Name: experimental models for study of retinal pigment epithelial physiology and pathophysiology
Uploaded: 2010-11-06T17:00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Experimental Models for Study of Retinal Pigment Epithelial Physiology and Pathophysiology at JoVE.com

نشكر مختبر أعضاء جيفري Adijanto ، بانزون تينا ، لى رونغ ، وان تشين تشانغ Congxiao ، زهاو جينغ تشى كوني ، ضياء عويس ، Strunnikova ناتاليا للمساعدة في تشخيص هذه الثقافات الخلية. شكر خاص الى زهاو جينغ تشى كوني ، وتينا بانزون لمساعدتهم في الحفاظ على مخزونات كبيرة من الثقافات الخلية. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للبرنامج البحوث الصحية الجماعية.

<ol>
	<li>Bharti, K., Miller, S. S., Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+new+paradigm:+Retinal+pigment+epithelium+cells+generated+from+embryonic+stem+cells+or+induced+pluripotent+cells.">The new paradigm: Retinal pigment epithelium cells generated from embryonic stem cells or induced pluripotent cells.</a> Pigment Cell &#38; Melanoma Research. , .</li><li>Strunnikova, N. V., Maminishkis, A., Barb, J. J., Wang, F., Zhi, C., Sergeev, Y., Chen, W., Edwards, A. O., Stambolian, D., Abecasis, G., Swaroop, A., Munson, P. J., Miller, S. S., S, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+analysis+and+molecular+signature+of+human+retinal+pigment+epithelium.">Transcriptome analysis and molecular signature of human retinal pigment epithelium.</a> Hum Mol Genet. 19 (12), 2468-2486 (2010).</li><li>Miller, S. S., Maminishkis, A., Li, R., Adijanto, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+184:+Phototransduction:+RPE+transport+Retina+Phototransduction:+RPE+transport.">Chapter 184: Phototransduction: RPE transport Retina Phototransduction: RPE transport.</a> Encyclopedia of the Eye. , 2540-2540 (2010).</li><li>Bryant, D. M., Mostov, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+cells+to+organs:+Building+polarized+tissue.">From cells to organs: Building polarized tissue.</a> Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 9 (11), 887-901 (2008).</li><li>Maminishkis, A., Chen, S., Jalickee, S., Banzon, T., Shi, G., Wang, F. E., Ehalt, T., Hammer, J. A., Miller, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confluent+monolayers+of+cultured+human+fetal+retinal+pigment+epithelium+exhibit+morphology+and+physiology+of+native+tissue.">Confluent monolayers of cultured human fetal retinal pigment epithelium exhibit morphology and physiology of native tissue.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 47, 3612-3624 (2006).</li><li>Shi, G., Maminishkis, A., Banzon, T., Jalickee, S., Li, R., Hammer, J., Miller, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+chemokine+gradients+by+the+retinal+pigment+epithelium.">Control of chemokine gradients by the retinal pigment epithelium.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 4620-4630 (2008).</li><li>Economopoulou, M., Hammer, J., Wang, F. E., Fariss, R., Maminishkis, A., Miller, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression,+localization,+and+function+of+junctional+adhesion+molecule-C+(JAM-C)+in+human+retinal+pigment+epithelium.">Expression, localization, and function of junctional adhesion molecule-C (JAM-C) in human retinal pigment epithelium.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50 (3), 1454-1463 (2008).</li><li>Li, R., Maminishkis, A., Banzon, T., Wan, Q., Jalickee, S., Chen, S., Miller, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IFN{gamma}+Regulates+Retinal+Pigment+Epithelial+Fluid+Transport.">IFN{gamma} Regulates Retinal Pigment Epithelial Fluid Transport.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 297, C1452-C1465 (2009).</li><li>Li, R., Maminishkis, A., Wang, F. E., Miller, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDGF-C+and+-D+induced+proliferation/migration+of+human+RPE+is+abolished+by+inflammatory+cytokines.">PDGF-C and -D induced proliferation/migration of human RPE is abolished by inflammatory cytokines.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 48, 5722-5732 (2007).</li><li>Maminishkis, A., Jalickee, S., Blaug, S. A., Rymer, J., Yerxa, B. R., Peterson, W. M., Miller, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+P2Y(2)+receptor+agonist+INS37217+stimulates+RPE+fluid+transport+in+vitro+and+retinal+reattachment+in+rat.">The P2Y(2) receptor agonist INS37217 stimulates RPE fluid transport in vitro and retinal reattachment in rat.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 43, 3555-3566 (2002).</li><li>Wang, F. E., Zhang, C., Maminishkis, A., Dong, L., Zhi, C., Li, R., Zhao, J., Majerciak, V., Gaur, A. B., Chen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-204/211+alters+epithelial+physiology.">MicroRNA-204/211 alters epithelial physiology.</a> FASEB J. 24, (2010).</li><li>Adijanto, J., Banzon, T., Jalickee, S., Wang, N. S., Miller, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CO2-induced+ion+and+fluid+transport+in+human+retinal+pigment+epithelium.">CO2-induced ion and fluid transport in human retinal pigment epithelium.</a> J Gen Physiol. 133, 603-622 (2009).</li><li>Li, R., Maminishkis, A., Zahn, G., Vossmeyer, D., Miller, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin+alpha5beta1+mediates+attachment,+migration,+and+proliferation+in+human+retinal+pigment+epithelium:+relevance+for+proliferative+retinal+disease.">Integrin alpha5beta1 mediates attachment, migration, and proliferation in human retinal pigment epithelium: relevance for proliferative retinal disease.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50, 5988-5996 (2009).</li><li>Peterson, W. M., Meggyesy, C., Yu, K., Miller, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+activates+calcium+signaling,+ion,+and+fluid+transport+in+retinal+pigment+epithelium.">Extracellular ATP activates calcium signaling, ion, and fluid transport in retinal pigment epithelium.</a> J Neurosci. 17, 2324-2337 (1997).</li><li>Voloboueva, L. A., Liu, J., Suh, J. H., Ames, B. N., Miller, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R)-alpha-lipoic+acid+protects+retinal+pigment+epithelial+cells+from+oxidative+damage.">R)-alpha-lipoic acid protects retinal pigment epithelial cells from oxidative damage.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 46, 4302-4310 (2005).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

في تجارب الحاضر ، ونحن تصف تعديلات إضافية من التقنيات التي تم نشرها مسبقا لدينا 3 تهدف إلى تبسيط الخطوات اللازمة لإنتاج متعددة الثقافات بما يتفق الأولية hfRPE مع ارتفاع عدد الخلايا المتاحة في العين. تم اختبار صارم كل تغيير في الإجراء الأصلي في علم وظائف الأعضاء وتجارب متعددة البيولوجيا الجزيئية للتأكد من أن التغييرات لم يعرض القطع الاثرية والتي يجري اختبارها باستمرار من قبل مختبرات أخرى كثيرة باستخدام هذه الخلايا. أخيرا ، أجريت تجارب إضافية إلى مقارنة في نتائج المختبر للاضطرابات مماثلة في النماذج الحيوانية.

الصكوك اللازمة لبروتوكول تشريح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ستيريو المجهر -- أي التكبير المتاحة مع x250 العمل اللازمة لتشريح </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح طبق -- على سبيل المثال 100 × 20mm كيمبل # 23062 (واحد لكل تشريح) أي مصدر </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Sylgard 184 -- WPI القط. # * SYLG184 * لتحضير طبق تشريح اتبع التعليمات شملت 184 Sylgard الاختلاط ، صب السائل الاستومر مختلطة في طبق بتري لتشكيل 5 - 8MM طبقة. الاستومر تسمح لعلاج لمدة لا تقل 24hrs. يمكن تعقيم الطبق مع الاستومر الشفاء باستخدام الايثانول 70 ٪ وإعادة استخدامها مرات عدة (~ 100 مرات) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 27 G من الإبر PrecissionGlide دينار بحريني 1 ¼ مدة (5 في تشريح) أي مصدر </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> HBSS 1X محلول يحتوي على أملاح الكالسيوم والمغنيسيوم -- GIBCO القط # 14025 500ml (جيد للتشريح متعددة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقص القزحية كربيد مسننة النصل ، منحني -- FST القط # 14559-11 (واحد). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشبكية مقص -- Katena القط # K4 - 5300 (واحد). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملقط -- على سبيل المثال دومون الملقط # 5 مصقول مع نصائح من القط WPI # 500085 (2 قطعة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Sideport سكين -- ألكون ، 1MM اضح المعالم ، شطبة مزدوجة ، القط الزاوية # 8065921540. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 15ml أنبوب الطرد المركزي -- (واحد في العين) أي مصدر </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة باستير الزجاج -- (واحد لكل تشريح) أي مصدر </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 12 لوحة جيدا (واحد لكل تشريح) أي مصدر </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Primaria 25cm 2 قارورة -- (2-3 في العين) أي مصدر </li></ol>

experimental models for study of retinal pigment epithelial physiology and pathophysiology

وضعنا الداخلي ثقافة الخلية التي يمكن أن تنتج كميات كبيرة من monolayers متموجة من الجنين البشري الأساسي الثقافات صباغ الشبكية (hfRPE) ظهارة مع الخصائص المورفولوجية والفسيولوجية والجينية لRPE الإنسان الأصلية. هذه الثقافات الخلية hfRPE المعرض تصبغ الثقيلة ، والمجهر الإلكتروني تظهر واسعة الزغيبات الصغيرة الغشاء القمي. وقد تم تحديد المجمعات صلي وسم المناعي مع مختلف البروتينات مفرق ضيق. قطبية الظهارية وظيفة تلك الثقافات الأولية استنساخه بسهولة شبها درس سابقا نماذج من الثدييات RPE الأصلية ، بما في ذلك الإنسان. وتم تمديد هذه النتائج من خلال تطوير التدخلات العلاجية في النماذج الحيوانية العديد من أمراض العين البشرية. وقد ركزنا على استراتيجيات لإزالة تراكم السوائل غير طبيعي في الشبكية أو في الفضاء تحت الشبكية. الفضاء خارج الخلية تحت الشبكية يفصل قطاعات مبصرة الخارجي والغشاء القمي للRPE وهذا أمر مهم لصيانة التجهيزات والمعدات الشبكية ، ومجموعة كاملة من RPE / الشبكية التفاعلات.

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Models for Study of Retinal Pigment Epithelial Physiology and Pathophysiology at JoVE.com

Experimental Models for Study of Retinal Pigment Epithelial Physiology and Pathophysiology

نحن نقدم طريقة لاستنساخه monolayers زراعة الأجنة البشرية متموجة الخلايا الظهارية في شبكية العين صباغ (hfRPE) الذي يحمل مورفولوجيا الخلايا ، علم وظائف الأعضاء ، قطبية ، والبروتين وأنماط التعبير الجيني للأنسجة الأم الكبار. وقد تم تمديد هذا العمل إلى نموذج حيواني من عدة أمراض العيون.

نماذج تجريبية لدراسة فسيولوجيا صبغات الشبكية الظهارية والفيزيولوجيا المرضية

We have developed a cell culture procedure that can produce large quantities of confluent monolayers of primary human fetal retinal pigment epithelium ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

القبض على الليزر Microdissection ذبابة الفاكهة الخلايا العصبية المحيطية

The dendritic arborization (da) neurons of the Drosophila peripheral nervous system (PNS) provide an excellent model system in which to investigate the ...

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

تشريح العين ماوس لجبل الجامعة للصبغات الظهارة الشبكية

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

Simultaneous Whole-cell Recordings from Photoreceptors and Second-order Neurons in an Amphibian Retinal Slice Preparation

في وقت واحد تسجيلات خلية كاملة من المستقبلات الضوئية والخلايا العصبية الدرجة الثانية في البرمائيات إعداد شريحة الشبكية

One of the central tasks in retinal neuroscience  is to understand the circuitry of retinal neurons and how those connections are  responsible for shaping ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

التلاعب الجيني للمخيخي الحبيبة الخلايا العصبية<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em&gt; لدراسة مورفولوجيا الخلايا العصبية والهجرة

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

Olfactory Assays for Mouse Models of Neurodegenerative Disease

فحوصات حاسة الشم لنماذج من الماوس مرض الاعصاب

In many neurodegenerative diseases and particularly in Parkinson&#8217;s disease, deficits in olfaction are reported to occur early in the disease process ...

An In Vitro Model for the Study of Cellular Pathophysiology in Globoid Cell Leukodystrophy

An In Vitro Model for the Study of Cellular Pathophysiology in Globoid Cell Leukodystrophy

و<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج لدراسة الفيزيولوجيا المرضية الخلوي في الخلية حثل المادة البيضاء الكروي

The precise function of multi-nucleated microglia, called globoid cells, that are uniquely abundant in the central nervous system of globoid cell ...

Limbal Approach-Subretinal Injection of Viral Vectors for Gene Therapy in Mice Retinal Pigment Epithelium

الحوفي-النهج تحت الشبكية حقن الفيروسية المتجهات للعلاج الجيني في الفئران الشبكية الظهارة الصبغية

The eye is a small and enclosed organ which makes it an ideal target for gene therapy. Recently various strategies have been applied to gene therapy in ...

Low-Density Primary Hippocampal Neuron Culture

منخفض الكثافة الابتدائية الحصين العصبية الثقافة

The ability to probe the structure and physiology of individual nerve cells in culture is crucial to the study of neurobiology, and allows for flexibility ...

Development of a Refined Protocol for Trans-scleral Subretinal Transplantation of Human Retinal Pigment Epithelial Cells into Rat Eyes

وضع البروتوكول المكرر لزرع الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية البشرية ترانس-سكليرال سوبريتينال في عيون الفئران

Degenerative retinal diseases such as age-related macular degeneration (AMD) are the leading cause of irreversible vision loss worldwide. AMD is ...

Experimental Models to Study the Neuroprotection of Acidic Postconditioning Against Cerebral Ischemia

نماذج تجريبية لدراسة الحماية العصبية من الوضعية الحمضية ضد نقص التروية الدماغية

Stroke is one of the leading causes of mortality and disability worldwide, with limited therapeutic approaches. As an endogenous strategy for ...