Name: microdissection of zebrafish embryonic eye tissues
Uploaded: 2010-06-27T23:34:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues at JoVE.com

ويؤيد هذا العمل من قبل صندوق بدء التشغيل من قسم العلوم البيولوجية في جامعة بوردو.

الجزء 1 : التحضيرات قبل microdissection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحلول <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> E3 المتوسطة 4 (5 ملي مول كلوريد الصوديوم ، 0.17 ملي بوكل ، 0.33 ملي CaCl 2 و 0.33 ملي MgSO 4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"...

<ol>
	<li>Leung, Y. F., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiling+of+zebrafish+embryonic+retina.">Gene expression profiling of zebrafish embryonic retina.</a> Zebrafish. 2, 269-283 (2005).</li><li>Leung, Y. F., Ma, P., Link, B. A., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factorial+microarray+analysis+of+zebrafish+retinal+development.">Factorial microarray analysis of zebrafish retinal development.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, 12909-12914 (2008).</li><li>Leung, Y. F., Ma, P., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiling+of+zebrafish+embryonic+retinal+pigment+epithelium+in+vivo.">Gene expression profiling of zebrafish embryonic retinal pigment epithelium in vivo.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 48, 881-890 (2007).</li><li>Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish : a practical approach. , (2002).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+book+:+a+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio+rerio).">The zebrafish book : a guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> , (2000).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Fadool, J. M., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+a+model+system+for+the+study+of+eye+genetics.">Zebrafish: a model system for the study of eye genetics.</a> Prog Retin Eye Res. 27, 89-110 (2008).</li></ol>

ويمكن للأنسجة العين Microdissection الزرد الحصول على شبكية العين سليمة وفعالة شبكية العين RPE المرفقة. هذا يساعد كثيرا الدراسات المتعلقة التعبير نسيج العين محددة (شبكية العين أو أي RPE). في الواقع ، لقد نجحنا في استغلال هذه الإجراءات للحصول على الحمض النووي الريبي ملامح التعبي...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Cordless pestle motor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>47747-370</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DC power supply</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lascar</td>
<td>PSU130</td>
<td>Any DC supply would work. The specific voltage of a different machine will need further optimization.</td>
</tr>
<tr>
<td>Disposable pestle &amp; microtube, 1.5 mL (DNase, RNase and pyrogen-free)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>47747-366</td>
<td>These are used for tissue collection in TRIzol for expression analysis.</td>
</tr>
<tr>
<td>Dumont #5 forceps, Tips: 0.05 x 0.01mm, Inox</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>500341</td>
<td>Fine tip dimension is desirable but is not inflexible, as one may need to sharpen the tip from time to time.</td>
</tr>
<tr>
<td>Dumont #5SF forceps, Tips: 0.025 x 0.005mm, Inox</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11252-00</td>
<td>Fine tip dimension is desirable but is not inflexible, as one may need to sharpen the tip from time to time.</td>
</tr>
<tr>
<td>Falcon polystyrene culture plates, 60 X 15 mm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>351007</td>
<td>These plates are used as dissection plates.</td>
</tr>
<tr>
<td>Olympus SZX16 Stereomicroscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>SZX16</td>
<td>Any stereomicroscope would work. We used Leica stereomicroscope in previous studies1-3 without any issues. We also use the 1X objective exclusively for the dissection even though we have a 2X objective installed. </td>
</tr>
<tr>
<td>Sharpening stone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>29008-01</td>
<td>Use this to sharpen the tip of the forceps if necessary</td>
</tr>
<tr>
<td>Thermo plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tokai Hit</td>
<td>MATS-U55SZX2B</td>
<td>This is used to maintain the temperature of the tissue throughout dissection and minimize the influence of temperature fluctuation on gene expression. We also put the whole microscope in an environmentally controlled room at 28&deg;C during dissection in previous studies1-3 with good success.</td>
</tr>
<tr>
<td>Trizol, 100 mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15596-026</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>tungsten wire, 0.015 inch diameter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>TGW1510</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wooden Applicator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Puritan</td>
<td>807</td>
<td>This is used for holding the chemically-etched tungsten needle.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

microdissection of zebrafish embryonic eye tissues

الزرد هو نموذج حيواني شعبية للبحث حول التنمية بسبب العين السريعة لها<em&gt; السابقين الرحم</em&gt; التنمية والخصوبة جيدة. قبل 3 أيام الإخصاب آخر (DPF) ، سوف تظهر اليرقات أول استجابة بصرية. وقد تم تحديد العديد من الجينات لمراقبة تطور العين سليمة ، ولكن ما زلنا بعيدين عن فهم كامل للبنية الوراثية الكامنة. كامل التعبير الجيني التنميط الجينوم هو أداة مفيدة لتوضيح الشبكة التنظيمية الجينية للتنمية العين. ومع ذلك ، فإن صغر حجم العين الجنينية في الزرد يجعلها صعبة للحصول على أنسجة العين سليمة ونقية للتحليل التعبير. على سبيل المثال ، وطول الأمامي الخلفي للعين بين 2 و 3 ايام فقط ما يقرب من 200-300 ميكرون ، في حين أن قطر العدسة أقل ميكرومتر 100. أيضا ، والظهارة الصبغية الشبكية (RPE) الكامنة وراء شبكية العين هو مجرد الظهارة طبقة واحدة. في حين يمكن الحصول على ملامح التعبير الجيني من الجنين كله ، فهي لا تمثل بدقة التعبير عن هذه الأنسجة. بالتالي لا بد من الحصول على نسيج النقي عن التنميط الجيني التعبير ناجحا للتنمية العين. لمعالجة هذه المسألة ، وقد طورنا نهجا لmicrodissect الشبكية سليمة وشبكية العين مع RPE المرفق من DPF 1-3 ، والتي تغطي المراحل الرئيسية التشكل العين. يمكن أن تتم جميع الإجراءات مع ملقط غرامة ولوازم المختبرات العامة في إطار stereomicroscopes القياسية. لتشريح الشبكية ، تتم إزالة RPE طبقة واحدة ، وخلع من قبل التنظيف العمل والتقيد تفضيلية من مخلفات RPE على سطح لوحة الثقافة لتشريح. لRPE المرفقة تشريح الشبكية ، تتم إزالة RPE انضمام إلى لوحة تشريح قبل تشريح بحيث يمكن للRPE تماما مع الحفاظ على شبكية العين. ويمكن لعمل دقيق لرفع هذا النسيج منفصلة بكفاءة المشيمية الظنية والصلبة. ويمكن إزالة العدسة في كلتا الحالتين بواسطة إبرة التنغستن محفورا كيميائيا. باختصار ، يمكن الحصول على نهجنا أنسجة العين سليمة ، واستخدمت بنجاح لدراسة ملامح الأنسجة محددة التعبير الشبكية الزرد<sup&gt; 1 ، 2</sup&gt; والشبكية الصباغ الظهارة<sup&gt; 3</sup&gt;.

Watch this Scientific Journal Video about Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues at JoVE.com

Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

توضح هذه المقالة نهج لشبكية العين microdissect الزرد مع وبدون صباغ الشبكية ظهارة المرفقة ، 1-3 أجنة postfertilization يوما.

Microdissection من الأنسجة الجنينية العين اسماك الزرد

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post ...

Research

JoVE Journal

Biology

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

الليزر Microdissection القبض على أنسجة الثدييات

Laser capture microscopy, also known as laser microdissection (LMD), enables the user to isolate small numbers of cells or tissues from frozen or ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

يعيش تصوير الدماغ الجنينية اسماك الزرد بواسطة الميكروسكوب متحد البؤر

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants

زرع عدسة في اسماك الزرد وتطبيقاتها في تحليل المسوخ العين

The lens plays an important role in the development of the optic cup[1,2]. Using the zebrafish as a model organism, questions regarding lens development ...

Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation

الأنسجة الجنينية الوهم المستهدفة : اسماك الزرد المعيدة زرع الخلايا

Certain fundamental questions in the field of developmental biology can only be answered when cells are placed in novel environments or when small groups ...

RNA Isolation from Embryonic Zebrafish and cDNA Synthesis for Gene Expression Analysis

عزل الحمض النووي الريبي من الجنينية التجميعي واسماك الزرد [كدنا] لتحليل الجينات

Many important and complex laboratory procedures require an input of high quality, intact RNA.  A degraded sample or the presence of impurities can lead ...

Microdissection of Black Widow Spider Silk-producing Glands

Microdissection الغدد الارملة السوداء الحرير المنتجة العنكبوت

Modern spiders spin high-performance silk fibers with a broad range of biological functions, including locomotion, prey capture and protection of ...

Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart

Immunostaining تشريح القلب الجنينية اسماك الزرد

Zebrafish embryo becomes a popular in vivo vertebrate model for studying cardiac development and human heart diseases due to its advantageous embryology ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

نظام ل<em&gt; خارج الجسم</em&gt; التثقيف البنكرياس الجنينية

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

الليزر بإلحاق الضرر من العضلات الهيكلية اسماك الزرد الجنينية

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

تحليل الجنينية واليرقات الزرد الهيكل العظمي Myofibers من الاستعدادات فصلها

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...