Name: microdissection of zebrafish embryonic eye tissues
Uploaded: 2010-06-27T23:34:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues at JoVE.com

Este trabajo es apoyado por un fondo de arranque desde el Departamento de Ciencias Biológicas de la Universidad de Purdue.

Parte 1: Preparativos antes de microdisección <ol><li> Soluciones <ol class="lalpha"><li> E3 medio 4 (5 mM NaCl, 0,17 mM KCl, 0,33 mM CaCl 2 y 0,33 mM MgSO 4). </li><li> Solución de Ringer 1, 5 (116 mM NaCl, 2,9 mM KCl, 1,8 mM CaCl 2, 5 mM HEPES, pH 7.2), esterilizado por filtración. </li><li> NaOH 5N. </li></ol></li><li> Ataque químico de las agujas de tungsteno <ol class="lalpha"><li> Asegurar un pequeño vaso que contiene NaOH 5 N en una placa de Petri de a...

<ol>
	<li>Leung, Y. F., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiling+of+zebrafish+embryonic+retina.">Gene expression profiling of zebrafish embryonic retina.</a> Zebrafish. 2, 269-283 (2005).</li><li>Leung, Y. F., Ma, P., Link, B. A., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factorial+microarray+analysis+of+zebrafish+retinal+development.">Factorial microarray analysis of zebrafish retinal development.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, 12909-12914 (2008).</li><li>Leung, Y. F., Ma, P., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiling+of+zebrafish+embryonic+retinal+pigment+epithelium+in+vivo.">Gene expression profiling of zebrafish embryonic retinal pigment epithelium in vivo.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 48, 881-890 (2007).</li><li>Nusslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish : a practical approach. , (2002).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+book+:+a+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio+rerio).">The zebrafish book : a guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> , (2000).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Fadool, J. M., Dowling, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+a+model+system+for+the+study+of+eye+genetics.">Zebrafish: a model system for the study of eye genetics.</a> Prog Retin Eye Res. 27, 89-110 (2008).</li></ol>

Microdisección de los tejidos del ojo de pez cebra puede efectivamente obtener la retina intacta y las retinas de RPE-adjunto. Esto ayuda considerablemente los estudios de expresión pertenecientes a un tejido ocular específico (es decir, la retina o RPE). De hecho, hemos utilizado con éxito estos procedimientos para obtener los perfiles de expresión de ARN de toda la retina y el EPR 1 3. La utilidad de estos perfiles es apoyado fuertemente por nuestra reciente identificación de las vías y las familias ...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Cordless pestle motor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>47747-370</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DC power supply</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lascar</td>
<td>PSU130</td>
<td>Any DC supply would work. The specific voltage of a different machine will need further optimization.</td>
</tr>
<tr>
<td>Disposable pestle &amp; microtube, 1.5 mL (DNase, RNase and pyrogen-free)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>47747-366</td>
<td>These are used for tissue collection in TRIzol for expression analysis.</td>
</tr>
<tr>
<td>Dumont #5 forceps, Tips: 0.05 x 0.01mm, Inox</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>500341</td>
<td>Fine tip dimension is desirable but is not inflexible, as one may need to sharpen the tip from time to time.</td>
</tr>
<tr>
<td>Dumont #5SF forceps, Tips: 0.025 x 0.005mm, Inox</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11252-00</td>
<td>Fine tip dimension is desirable but is not inflexible, as one may need to sharpen the tip from time to time.</td>
</tr>
<tr>
<td>Falcon polystyrene culture plates, 60 X 15 mm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>351007</td>
<td>These plates are used as dissection plates.</td>
</tr>
<tr>
<td>Olympus SZX16 Stereomicroscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>SZX16</td>
<td>Any stereomicroscope would work. We used Leica stereomicroscope in previous studies1-3 without any issues. We also use the 1X objective exclusively for the dissection even though we have a 2X objective installed. </td>
</tr>
<tr>
<td>Sharpening stone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>29008-01</td>
<td>Use this to sharpen the tip of the forceps if necessary</td>
</tr>
<tr>
<td>Thermo plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tokai Hit</td>
<td>MATS-U55SZX2B</td>
<td>This is used to maintain the temperature of the tissue throughout dissection and minimize the influence of temperature fluctuation on gene expression. We also put the whole microscope in an environmentally controlled room at 28&deg;C during dissection in previous studies1-3 with good success.</td>
</tr>
<tr>
<td>Trizol, 100 mL</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15596-026</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>tungsten wire, 0.015 inch diameter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>TGW1510</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wooden Applicator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Puritan</td>
<td>807</td>
<td>This is used for holding the chemically-etched tungsten needle.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

microdissection of zebrafish embryonic eye tissues

Pez cebra es un modelo animal popular para la investigación sobre el desarrollo del ojo, debido a su rápida<em&gt; Ex utero</em&gt; El desarrollo y la fecundidad buena. A los 3 días después de la fertilización (dpf), las larvas se mostrará la primera respuesta visual. Muchos genes se han identificado para el control de un desarrollo adecuado de los ojos, pero estamos lejos de una comprensión completa de la arquitectura genética subyacente. Gen de todo el genoma de perfiles de expresión es una herramienta útil para dilucidar red de regulación genética para el desarrollo del ojo. Sin embargo, el pequeño tamaño del ojo de embriones de pez cebra hace que sea difícil obtener los tejidos del ojo intacto y puro para análisis de la expresión. Por ejemplo, la longitud antero-posterior del ojo, entre el día 2 y 3 es de sólo unos 200 a 300 micras, mientras que el diámetro de la lente es m menos de 100. Además, el epitelio pigmentario retiniano (EPR) que subyacen a la retina es un epitelio de una sola capa. Mientras que los perfiles de expresión genética se puede obtener de todo el embrión, que no representan con precisión la expresión de estos tejidos. Por lo tanto el tejido puro debe ser obtenido por un perfil de expresión génica con éxito el desarrollo del ojo. Para solucionar este problema, hemos desarrollado un enfoque para microdissect retina intacta y la retina con el EPR adjunto de fdd 1-3, que abarcan las principales etapas de la morfogénesis del ojo. Todos los procedimientos se puede hacer con unas pinzas finas y suministros generales de laboratorio con microscopios estereoscópicos estándar. Para la disección de la retina, el EPR de una sola capa se elimina y se quitó el cepillo de acción y la adhesión preferencial de los restos del EPR a la superficie de la placa de cultivo para la disección. Para RPE-adjunta la disección de retina, la adhesión de RPE de la placa de la disección se produce antes de la disección a fin de que el EPR puede ser conservado en su totalidad con la retina. Una acción de elevación cuidadosa de este tejido permite la separación de la coroides y la esclerótica presunto. La lente se puede quitar en ambos casos por una aguja de tungsteno grabada químicamente. En resumen, nuestro enfoque puede obtener tejidos intactos los ojos y ha sido utilizado con éxito para el estudio de tejidos específicos perfiles de expresión de la retina del pez cebra<sup&gt; 1, 2</sup&gt; Y el epitelio pigmentario de la retina<sup&gt; 3</sup&gt;.

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Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

Este artículo describe un método para microdissect retinas del pez cebra con y sin epitelio pigmentario de la retina adjunta, de uno a tres embriones postfertilización días.

Microdisección de los tejidos del ojo de pez cebra embrionarias

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post ...

Research

JoVE Journal

Biology

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

Láser microdisección de captura de tejidos de mamíferos

Laser capture microscopy, also known as laser microdissection (LMD), enables the user to isolate small numbers of cells or tissues from frozen or ...

Investigación

Biología

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Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants

Trasplante de lentes en el pez cebra y su aplicación en el análisis de mutantes de ojos

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Tejido diana quimeras embrionarias: pez cebra Gástrula Trasplante de células

Certain fundamental questions in the field of developmental biology can only be answered when cells are placed in novel environments or when small groups ...

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Aislamiento del ARN de síntesis embrionarias pez cebra y el cDNA de análisis de expresión génica

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Microdisección de Negro Araña Viuda producción de las glándulas de seda

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Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart

Inmunotinción de Disección del corazón embrionario de pez cebra

Zebrafish embryo becomes a popular in vivo vertebrate model for studying cardiac development and human heart diseases due to its advantageous embryology ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

Un sistema para la<em&gt; Ex vivo</em&gt; Cultivo de páncreas embrionario

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

Laser-infligido lesiones de músculo esquelético embrionario de pez cebra

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Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

Análisis de embriones y larvas de pez cebra esqueléticas miofibras de Preparativos disociadas

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...