Name: mouse embryonic lung culture, a system to evaluate the molecular mechanisms of branching
Uploaded: 2010-06-30T17:00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Embryonic Lung Culture, A System to Evaluate the Molecular Mechanisms of Branching at JoVE.com

이 작품은 Saban 연구소 사전 박사 수상 (PMDM)에서 지원하고, NIH RO1 HL75773 (DW)에 의해.했습니다

오르간 문화는 유전자와 단백질 발현을 연구하기 위해 매우 유용하고 다재 다능한 기술입니다. 이 전 생체내 문화 방법은 사전 또는 생체내 연구에 보완에 사용할 수 있습니다. 1. 배아 룽 절연 <ol><li> 시간 초과 - 임신 생쥐는 NIH와 OLAW 지침에 따라 CO 2 마취법에 의해 postcoitum 일 11.5 또는 12.5 (E11.5 - 12.5)에 희생됩니다. 동물은 챔버에 배치되며 100 % CO 2가 도입됩니다. 동물이 의식이 후 CO 2 흐름이 증가됩니다. 동물의 임상 죽음을 보장해야합니다. </li><li> 모든 다음 단계는 층류 후드에서 무균 조건 하에서 완료해야합니다. 자궁은 임신 여성에서 제거됩니다. 동물의 자궁을 제거하려면 임신 여성 자신의 뒤쪽에 위치하고 70 % 에탄올로 뿌렸 수 있습니다. 절개는 복부에 만들어이며, 피부는 동물의 뒷다리를 누른 상태에서 위쪽으로 피부를 당겨 제거됩니다. 복막 캐비티가 열립니다과 자궁은 동물에서 제거됩니다. </li><li> 혈액은 추운 행크스 밸런스드 소금 솔루션 (HBSS)으로 가득 50 ML 원뿔 관에 자궁을 배치 해제 씻어서이며, 튜브가 부드럽게 2 분 누볐어입니다. </li><li> 자궁은 다음 입체 해부 현미경 페트리 접시에 배치하고, 배아는 봄 가위를 사용하여 자궁 벽을 절개하여 자궁에서 발표됩니다. 배아는 천공 숟가락을 사용하여 수확하고, HBSS를 포함하는 새로운 배양 접시에 얼음에 표시됩니다. </li><li> 입체 해부 현미경, 배아 폐가 차가운 HBSS (그림 1)이있는 페트리 접시에 하나씩를 해부하고 있습니다. </li><li> 분리된 배아 허파는 살균 전송 피펫을 사용하여 HBSS를 포함하는 페트리 접시에 얼음에 위치합니다. </li></ol> 2. 배아 룽 문화 <ol><li> 1 밀리리터에 따라 잘 D-MEM/F-12 500 microliters의 페니실린 - 스트렙토 마이신의 50 단위 / ML과 보충은 Nunclon의 폴리스티렌 접시에 추가됩니다. </li><li> Nuclepore 폴리 카보 네이트 트랙 엣지 분리막은 미디어의 상단에 위치합니다. Nuclepore 폴리 카보 네이트 트랙 엣지 분리막은 미디어의 상단에 배치되면, 빛나는 측면은 미디어, 그리고 거친 면을 위쪽에 직면에 대해되어 있는지 확인합니다. </li><li> 해부 배아 폐암은 살균 전송 피펫을 사용하여 Nuclepore 폴리 카보 네이트 트랙 엣지 분리막 위에 위치합니다. </li><li> 배아 폐 위치는 포셉를 사용하여 조정됩니다. 필터에 위치 배아 허파가 손상 기관이 있어야하고 바로 입장을 가지고 그들의기도와 배치, 따라서 모든 폐 같은 내부 압력을 가지고 있도록합니다. </li><li> Nunclon의 폴리스티렌 요리는 세포 배양기 (그림 2)에서 원하는 문화 시간에 전송됩니다. </li></ol> 3. 자료 1. 배아 전체 룽 격리 <ol><li> 시간이 초과되었습니다 - 임신 (C57BL6 야생 입력하거나 유전자 변형) 생쥐 13.5 (E11.5 - 13.5)에 postcoitum 일 11.5에 희생 될 수 있습니다. </li><li> 염화칼슘, 염화 마그네슘 또는 마그네슘 황산없이 행크스 &#39;밸런스드 소금 솔루션 (HBSS) (1X), 액체,. (Invitrogen, 칼스 배드, CA) 50 단위 / 페니실린 - 스트렙토 마이신의 ML (Invitrogen, 칼스 배드, CA)과 보완. 실온에서 4 ° C에서 개통 후 HBSS를 저장합니다. 나누어지는하고 보관 -20 ° C.에 페니실린 - 스트렙토 마이신 </li><li> 입체 해부 현미경 (Leica, Wetzlar, 독일). </li><li> 더몬트 포셉, 파인 이리스 가위 (직선), 노예스 봄 가위와 모리아 ® 스푼 (천공) (파인 과학 도구, 포스터 시티, CA)를 포함 해부로드 공구를 추천하십시오. </li></ol> 2. 배아 전체 룽 문화 <ol><li> 중간 Dulbecco의 수정된 이글 : 영양소 믹스 F - 12 (D-MEM/F-12) (1X), 액체, 1:1 L - 글루타민을 포함하지,하지만 HEPES 버퍼. (Invitrogen, 칼스 배드, CA) 50 단위 / 페니실린 - 스트렙토 마이신의 ML (Invitrogen, 칼스 배드, CA)과 보완. 4 DMEM/F-12 거리 조명 (예 : 알루미늄 호일에 포함)의 병 및 저장 ° C. 유지 나누어지는하고 보관 -20 ° C.에 페니실린 - 스트렙토 마이신 </li><li> Nuclepore 폴리 카보 네이트 트랙 엣지 분리막, 8.0 - M, 13mm (왓먼 Nuclepore 트랙 엣지 멤브레인 (왓먼, 플로럼 공원, NJ). </li><li> 뚜껑과 Nunclon의 폴리스티렌 요리, 4 우물 (로체스터, NY). </li><li> 일회용 전송 pipettes, 멸균 (피셔 과학, 피츠버그, PA). </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2035/2035fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. E12 배아 폐의 해부. (A) E12.5 전체 난자는 오른쪽에서 볼. (B)를 마우스 오른쪽 forelimb이 배아에서 제거되었습니다. (C) 집게는 접시에 안정적인 배아를 들고 왼손으로 개최. 화살표가 (D) 배아의 폐 마음 (제거하기 위해 사후 거짓말을 해부의 계획을 나타냅니다척추)과 앞쪽에. 이 그림은 피부와 심장 제거 후 폐를 보여줍니다. (E) 인두 제거는 배아의 손상 폐 분리 수 있습니다. (F) 외부 pharyngeal 조직과 식도가 떨어진 손질했습니다. 그대로 기관과 후두와 해부 E12.5 배아 폐암이 표시됩니다. (CR) 두개골 엽 (클럽메드) 중간 엽 (CA) 꼬리의 엽 (ACC) 액세서리 엽 (르) 왼쪽 엽. <img src="/files/ftp_upload/2035/2035fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. FGF9은 mesenchyme의 확장과 체외에서 성장 폐암에서 상피의 팽창을 유도. (AC) E12.5 폐가 FGF9의 부재에서 48 시간 동안 성장합니다. 분기의 증가에 유의하십시오. (DF) E12.5 폐는 FGF9의 존재에 48 시간 동안 성장. 문화 24 시간 후 빠르면 상피와 mesenchyme (E)의 팽창을 확인합니다. 48시간 (F) 후, 상피에 대한 효과는 더욱 발음입니다. 스케일 바 : AF 400 μm의 4. 이 실험 방법에 대한 전체 텍스트 프로토콜에서 사용할 수 있습니다 <a href="http://springerprotocols.com/Abstract/doi/10.1007/978-1-59745-019-5_5">스프링거 프로토콜</a> .

<ol>
	<li>Alescio, T., Cassini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+in+vitro+of+tracheal+buds+by+pulmonary+mesenchyme+grafted+on+tracheal+epithelium.">Induction in vitro of tracheal buds by pulmonary mesenchyme grafted on tracheal epithelium.</a> J Exp Zool. 150, 83-94 (1962).</li><li>Warburton, D., Schwarz, M., Tefft, D., Flores-Delgado, G., Anderson, K. D., Cardoso, W. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+basis+of+lung+morphogenesis.">The molecular basis of lung morphogenesis.</a> Mech Dev. 92, 55-81 (2000).</li><li>Spooner, B. S., Hardman, P., Paulsen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gravity+in+mammalian+organ+development:+differentiation+of+cultured+lung+and+pancreas+rudiments+during+spaceflight.">Gravity in mammalian organ development: differentiation of cultured lung and pancreas rudiments during spaceflight.</a> J Exp Zool. 269, 212-222 (1994).</li><li>Moral, d. e. l., M, P., De Langhe, S. P., Sala, F. G., Veltmaat, J. M., Tefft, D., Wang, K., Warburton, D., Bellusci, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+role+of+FGF9+on+epithelium+and+mesenchyme+in+mouse+embryonic+lung.">Differential role of FGF9 on epithelium and mesenchyme in mouse embryonic lung.</a> Dev Biol. 293, 77-89 (2006).</li><li>Moral, D. e. l., M, P., Sala, F. G., Tefft, D., Shi, W., Keshet, E., Bellusci, S., Warburton, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-A+signaling+through+Flk-1+is+a+critical+facilitator+of+early+embryonic+lung+epithelial+to+endothelial+crosstalk+and+branching+morphogenesis.">VEGF-A signaling through Flk-1 is a critical facilitator of early embryonic lung epithelial to endothelial crosstalk and branching morphogenesis.</a> Dev Biol. 290, 177-188 (2006).</li><li>Jaskoll, T. F., Don-Wheeler, G., Johnson, R., Slavkin, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+mouse+lung+morphogenesis+and+type+II+cytodifferentiation+in+serumless,+chemically+defined+medium+using+prolonged+in+vitro+cultures.">Embryonic mouse lung morphogenesis and type II cytodifferentiation in serumless, chemically defined medium using prolonged in vitro cultures.</a> Cell Differ. 24, 105-117 (1988).</li><li>Seth, R., Shum, L., Wu, F., Wuenschell, C., Hall, F. L., Slavkin, H. C., Warburton, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+epidermal+growth+factor+expression+in+early+mouse+embryo+lung+branching+morphogenesis+in+culture:+antisense+oligodeoxynucleotide+inhibitory+strategy.">Role of epidermal growth factor expression in early mouse embryo lung branching morphogenesis in culture: antisense oligodeoxynucleotide inhibitory strategy.</a> Dev Biol. 158, 555-559 (1993).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

mouse embryonic lung culture, a system to evaluate the molecular mechanisms of branching

폐 원시 사양뿐만 아니라 분기 morphogenesis, 다양한 폐 세포 lineages의 형성은 주변 mesenchyme과 mesothelium과 폐 endoderm의 특정 상호 작용을 필요로합니다. 폐 mesenchyme는 폐 분기 morphogenesis을위한 유도 신호의 소스로 표시되었습니다. 상피 - mesenchymal - mesothelial 상호 작용은 또한 배아 폐 morphogenesis에 중요합니다. 초기 배아 폐 기관의 문화는 상피 - mesenchymal 상호 작용을 연구하기 위해 매우 유용한 시스템입니다. 쉽게 (산모 영향과 혈액 흐름의 부재에서)이 시스템에서 조작할 수있는 구체적인 조건 하에서 상피와 mesenchymal 모두 morphogenesis 진행. 더 중요한 것은이 기술은 쉽게 serumless, 화학적으로 정의 문화 미디어로 이루어 질 수 있습니다. 함수의 이득과 손실 표현 단백질, 재조합 바이러스 벡터 및 / 또는 유전자 변형 마우스 변종, 안티 센스 RNA뿐만 아니라 RNA 간섭 유전자 최저 분석을 사용하여 얻을 수 있습니다.

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Embryonic Lung Culture, A System to Evaluate the Molecular Mechanisms of Branching at JoVE.com

Mouse Embryonic Lung Culture, A System to Evaluate the Molecular Mechanisms of Branching

초기 배아 폐 기관의 문화는 상피 - mesenchymal 상호 작용을 연구하기 위해 매우 유용한 시스템입니다. 쉽게이 시스템에서 조작할 수있는 구체적인 조건 하에서 상피와 mesenchymal 모두 morphogenesis 진행.

마우스 배아의 폐 문화, 분기의 분자 메커니즘을 평가하는 시스템

Lung primordial specification as well as branching morphogenesis, and the formation of various pulmonary cell lineages requires a specific interaction of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

배아 마우스 신장의 Nephrogenic 지대의 세포의 분리 및 문화

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

연구

생물학

Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

배아 림브 스킨 Vasculature에 대한 전체 마운트 Immunohistochemical 분석 : 엠브료에 혈관 분기 Morphogenesis를 공부하는 모델 시스템

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Visualization of Caenorhabditis elegans Cuticular Structures Using the Lipophilic Vital Dye DiI

Visualization of Caenorhabditis elegans Cuticular Structures Using the Lipophilic Vital Dye DiI

의 시각화 Caenorhabditis Elegans</emLipophilic 바이탈 염료, DiI를 사용하기> 표피 구조

The cuticle of C. elegans is a highly resistant structure that surrounds the exterior of the animal1-4. The cuticle not only protects the animal from the ...

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

에 Postembryonic Phenotypes을 식별하기 위해 RNAi 심사 C. elegans</em

C. elegans has proven to be a valuable model system for the discovery and functional characterization of many genes and gene pathways1. More sophisticated ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

위한 시스템<em&gt; 예 생체</em배아 췌장의&gt; 배양

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Blastomere Explants to Test for Cell Fate Commitment During Embryonic Development

Blastomere Explants는 배아 개발하는 동안 세포 운명의 헌신에 대해 테스트 할

Fate maps, constructed from lineage tracing all of the cells of an embryo, reveal  which tissues descend from each cell of the embryo.  Although fate maps ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

소설<em&gt; 생체</em배아 마우스 사랑을&gt; 문화 방법

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

무 혈청 전체 배아 배양 시스템에서 마우스 배아 개발

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

분리 및 마우스 대동맥 내피 세포의 차 문화

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Procedure to Evaluate the Efficiency of Flocculants for the Removal of Dispersed Particles from Plant Extracts

절차 식물 추출물에서 분산 된 입자의 제거를위한 응집제의 효율성을 평가하는

Plants are important to humans not only because they provide commodities such as food, feed and raw materials, but increasingly because they can be used ...