Name: preparation of mouse brain tissue for immunoelectron microscopy
Uploaded: 2010-07-20T17:45:00
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我々は技術支援のためのロチェスター大学医療センターの電子顕微鏡研究の中核施設で、蠕動ポンプとビブラトームの使用だけでなく、カレンL. Bentleyとゲイルシュナイダーのために少明陸とハリスA. Gelbardに感謝。この作品は、NIH（EY019277）、ホワイトホール財団、バローズウェルカム基金、及びAKMのアルフレッドP.スローン財団からの補助金によって賄われていた。 M.-È.T.フォンデラ凝ったエンサンテケベック（FRSQ）ポスドクトレーニングの賞によって運営されている。

1。動物の血流<ol><li>灌流の前日に、準備します。 とナトリウムリン酸緩衝液（PBS、50mMのPBで0.9％のNaCl、pH7.4）を生理食塩水を1Lの蒸留水に、 - リン酸緩衝液（100mMの、pH7.4のPB）の2 L。 4でPBのPBSと1L℃にて保存してください。これらは血流との事前エンベディング免疫細胞化学のために使用されます。 - 6匹のマウスの灌流を可能とする4.0％のパラホルムアルデヒド（PFA、pH7.4）で固...

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	<li>Venable, J. H., Coggeshall, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+lead+citrate+stain+for+use+in+electron+microscopy.">A simplified lead citrate stain for use in electron microscopy.</a> J Cell Biol. 25, 407-407 (1965).</li><li>Riad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatodendritic+localization+of+5-HT1A+and+preterminal+axonal+localization+of+5-HT1B+serotonin+receptors+in+adult+rat+brain.">Somatodendritic localization of 5-HT1A and preterminal axonal localization of 5-HT1B serotonin receptors in adult rat brain.</a> J Comp Neurol. 417 (2), 181-181 (2000).</li><li>Tremblay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+EphA4+in+axon+terminals+and+dendritic+spines+of+adult+rat+hippocampus.">Localization of EphA4 in axon terminals and dendritic spines of adult rat hippocampus.</a> J Comp Neurol. 501 (5), 691-691 (2007).</li><li>Tremblay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+course+of+EphA4+cellular+and+subcellular+localization+in+the+postnatal+rat+hippocampus.">Developmental course of EphA4 cellular and subcellular localization in the postnatal rat hippocampus.</a> J Comp Neurol. 512 (6), 798-798 (2009).</li><li>Bouvier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-synaptic+and+post-synaptic+localization+of+EphA4+and+EphB2+in+adult+mouse+forebrain.">Pre-synaptic and post-synaptic localization of EphA4 and EphB2 in adult mouse forebrain.</a> J Neurochem. 106 (2), 682-682 (2008).</li><li>Bouvier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphA4+is+localized+in+clathrin-coated+and+synaptic+vesicles+in+adult+mouse+brain.">EphA4 is localized in clathrin-coated and synaptic vesicles in adult mouse brain.</a> J Neurochem. , (2010).</li></ol>

ここでは手続きが厳格に実行されるときに、最適な超微細構造の保全と免疫細胞化学的検出の間で優れた妥協点を提供する免疫電子顕微鏡のためのマウスの脳組織の準備のためのプロトコルを記述している。 TEMと組み合わせることで、この方法はいくつかの特徴と識別基準に携帯電話の要素を区別することができます。特に、Iba1の免疫ペルオキシダーゼ- DAB染色では神?...

*一つは、常に換気フードの下で働くとアクロレイン、ホルムアルデヒド、及びオスミウムを処理しても適切に廃棄物を処分する時期ニトリル手袋を着用してください。

preparation of mouse brain tissue for immunoelectron microscopy

透過型電子顕微鏡（TEM）がで中枢神経系では、非常に、ミクログリア可視化に有用なオリゴデンドロサイト、アストロサイト、神経細胞内コンパートメント（樹状突起、樹状突起スパイン、軸索、軸索ターミナル、周核体）、ならびにそれらの細胞内小器官と細胞骨格です。高空間分解能。として提示さ、TEMと組み合わせることで、事前に埋め込み免疫細胞は、いくつかの特徴と識別基準（例えば、ミクログリアperikaryonの複数形やプロセス、ミクログリア特異的なマーカーIba1（イオン化カルシウム結合アダプター分子1に対して抗体を使用しているときに携帯電話の要素の識別を可能にここで））、神経伝達物質の細胞内要素の内容（例えば、セロトニン作動性）およびそれらの超微細構造の可溶性または膜結合タンパク質の局在化（例えば、5 HT1AおよびEphA4の受容体を）特定する。ここでは、アクロレイン固定液、脳の除去と切片だけでなく、免疫ペルオキシダーゼ - ジアミノベンジジン（DAB）染色、樹脂の埋め込み、および脳切片の切片極薄でマウスの経心臓的灌流のためのプロトコルについて説明します。これらの手順が完了すると、免疫染色の材料はTEMで試験の準備ができています。厳密に実行する場合は、この手法は、最適な微細構造の保全と免疫細胞化学的検出の間で優れた妥協点を提供します。

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Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy

我々は経心臓的マウスの灌流、脳の除去と切片だけでなく、免疫ペルオキシダーゼ染色、樹脂の埋め込み、および脳切片の切片極薄のためのプロトコルについて説明します。これらの手順が完了すると、免疫染色の材料は、透過型電子顕微鏡による検査のための準備ができています。

免疫電子顕微鏡のためのマウスの脳組織の準備

Transmission electron microscopy (TEM) is extremely useful for visualizing microglial, oligodendrocytic, astrocytic, and neuronal subcellular compartments ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focussed Ion Beam Milling and Scanning Electron Microscopy of Brain Tissue

集束イオンビームは、粉砕し、脳組織の走査型電子顕微鏡

This protocol describes how biological samples, like brain tissue, can be imaged in three dimensions using the focussed ion beam/scanning electron ...

Multiphoton Microscopy of Cleared Mouse Brain Expressing YFP

YFPを発現クリアマウス脳の多光子顕微鏡

Multiphoton microscopy of intrinsic fluorescence and second harmonic generation (SHG) of whole mouse organs is made possible by optically clearing the ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

超音波血液脳関門の破壊とマンガン増強MRIを用いた脳機能イメージングの試み

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Micron-scale Resolution Optical Tomography of Entire Mouse Brains with Confocal Light Sheet Microscopy

共焦点光シート顕微鏡全体マウスの脳のミクロンスケールの分解能光トモ

Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

小脳顆粒ニューロンの遺伝子操作<em&gt;体外</em&gt;と<em&gt;インビボ</em&gt;ニューロンの形態と移行を研究するために、

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

モデルとしての嗅覚系は、軸索の成長パターンと形態を研究する<em&gt;インビボ</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

最適化されたNを使用して急性脳スライスの準備-メチル-D-glucamine 保護回復法

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Preparation of Non-human Primate Brain Tissue for Pre-embedding Immunohistochemistry and Electron Microscopy

プレ埋め込み免疫組織化学および電子顕微鏡のための非ヒト霊長類脳組織の調製

Despite all the technological advances at the light microscopy&#160;level, electron microscopy remains the only tool in neuroscience to examine and ...

Preparation of Newborn Rat Brain Tissue for Ultrastructural Morphometric Analysis of Synaptic Vesicle Distribution at Nerve Terminals

Ultrastructural のための新生ラット脳組織の調製 Morphometric 神経末端におけるシナプス小胞分布の解析

Our laboratory and many others have exploited the high resolving power of transmission electron microscopy to study the morphology and spatial ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

ラット脳組織の疎水性組織除去法

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...