Pour commencer, préparez l’échantillon AAV traité de DNA et le dd_PCR master mix. Ajoutez 2,2 microlitres de l’échantillon dilué à 19,8 microlitres de dd_PCR mélange principal dans chaque tube de la bandelette PCR à huit tubes et mélangez bien. Transférez 20 microlitres du mélange dans les puits contenus dans la rangée d’échantillon centrale d’une cartouche génératrice de gouttelettes.
Transférez ensuite 60 microlitres d’huile génératrice de gouttelettes dans les puits contenus dans la rangée inférieure d’huile de la cartouche génératrice de gouttelettes. Placez un joint en caoutchouc sur la cartouche génératrice de gouttelettes, puis placez-le dans le générateur de gouttelettes. Une fois les gouttelettes générées, utilisez une pipette à huit canaux pour transférer lentement 42,5 microlitres de solution de la cartouche de génération de gouttelettes vers une plaque PCR multi-puits.
Scellez la plaque PCR avec un couvercle en papier d’aluminium à l’aide d’une machine à thermosouder pendant cinq secondes à 180 degrés Celsius. Pour l’amplification, placez la plaque dans un thermocycleur avec un module de réaction à 96 puits de profondeur, fermez-la solidement et exécutez le programme PCR. Une fois cela fait, chargez la plaque dans un lecteur de gouttelettes, entrez les informations requises dans le logiciel système et commencez la lecture.
Une séparation claire entre les gouttelettes positives et négatives a été observée dans le graphique d’amplitude 1D, suggérant une mesure réussie. Le deuxième graphique d’amplitude 1D a montré une pluie de gouttelettes dispersées entre les nuages positifs et négatifs, indiquant un problème potentiel de précision de mesure. Les données de sortie d’un cycle AAV ont montré des résultats cohérents lorsqu’un échantillon a été mesuré en double à deux dilutions différentes.
