Name: establishing primary adult fibroblast cultures from rodents
Uploaded: 2010-10-05T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents at JoVE.com

<p class="jove_content"> Vi tackar Dr Steven Austad för att förse oss med den första versionen av detta protokoll. Detta arbete har finansierats med bidrag från NIH och Ellison Medical Foundation till VG och AS </p>

<p class="jove_title"> 1. Innan du börjar </p><ol><li> Sterilisera sax och pincett med 70% etanol. </li><li> Lägg små magnetomrörare inne i en 30 ml bägare, täck med två lager folie och autoklav. </li><li> Förbered en 28 Wunsch enheter / ml stamlösning av Liberase Blendzyme 3 i sterilt vatten. Gör 0,5 mL alikvoter och fryser vid -20 ° C. Tina en ny alikvot före varje användning. Lösningen kan visas grumlig efter upptining. Vortex lösningen tills det blir klart. </li><li> Värm upp i media cellkultur. </li></ol><p class="jove_titl...

<ol>
	<li>Seluanov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+tumor+suppressor+mechanisms+evolve+in+rodent+species+that+differ+in+size+and+lifespan.+Aging+.">Distinct tumor suppressor mechanisms evolve in rodent species that differ in size and lifespan. Aging .</a> <em style='font-style: italic'>Cell</em>. <b>7</b>, 813-823 (2008).</li><li>Parrinello, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen+sensitivity+severely+limits+the+replicative+lifespan+of+murine+fibroblasts.">Oxygen sensitivity severely limits the replicative lifespan of murine fibroblasts.</a> <em style='font-style: italic'>Nat Cell Biol</em>. <b>5</b>, 741-747 (2003).</li></ol>

<p class="jove_content"> Normal primära fibroblaster ger ett utmärkt alternativ till etablerade cancercellinjer i biologisk forskning. En viktig fördel med fibroblaster är att de inte bär på mutationer i onkogener och tumör stötvågsfilter och bibehålla intakt checkpoints cellcykeln. Detta gör normala fibroblaster en önskad system för studier av cellcykeln reglering, DNA-reparation, och apoptos. Protokollet som beskrivs här är ett enkelt recept för isolering och underhåll av primära fibroblaster. Detta protokoll har använts f?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM/F12 media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11330-032</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum (FBS), Qualified</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>01437-036</td>
<td>The Qualified serum had been pre-tested to provide good growth support for primary fibroblasts.</td>
</tr>
<tr>
<td>Antibiotic/Antimycotic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15420-096</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td><strong>Liberase TM Research Grade</strong></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td><strong>05401127001</strong></td>
<td>Replacement enzyme.</td>
<tr>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>A note from the authors:
Since Roche discontinued Liberase Blendzyme 3 (11814184001), they recommend using Liberase TM Research Grade medium Thermolysin (Cat. no. 05401119001 - 10 mg, Cat. no. 05401127001 - 100mg) instead. We have switched to this enzyme successfully with no issues.</td>
<tr>
<td>EMEM media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ATCC</td>
<td>30-203</td>
<td>The EMEM media from ATCC already contains nonessential amino acids and sodium pyruvate.</td>
</tr>
<tr>
<td>Feathered #21 disposable, sterile scalpel</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Multiple suppliers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Three Gas Control incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Forma or Heraeus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

establishing primary adult fibroblast cultures from rodents

<p class="jove_content"> Vikten av att använda galvaniska element, snarare än cancer cellinjer, för biologiska studier blir allmänt erkänd. Primärceller är att föredra i studier av kontrollen av cellcykeln, apoptos, och DNA-reparation, som cancerceller bär mutationer i gener som är inblandade i dessa processer. Primärceller kan inte odlas på obestämd tid på grund av uppkomsten av replikationsförmåga åldrande eller aneuploidization. Därför, nya kulturer måste fastställas regelbundet. Förfarandet för isolering av gnagare embryonala fibroblaster är väl etablerad, men isolera vuxna fibroblast kulturer ofta en utmaning. Vuxen gnagare fibroblaster isolerade från musmodeller för mänskliga sjukdomar kan vara en god kontroll man jämför dem med fibroblaster från mänskliga patienter. Dessutom vuxna fibroblaster är den enda tillgängliga materialet när man arbetar med vilda gnagare där dräktiga honor inte enkelt kan erhållas. Här ger vi ett protokoll för isolering och odling av vuxna fibroblaster från gnagare hud och lungor. Vi använde den här proceduren framgångsrikt att isolera fibroblaster från över tjugo gnagare från laboratorie-möss och råttor till vilda gnagare som bäver, piggsvin och ekorre. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents at JoVE.com

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents (Video) | JoVE

<p class="jove_content">Denna artikel beskriver ett protokoll för isolering och underhåll av primära fibroblast kulturer från hud och lungvävnad hos vilda gnagare.</p>

Etablera primärkulturer Vuxen Fibroblast från gnagare

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Research

JoVE Journal

Biology

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae (Video) | JoVE

Primär Neuronal kulturer från hjärnan hos sent stadium Drosophila puppor

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates

Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates (Video) | JoVE

Primär dissocierade mitthjärnan Dopamin cellkulturer från Gnagare Nyfödda

The ability to create primary cell cultures of dopamine neurons allows for the study of the presynaptic characteristics of dopamine neurons in isolation ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation (Video) | JoVE

Beredningen av primära hematopoietisk cell kulturer från Murine Bone Marrow för elektroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes (Video) | JoVE

Primär kultur Vuxen myocyter Rat hjärta

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Primary Cell Cultures from <em>Drosophila</em> Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos (Video) | JoVE

Primära cellkulturer från<em> Drosophila</em> Gastrula Embryon

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...

Streamlined Purification of Plasmid DNA From Prokaryotic Cultures

Streamlined Purification of Plasmid DNA From Prokaryotic Cultures (Video) | JoVE

Strömlinjeformad Rening av Plasmid DNA från Prokaryota kulturer

We describe the complete process of AcroPrep Advance Filter Plates for 96 plasmid preparations, starting from prokaryotic culture and ending with high ...

Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures

Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures (Video) | JoVE

Snabb Fibroblast Borttagning med hög densitet mänskliga embryonala stamcellskulturer

Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) were used to establish human embryonic stem cells (hESCs) cultures after blastocyst isolation1. This feeder system ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÂ¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures (Video) | JoVE

Naiv Vuxna stamceller Isolering från primära humana fibroblastkulturer

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Preparation of Primary Myogenic Precursor Cell/Myoblast Cultures from Basal Vertebrate Lineages

Preparation of Primary Myogenic Precursor Cell/Myoblast Cultures from Basal Vertebrate Lineages (Video) | JoVE

Beredning av primär Myogenic prekursorcell / myoblast kulturer från Basal Ryggradsdjur härstamningar

Due to the inherent difficulty and time involved with studying the myogenic program in vivo, primary culture systems derived from the resident adult stem ...

Application of Retinoic Acid to Obtain Osteocytes Cultures from Primary Mouse Osteoblasts

Application of Retinoic Acid to Obtain Osteocytes Cultures from Primary Mouse Osteoblasts (Video) | JoVE

Tillämpning av retinsyra Skaffa osteocyter kulturer från Primary Mus Osteoblaster

The need for osteocyte cultures is well known to the community of bone researchers; isolation of primary osteocytes is difficult and produces low cell ...