Bereid om te beginnen DNA's één behandeld AAV-monster en de dd_PCR mastermix voor. Voeg 2,2 microliter van het verdunde monster toe aan 19,8 microliter dd_PCR mastermix in elk buisje van de PCR-strip met acht buisjes en meng goed. Breng 20 microliter van het mengsel over in de putjes in de middelste monsterrij van een druppelgenererende patroon.
Breng vervolgens 60 microliter druppelgeneratieolie over naar de putjes in de onderste olierij van de druppelgenererende cartridge. Plaats een rubberen pakking over de druppelgenererende cartridge en plaats deze vervolgens in de druppelgenerator. Nadat de druppels zijn gegenereerd, gebruikt u een achtkanaalspipet om langzaam 42,5 microliter oplossing over te brengen van de druppelgeneratiecartridge naar een PCR-plaat met meerdere putjes.
Sluit de PCR-plaat af met een aluminiumfoliedeksel met behulp van een heatsealmachine gedurende vijf seconden op 180 graden Celsius. Plaats voor versterking de plaat in een thermische cycler met een 96-diepe putreactiemodule en sluit deze stevig af en voer het PCR-programma uit. Als u klaar bent, laadt u de plaat in een druppellezer, voert u de vereiste informatie in de systeemsoftware in en begint u met lezen.
Een duidelijke scheiding tussen positieve en negatieve druppels werd waargenomen in de 1D-amplitudeplot, wat wijst op een succesvolle meting. De tweede 1D-amplitudegrafiek toonde druppelregen met druppeltjes verspreid tussen de positieve en negatieve wolken, wat wijst op een mogelijk probleem met de meetnauwkeurigheid. De outputgegevens van een AAV-run vertoonden consistente resultaten wanneer één monster in duplicaten werd gemeten bij twee verschillende verdunningen.
