Name: establishing primary adult fibroblast cultures from rodents
Uploaded: 2010-10-05T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents at JoVE.com

<p class="jove_content"> Bu protokolün ilk sürümü ile bize sağlamak için Dr. Steven Austad teşekkür ederim. Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüsü ve Ellison Tıp Vakfı VG hibe tarafından desteklenen ve AS </p>

<p class="jove_title"> 1. Başlamadan Önce </p><ol><li> % 70 etanol ile makas ve forseps sterilize edin. </li><li> 30 ml beher içindeki küçük manyetik karıştırıcı yerleştirin, iki folyo katmanlar ve otoklav ile kaplayın. </li><li> Steril su içinde 28 Wunsch Liberase Blendzyme 3 ünite / mL stok çözelti hazırlayın. -20 ° C&#39;de 0.5 mL alikotları ve donma yapın Her kullanımdan önce yeni bir kısım çözülme. Çözüm çözme sonrası bulanık görünebilir. Vorteksleyin çözüm açık hale gelinceye kadar. </li><li> Is?...

<ol>
	<li>Seluanov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+tumor+suppressor+mechanisms+evolve+in+rodent+species+that+differ+in+size+and+lifespan.+Aging+.">Distinct tumor suppressor mechanisms evolve in rodent species that differ in size and lifespan. Aging .</a> <em style='font-style: italic'>Cell</em>. <b>7</b>, 813-823 (2008).</li><li>Parrinello, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen+sensitivity+severely+limits+the+replicative+lifespan+of+murine+fibroblasts.">Oxygen sensitivity severely limits the replicative lifespan of murine fibroblasts.</a> <em style='font-style: italic'>Nat Cell Biol</em>. <b>5</b>, 741-747 (2003).</li></ol>

<p class="jove_content"> Normal birincil fibroblastlar, biyolojik araştırmalar yılında kurulan kanser hücre hatları için mükemmel bir alternatif sağlar. Fibroblastların önemli bir avantajı, onkogenler ve tümör bastırıcılarının mutasyonlar taşımak ve sağlam hücre döngüsü kontrol noktaları korumak olduğunu. Bu normal fibroblastlar, hücre döngüsü kontrolü, DNA onarımı ve apoptozis çalışmaları için tercih edilen bir sistem yapar. Burada açıklanan protokol birincil fibroblastlar izolasyon ve bakımı için b...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM/F12 media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11330-032</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum (FBS), Qualified</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>01437-036</td>
<td>The Qualified serum had been pre-tested to provide good growth support for primary fibroblasts.</td>
</tr>
<tr>
<td>Antibiotic/Antimycotic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15420-096</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td><strong>Liberase TM Research Grade</strong></td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td><strong>05401127001</strong></td>
<td>Replacement enzyme.</td>
<tr>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>A note from the authors:
Since Roche discontinued Liberase Blendzyme 3 (11814184001), they recommend using Liberase TM Research Grade medium Thermolysin (Cat. no. 05401119001 - 10 mg, Cat. no. 05401127001 - 100mg) instead. We have switched to this enzyme successfully with no issues.</td>
<tr>
<td>EMEM media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ATCC</td>
<td>30-203</td>
<td>The EMEM media from ATCC already contains nonessential amino acids and sodium pyruvate.</td>
</tr>
<tr>
<td>Feathered #21 disposable, sterile scalpel</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Multiple suppliers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Three Gas Control incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Forma or Heraeus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

establishing primary adult fibroblast cultures from rodents

<p class="jove_content"> Biyolojik çalışmalar için, birincil hücreler, kanser hücre hatları yerine kullanmanın önemi, yaygın olarak kabul haline geliyor. Birincil hücreler, hücre döngüsü kontrolü, apoptozis çalışmaları tercih ve DNA onarımı, kanser hücreleri, bu süreçlere dahil genlerindeki mutasyonlar taşıyan. İlköğretim hücreleri süresiz replikatif yaşlanması veya aneuploidization başlangıcı nedeniyle kültür olamaz. Bu nedenle, yeni kültürler, düzenli bir şekilde kurulması gerekmektedir. Kemirgen embriyonik fibroblastlar izolasyonu için prosedür iyi kurulmuş, ama çoğu zaman bir meydan okuma sunuyor yetişkin fibroblast kültürlerinde izole eder. Insan hastalığı fare modelleri izole Yetişkin kemirgen fibroblastlar, insan hasta fibroblastlar karşılaştırarak tercih edilen bir kontrol olabilir. Ayrıca, hamile kadın kolayca elde edilemez yabani kemirgenler ile çalışırken yetişkin fibroblastlar sadece kullanılabilir bir malzeme. Burada kemirgen cilt ve akciğerlerden yetişkin fibroblastlar izolasyonu ve kültürü için bir protokol sağlar. Bu yordamı Biz yirmi kemirgen türleri üzerinde laboratuvarda fareler ve sıçanlar, kunduz, kirpi, sincap gibi yabani kemirgenler fibroblastlar izole etmek için başarıyla kullanılır. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents at JoVE.com

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents (Video) | JoVE

<p class="jove_content">Bu makalede, izolasyon ve bakım, cilt ve akciğer dokusunda yaban kemirgenler birincil fibroblast kültürlerinin için bir protokol tanımlamaktadır.</p>

Kemirgenler itibaren İlköğretim Yetişkin Fibroblast Kültürleri kurulması

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Research

JoVE Journal

Biology

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae (Video) | JoVE

Geç Stage Drosophila pupa Brain İlköğretim Nöronal Kültürler

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates

Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates (Video) | JoVE

Kemirgen Yenidoğanlar İlköğretim grubuyla orta beyin dopamin Hücre Kültürleri

The ability to create primary cell cultures of dopamine neurons allows for the study of the presynaptic characteristics of dopamine neurons in isolation ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation (Video) | JoVE

Hazırlık Elektroporasyon murin Kemik İliği itibaren İlköğretim Hematopoetik Hücre Kültürleri

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes (Video) | JoVE

Yetişkin Sıçan Kalp miyositler İlköğretim Kültür

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Primary Cell Cultures from <em>Drosophila</em> Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos (Video) | JoVE

Birincil Hücre Kültürleri<em> Drosophila</em> Gastrula Embriyolar

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...

Streamlined Purification of Plasmid DNA From Prokaryotic Cultures

Streamlined Purification of Plasmid DNA From Prokaryotic Cultures (Video) | JoVE

Prokaryotik Kültürler itibaren Plazmid DNA Aerodinamik Arıtma

We describe the complete process of AcroPrep Advance Filter Plates for 96 plasmid preparations, starting from prokaryotic culture and ending with high ...

Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures

Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures (Video) | JoVE

Yüksek Yoğunluklu İnsan Embriyonik Kök Hücre Kültürleri gelen Rapid Fibroblast Kaldırma

Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) were used to establish human embryonic stem cells (hESCs) cultures after blastocyst isolation1. This feeder system ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÂ¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures (Video) | JoVE

İlköğretim İnsan fibroblast Kültürler gelen naif Erişkin Kök Hücre İzolasyon

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Preparation of Primary Myogenic Precursor Cell/Myoblast Cultures from Basal Vertebrate Lineages

Preparation of Primary Myogenic Precursor Cell/Myoblast Cultures from Basal Vertebrate Lineages (Video) | JoVE

Bazal Omurgalı soylarından İlköğretim andMyogenic Öncü Hücre / Miyoblast Kültürlerinin Hazırlanması

Due to the inherent difficulty and time involved with studying the myogenic program in vivo, primary culture systems derived from the resident adult stem ...

Application of Retinoic Acid to Obtain Osteocytes Cultures from Primary Mouse Osteoblasts

Application of Retinoic Acid to Obtain Osteocytes Cultures from Primary Mouse Osteoblasts (Video) | JoVE

İlköğretim Fare Osteoblastlar gelen osteositlere Kültürler Edinme Retinoik Asit Uygulama

The need for osteocyte cultures is well known to the community of bone researchers; isolation of primary osteocytes is difficult and produces low cell ...