Name: preparation of mouse brain tissue for immunoelectron microscopy
Uploaded: 2010-07-20T17:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy at JoVE.com

Мы благодарим Шао-Минг Лу Харрис и А. Гелбард для использования перистальтического насоса и vibratome, а также Карен Л. Бентли и Гейл Шнайдер в электронный микроскоп исследований Основные фонда из Университета Рочестера медицинский центр для оказания технической помощи. Эта работа финансировалась за счет грантов от NIH (EY019277), Уайтхолл Фонда Burroughs Wellcome фонд и Фонд Альфреда П. Слоуна в АКМ. M.-È.T. финансируется за счет Fonds-де-ла изысканная ан santé Квебека (FRSQ) докторской награды обучения.

1. Животное перфузии <ol><li> За день до перфузии, подготовить: - 2 л фосфатном буфере (PB, 100 мМ, рН 7,4) и 1 л натрия фосфат-солевом буфере (PBS, 0,9% NaCl в 50 мМ PB, рН 7,4) в бидистиллированной воде. Магазин PBS и 1л ПБ при 4 ° C. Они будут использоваться для перфузии и предварительно вложение иммуноцитохим...

<ol>
	<li>Venable, J. H., Coggeshall, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+lead+citrate+stain+for+use+in+electron+microscopy.">A simplified lead citrate stain for use in electron microscopy.</a> J Cell Biol. 25, 407-407 (1965).</li><li>Riad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatodendritic+localization+of+5-HT1A+and+preterminal+axonal+localization+of+5-HT1B+serotonin+receptors+in+adult+rat+brain.">Somatodendritic localization of 5-HT1A and preterminal axonal localization of 5-HT1B serotonin receptors in adult rat brain.</a> J Comp Neurol. 417 (2), 181-181 (2000).</li><li>Tremblay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+EphA4+in+axon+terminals+and+dendritic+spines+of+adult+rat+hippocampus.">Localization of EphA4 in axon terminals and dendritic spines of adult rat hippocampus.</a> J Comp Neurol. 501 (5), 691-691 (2007).</li><li>Tremblay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+course+of+EphA4+cellular+and+subcellular+localization+in+the+postnatal+rat+hippocampus.">Developmental course of EphA4 cellular and subcellular localization in the postnatal rat hippocampus.</a> J Comp Neurol. 512 (6), 798-798 (2009).</li><li>Bouvier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-synaptic+and+post-synaptic+localization+of+EphA4+and+EphB2+in+adult+mouse+forebrain.">Pre-synaptic and post-synaptic localization of EphA4 and EphB2 in adult mouse forebrain.</a> J Neurochem. 106 (2), 682-682 (2008).</li><li>Bouvier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphA4+is+localized+in+clathrin-coated+and+synaptic+vesicles+in+adult+mouse+brain.">EphA4 is localized in clathrin-coated and synaptic vesicles in adult mouse brain.</a> J Neurochem. , (2010).</li></ol>

Здесь мы описали протокол для подготовки ткани мозга мыши для иммуноэлектронной микроскопии, которая обеспечивает отличный компромисс между оптимальными ультраструктурным сохранение и иммуноцитохимического обнаружения, когда процедуры строго выполняется. В сочета?...

* Нужно всегда работать под вытяжкой и носить нитрила перчатки при работе акролеин, параформальдегида, и осмий, а также должны распоряжаться своими отходами надлежащим образом.

preparation of mouse brain tissue for immunoelectron microscopy

Просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) является чрезвычайно полезным для визуализации микроглии, oligodendrocytic, астроцитов и нейронов субклеточных купе (дендрита, дендритных позвоночника, аксона, аксон терминал, perikaryon), а также их внутриклеточных органелл и цитоскелета, в центральной нервной системе при высоким пространственным разрешением. В сочетании с ТЕМ, предварительно вложение иммуноцитохимии позволяет дискриминации клеточных элементов с несколькими отличительными чертами и определение критериев (например, микроглии perikarya и процессов, при использовании антител против микроглии-специфическим маркером Iba1 (ионизированного кальция связывающей молекулы адаптер 1, представленный здесь)), определение нейротрансмиттеров содержание клеточных элементов (например, серотонинергические) и их ультраструктурным локализации растворимых или мембраной белков (например, 5 HT1A и EphA4 рецепторы). Здесь мы опишем протокол для transcardiac перфузии мышей с фиксатором акролеин, удаление и срезов мозга, а также иммунопероксидазного-диаминобензидина (DAB) окрашивание, смолы вложения, и ультратонких срезов мозга разделов. После завершения этих процедур, immunostained материал будет готов для рассмотрения с ТЕА. Когда строго выполняется, этот метод обеспечивает отличный компромисс между оптимальными ультраструктурным сохранение и иммуноцитохимического обнаружения.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy at JoVE.com

Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy

Мы опишем протокол для transcardiac перфузии мышей, удаление и срезов мозга, а также иммунопероксидазного окрашивание, смолы вложения, и ультратонких срезов мозга разделов. После завершения этих процедур, immunostained материал будет готов для рассмотрения с просвечивающей электронной микроскопии.

Подготовка ткани мозга мыши для иммуноэлектронной микроскопии

Transmission electron microscopy (TEM) is extremely useful for visualizing microglial, oligodendrocytic, astrocytic, and neuronal subcellular compartments ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focussed Ion Beam Milling and Scanning Electron Microscopy of Brain Tissue

Сосредоточены ионного пучка фрезерные и сканирующей электронной микроскопии ткани мозга

This protocol describes how biological samples, like brain tissue, can be imaged in three dimensions using the focussed ion beam/scanning electron ...

Multiphoton Microscopy of Cleared Mouse Brain Expressing YFP

Многофотонной микроскопии Сбрасывается мозга мыши выражая YFP

Multiphoton microscopy of intrinsic fluorescence and second harmonic generation (SHG) of whole mouse organs is made possible by optically clearing the ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Функциональные нейровизуализации с использованием ультразвуковых Гематоэнцефалический Разрушение барьеров и марганца-МРТ

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Micron-scale Resolution Optical Tomography of Entire Mouse Brains with Confocal Light Sheet Microscopy

Микронного масштаба Разрешение оптической томографии целых мозг мышей с конфокальной Light Sheet микроскопии

Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Генетических манипуляций мозжечка Granule нейронов<em&gt; Экстракорпоральное</em&gt; И<em&gt; В Vivo</em&gt; По изучению нейронных Морфология и миграция

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

Обонятельная система как модель для изучения характера роста аксонов и морфология<em&gt; В Vivo</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Подготовка фрагментов острого мозга, с помощью оптимизированного N-метил-D-glucamine защитные восстановления метод

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Preparation of Non-human Primate Brain Tissue for Pre-embedding Immunohistochemistry and Electron Microscopy

Получение нечеловеческих приматов ткани головного мозга для предварительного внедрения иммуногистохимии и электронной микроскопии

Despite all the technological advances at the light microscopy&#160;level, electron microscopy remains the only tool in neuroscience to examine and ...

Preparation of Newborn Rat Brain Tissue for Ultrastructural Morphometric Analysis of Synaptic Vesicle Distribution at Nerve Terminals

Подготовка ткани мозга новорожденных крыс для ультраструктурного морфометрического анализа синаптической везикл распределения в нервных терминалах

Our laboratory and many others have exploited the high resolving power of transmission electron microscopy to study the morphology and spatial ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

Гидрофобный метод очистки тканей для ткани мозга крыс

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...