Börja med att förbereda DNA:s ena behandlade AAV-prov och den dd_PCR mastermixen. Tillsätt 2,2 mikroliter av det utspädda provet till 19,8 mikroliter dd_PCR huvudblandning i varje rör i PCR-åttarörsremsan och blanda väl. Överför 20 mikroliter av blandningen till brunnarna i den mellersta provraden i en droppgenererande patron.
Överför sedan 60 mikroliter droppgenererande olja till brunnarna i den nedre oljeraden i den droppgenererande patronen. Placera en gummipackning över den droppgenererande patronen och placera den sedan i droppgeneratorn. Efter att dropparna har genererats, använd en åttakanalig pipett för att långsamt överföra 42.5 mikroliter lösning från droppgenereringspatronen till en PCR-platta med flera brunnar.
Försegla PCR-plattan med ett aluminiumfolieskydd med hjälp av en värmeförseglingsmaskin i fem sekunder vid 180 grader Celsius. För amplifiering, placera plattan i en termisk cykler med en 96-djup reaktionsmodul och stäng den ordentligt och kör PCR-programmet. När du är klar laddar du plattan i en droppläsare, matar in nödvändig information i systemprogramvaran och startar avläsningen.
En tydlig separation mellan positiva och negativa droppar observerades i 1D-amplituddiagrammet, vilket tyder på en lyckad mätning. Det andra 1D-amplituddiagrammet visade droppregn med droppar utspridda mellan de positiva och negativa molnen, vilket indikerar ett potentiellt problem med mätnoggrannheten. Utdata från en AAV-körning visade konsekventa resultat när ett prov mättes i duplikat vid två olika utspädningar.
