Name: preparation of mouse brain tissue for immunoelectron microscopy
Uploaded: 2010-07-20T17:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy at JoVE.com

Vi tackar Shao-Ming Lu och Harris A. Gelbard för användning av ett peristaltiska pumpar och vibratome samt Karen L. Bentley och Gayle Schneider på ett elektronmikroskop Forskning Core Facility vid University of Rochester Medical Center för tekniskt stöd. Detta arbete har finansierats genom anslag från NIH (EY019277), Whitehall Foundation, Burroughs Wellcome Fund och Alfred P. Sloan Foundation för AKM. M.-È.T. finansieras av en Fonds de la recherche en Santé du Québec (FRSQ) postdoktoral utbildning utmärkelse.

1. Animal perfusion <ol><li> På dagen innan perfusion, förbereda: - 2 L fosfatbuffert (PB, 100 mm, pH 7,4) och 1 l av natriumfosfat-saltlösning (PBS, 0,9% NaCl i 50 mm PB, pH 7,4) i dubbeldestillerat vatten. Förvara PBS och 1L av PB vid 4 ° C. Dessa kommer att användas för perfusion och pre-inbäddning immuncytokemi. - 1L på 4,0% paraformaldehyd (PFA, pH 7,4) fixativ lösning som gör det möjligt att genomblödningen i 6 möss. För detta ändamål, hetta upp 1 L i PB I ett dragskåp. Väg 40 g ...

<ol>
	<li>Venable, J. H., Coggeshall, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+lead+citrate+stain+for+use+in+electron+microscopy.">A simplified lead citrate stain for use in electron microscopy.</a> J Cell Biol. 25, 407-407 (1965).</li><li>Riad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatodendritic+localization+of+5-HT1A+and+preterminal+axonal+localization+of+5-HT1B+serotonin+receptors+in+adult+rat+brain.">Somatodendritic localization of 5-HT1A and preterminal axonal localization of 5-HT1B serotonin receptors in adult rat brain.</a> J Comp Neurol. 417 (2), 181-181 (2000).</li><li>Tremblay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+EphA4+in+axon+terminals+and+dendritic+spines+of+adult+rat+hippocampus.">Localization of EphA4 in axon terminals and dendritic spines of adult rat hippocampus.</a> J Comp Neurol. 501 (5), 691-691 (2007).</li><li>Tremblay, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+course+of+EphA4+cellular+and+subcellular+localization+in+the+postnatal+rat+hippocampus.">Developmental course of EphA4 cellular and subcellular localization in the postnatal rat hippocampus.</a> J Comp Neurol. 512 (6), 798-798 (2009).</li><li>Bouvier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-synaptic+and+post-synaptic+localization+of+EphA4+and+EphB2+in+adult+mouse+forebrain.">Pre-synaptic and post-synaptic localization of EphA4 and EphB2 in adult mouse forebrain.</a> J Neurochem. 106 (2), 682-682 (2008).</li><li>Bouvier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EphA4+is+localized+in+clathrin-coated+and+synaptic+vesicles+in+adult+mouse+brain.">EphA4 is localized in clathrin-coated and synaptic vesicles in adult mouse brain.</a> J Neurochem. , (2010).</li></ol>

Här har vi beskrivit ett protokoll för förberedelser av mus hjärnvävnad för immunoelectron mikroskopi som ger en utmärkt kompromiss mellan optimal ultrastrukturella bevarande och immuncytokemiska upptäckt, när de förfaranden som rigoröst utförs. I kombination med TEM, möjliggör denna metod för att skilja cellulära element med några särdrag och kriterier identifiering. I synnerhet möjliggör immunofluorescensteknik-DAB färgning av Iba1 att identifiera microglial perikarya ...

* Man bör alltid arbeta under ett dragskåp och bära nitrilhandskar vid hantering Akrolein, paraformaldehyd och osmium och bör också göra sig av med sitt avfall på rätt sätt.

preparation of mouse brain tissue for immunoelectron microscopy

Transmissionselektronmikroskop (TEM) är mycket användbar för att visualisera microglial, oligodendrocytic, astrocytic och neuronala subcellulära fack (Dendrite, dendritiska ryggrad, axonet, axonet terminal, perikaryon), samt deras intracellulära organeller och cytoskelettet, i det centrala nervsystemet vid hög rumslig upplösning. I kombination med TEM, kan pre-inbäddning immuncytokemi diskriminering av cellulära element med några särdrag och kriterier legitimation (t.ex. microglial perikarya och processer, när du använder en antikropp mot mikroglia-specifik markör Iba1 (joniserat kalcium bindande adapter molekyl 1, som presenteras här)), identifiera signalsubstansen innehållet av cellulära element (t.ex. serotonerga) och deras ultrastrukturella lokalisering av lösliga och membranbundna proteiner (t.ex. 5 HT1A och EphA4 receptorer). Här beskriver vi ett protokoll för transcardiac perfusion av möss med Akrolein fixativ, borttagning och sektionering av hjärnan, samt immunofluorescensteknik-Diaminobenzidin (DAB) färgning, harts inbäddning och supertunna sektionering av hjärnan sektioner. Efter slutförandet av dessa förfaranden, är immunostained materialet redo för undersökning med TEM. När rigoröst utföras, ger denna teknik en utmärkt kompromiss mellan optimal ultrastrukturella bevarande och immuncytokemiska upptäckt.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy at JoVE.com

Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy

Vi beskriver ett protokoll för transcardiac perfusion av möss, demontering och sektionering av hjärnan, samt immunofluorescensteknik färgning, harts inbäddning och supertunna sektionering av hjärnan sektioner. Efter slutförandet av dessa förfaranden, är immunostained materialet redo för undersökning med transmissionselektronmikroskopi.

Beredning av Mouse hjärnvävnad för Immunoelectron mikroskopi

Transmission electron microscopy (TEM) is extremely useful for visualizing microglial, oligodendrocytic, astrocytic, and neuronal subcellular compartments ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focussed Ion Beam Milling and Scanning Electron Microscopy of Brain Tissue

Fokuserad jonstråle Fräsning och Svepelektronmikroskopi av hjärnvävnad

This protocol describes how biological samples, like brain tissue, can be imaged in three dimensions using the focussed ion beam/scanning electron ...

Multiphoton Microscopy of Cleared Mouse Brain Expressing YFP

Multiphoton Mikroskopi av Rensat mushjärna uttrycker YFP

Multiphoton microscopy of intrinsic fluorescence and second harmonic generation (SHG) of whole mouse organs is made possible by optically clearing the ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Funktionell hjärnavbildning med ultraljud Blod-hjärnbarriären störningar och mangan-förstärkt MRT

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Micron-scale Resolution Optical Tomography of Entire Mouse Brains with Confocal Light Sheet Microscopy

Micron-skala Upplösning Optisk Tomography för hela musen hjärnor med Confocal Ljus Sheet mikroskopi

Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation av Cerebellar granulneuroner<em&gt; In Vitro</em&gt; Och<em&gt; In Vivo</em&gt; Att studera neuronal morfologi och migration

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

Luktsystemet som en modell för att studera axonal tillväxt Mönster och morfologi<em&gt; In Vivo</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Beredning av akut hjärnskada skivor använder en optimerad N-metyl-D-glucamine skyddande återställningsmetod

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Preparation of Non-human Primate Brain Tissue for Pre-embedding Immunohistochemistry and Electron Microscopy

Framställning av icke-mänskliga primater hjärnvävnad för Pre-inbäddning Immunohistokemi och elektronmikroskopi

Despite all the technological advances at the light microscopy&#160;level, electron microscopy remains the only tool in neuroscience to examine and ...

Preparation of Newborn Rat Brain Tissue for Ultrastructural Morphometric Analysis of Synaptic Vesicle Distribution at Nerve Terminals

Beredning av nyfödda råtta hjärn vävnad för ultrastrukturella Morphometric analys av synaptic Vesicle distribution på Nervterminaler

Our laboratory and many others have exploited the high resolving power of transmission electron microscopy to study the morphology and spatial ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

En hydrofobisk vävnadsrensningsmetod för råtta hjärnvävnad

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...