277), Whitehall-Stiftung, Burroughs Wellcome Fund und der Alfred P. Sloan Foundation, um AKM finanziert. M.-È.T. wird durch einen Fonds de la recherche en santé du Québec (FRSQ) Postdoc-Preis finanziert.

1. Tierische Perfusion <ol><li> Am Tag vor der Perfusion, vorzubereiten: - 2 L Phosphatpuffer (PB; 100 mM, pH 7,4) und 1 L Natrium Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS, 0,9% NaCl in 50 mM PB, pH 7,4) in doppelt destilliertem Wasser. Bewahren Sie die PBS und 1L PB bei 4 ° C. Diese werden für die Perfusion und Pre-Embedding Immunzytochemie verwendet werden. - 1L von 4,0% Paraformaldehyd (PFA, pH 7,4) Fixierlösung, die die Durchblutung von 6 Mäusen ermöglichen. Zu diesem Zweck aufheizen 1 L PB unt...

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	<li>Venable, J. H., Coggeshall, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+lead+citrate+stain+for+use+in+electron+microscopy.">A simplified lead citrate stain for use in electron microscopy.</a> J Cell Biol. 25, 407-407 (1965).</li><li>Riad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatodendritic+localization+of+5-HT1A+and+preterminal+axonal+localization+of+5-HT1B+serotonin+receptors+in+adult+rat+brain.">Somatodendritic localization of 5-HT1A and preterminal axonal localization of 5-HT1B serotonin receptors in adult rat brain.</a> J Comp Neurol. 417 (2), 181-181 (2000).</li><li>Tremblay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+EphA4+in+axon+terminals+and+dendritic+spines+of+adult+rat+hippocampus.">Localization of EphA4 in axon terminals and dendritic spines of adult rat hippocampus.</a> J Comp Neurol. 501 (5), 691-691 (2007).</li><li>Tremblay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+course+of+EphA4+cellular+and+subcellular+localization+in+the+postnatal+rat+hippocampus.">Developmental course of EphA4 cellular and subcellular localization in the postnatal rat hippocampus.</a> J Comp Neurol. 512 (6), 798-798 (2009).</li><li>Bouvier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-synaptic+and+post-synaptic+localization+of+EphA4+and+EphB2+in+adult+mouse+forebrain.">Pre-synaptic and post-synaptic localization of EphA4 and EphB2 in adult mouse forebrain.</a> J Neurochem. 106 (2), 682-682 (2008).</li><li>Bouvier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphA4+is+localized+in+clathrin-coated+and+synaptic+vesicles+in+adult+mouse+brain.">EphA4 is localized in clathrin-coated and synaptic vesicles in adult mouse brain.</a> J Neurochem. , (2010).</li></ol>

Hier haben wir ein Protokoll für die Herstellung von Gehirngewebe der Maus für Immunelektronenmikroskopie, dass er einen ausgezeichneten Kompromiss zwischen optimaler ultrastrukturelle Konservierung und immunzytochemische Nachweis, wenn die Verfahren konsequent durchgeführt liefert beschrieben. Kombiniert mit TEM ermöglicht diese Methode, um zelluläre Elemente mit wenigen Besonderheiten und Identifikation Kriterien zu unterscheiden. Insbesondere ermöglicht die Immunperoxidase-DAB-Färb...

* Man sollte immer unter einem Abzug arbeiten und Nitrilhandschuhe tragen beim Umgang mit Acrolein, Paraformaldehyd und Osmium und sollten auch ihren Müll ordnungsgemäß zu entsorgen.

preparation of mouse brain tissue for immunoelectron microscopy

Die Transmissionselektronenmikroskopie (TEM) ist äußerst nützlich für die Visualisierung von Mikrogliazellen, oligodendrocytic, Astrozyten und Neuronen subzellulären Kompartimenten (Dendriten, dendritischen Dorn, Axon, Axonterminal, Perikaryon), sowie deren intrazellulären Organellen und Zytoskelett, in das zentrale Nervensystem an hoher räumlicher Auflösung. Kombiniert mit TEM ermöglicht Pre-Embedding Immunzytochemie die Diskriminierung von zellulären Elemente mit wenigen Besonderheiten und Identifikation Kriterien (zB Mikroglia Perikarya und Prozesse, bei Verwendung eines Antikörpers gegen die Mikroglia-Marker Iba1 (ionisiertes Kalzium bindenden Adapter molecule 1; wie dargestellt hier)), die Identifizierung des Neurotransmitters Inhalte der zellulären Elemente (zB Serotonin) und deren ultrastrukturelle Lokalisierung von löslichen oder Membran-gebundenen Proteine ​​(zB 5 HT1A und EphA4-Rezeptoren). Hier beschreiben wir ein Protokoll für transcardiac Perfusion von Mäusen mit Acrolein Fixativ, das Entfernen und Schneiden des Gehirns sowie Immunperoxidase-Diaminobenzidin (DAB)-Färbung, Harz eingebettet, und ultradünne Schnitte der Hirnschnitten. Nach Abschluss dieser Verfahren ist die immungefärbt Material bereit zur Untersuchung mit TEM. Wenn konsequent durchgeführt wird, bietet diese Technik einen hervorragenden Kompromiss zwischen optimaler ultrastrukturelle Konservierung und immunzytochemische Detektion.

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Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy

Wir beschreiben ein Protokoll für transcardiac Perfusion von Mäusen, die Entfernung und Schnitte des Gehirns sowie Immunperoxidasefärbung, Harz eingebettet, und ultradünne Schnitte des Gehirns Abschnitten. Nach Abschluss dieser Verfahren ist die immungefärbt Material bereit zur Untersuchung mit der Transmissionselektronenmikroskopie.

Vorbereitung von Gehirngewebe der Maus für Immunelektronenmikroskopie

Transmission electron microscopy (TEM) is extremely useful for visualizing microglial, oligodendrocytic, astrocytic, and neuronal subcellular compartments ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focussed Ion Beam Milling and Scanning Electron Microscopy of Brain Tissue

Fokussierten Ionenstrahl-Fräs-und Rasterelektronenmikroskopie des Hirngewebes

This protocol describes how biological samples, like brain tissue, can be imaged in three dimensions using the focussed ion beam/scanning electron ...

Forschung

Neurowissenschaften

Multiphoton Microscopy of Cleared Mouse Brain Expressing YFP

Multiphotonen Mikroskopie Cleared Maushirn Ausdruck YFP

Multiphoton microscopy of intrinsic fluorescence and second harmonic generation (SHG) of whole mouse organs is made possible by optically clearing the ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Funktionelle Bildgebung mit Ultraschall-Blut-Hirnschranke Störung und Mangan-MRT

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Micron-scale Resolution Optical Tomography of Entire Mouse Brains with Confocal Light Sheet Microscopy

Micron-Skala Resolution Optical Tomography von Entire Gehirn der Maus mit der konfokalen Mikroskopie Licht Blatt

Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetische Manipulation von Kleinhirnkörnerzellen<em&gt; In-vitro-</em&gt; Und<em&gt; In Vivo</em&gt;, Um neuronale Morphologie und Migration Studieren

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

Das olfaktorische System als Modell zur Axonal Wachstumsmuster und Morphologie Studieren<em&gt; In Vivo</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Vorbereitung der akuten Gehirnscheiben mit einem optimierten N-Methyl-D-Glucamine-schützende Recovery-Methode

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Preparation of Non-human Primate Brain Tissue for Pre-embedding Immunohistochemistry and Electron Microscopy

Herstellung von nichtmenschlichen Primaten Hirngewebe für die Pre-Einbettung Immunhistochemie und Elektronenmikroskopie

Despite all the technological advances at the light microscopy&#160;level, electron microscopy remains the only tool in neuroscience to examine and ...

Preparation of Newborn Rat Brain Tissue for Ultrastructural Morphometric Analysis of Synaptic Vesicle Distribution at Nerve Terminals

Vorbereitung des Neugeborenen Ratsprofels für die ultrastrukturelle Morphometrische Analyse der Verbreitung synaptischer Bläschen an Nerven-Terminals

Our laboratory and many others have exploited the high resolving power of transmission electron microscopy to study the morphology and spatial ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

Eine hydrophobe Gewebereinigungsmethode für Rattenhirngewebe

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...