Name: method for the isolation of francisella tularensis outer membranes
Uploaded: 2010-06-29T17:10:00
Duration: 11 min 6 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Method for the Isolation of Francisella tularensis Outer Membranes at JoVE.com

वर्णित परियोजना अनुदान AI055637 P01 और NIAID / NIH से AI057156 U54 नंबर के द्वारा समर्थित किया गया था. इसकी सामग्री केवल लेखकों की ज़िम्मेदारी है और RCE प्रोग्राम्सको कार्यालय, NIAID, या एनआईएच की आधिकारिक दृश्य जरूरी नहीं प्रतिनिधित्व करते हैं.

<ol>
	<li>Price, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centrifugation+in+density+gradients.">Centrifugation in density gradients.</a> , 335-335 (1982).</li><li>Osborn, M. J., Gander, J. E., Parisi, E., Carson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+assembly+of+the+outer+membrane+of+Salmonella+typhimurium.+Isolation+and+characterization+of+cytoplasmic+and+outer+membrane.">Mechanism of assembly of the outer membrane of Salmonella typhimurium. Isolation and characterization of cytoplasmic and outer membrane.</a> J Biol Chem. 247 (12), 3962-3962 (1972).</li><li>Nikaido, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+outer+membranes.">Isolation of outer membranes.</a> Methods Enzymol. 235, 225-225 (1994).</li><li>Mizuno, T., Kageyama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+and+characterization+of+the+outer+membrane+of+Pseudomonas+aeruginosa.">Separation and characterization of the outer membrane of Pseudomonas aeruginosa.</a> J Biochem. 84 (1), 179-179 (1978).</li><li>Huntley, J. F., Conley, P. G., Hagman, K. E., Norgard, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Francisella+tularensis+outer+membrane+proteins.">Characterization of Francisella tularensis outer membrane proteins.</a> J Bacteriol. 189, 561-561 (2007).</li><li>Huntley, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Native+outer+membrane+proteins+protect+mice+against+pulmonary+challenge+with+virulent+type+A+Francisella+tularensis.">Native outer membrane proteins protect mice against pulmonary challenge with virulent type A Francisella tularensis.</a> Infect Immun. 76 (8), 3664-3664 (2008).</li><li>Bevanger, L., Maeland, J. A., Naess, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agglutinins+and+antibodies+to+Francisella+tularensis+outer+membrane+antigens+in+the+early+diagnosis+of+disease+during+an+outbreak+of+tularemia.">Agglutinins and antibodies to Francisella tularensis outer membrane antigens in the early diagnosis of disease during an outbreak of tularemia.</a> J Clin Microbiol. 26 (3), 433-433 (1988).</li><li>Hubalek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+proteome+database+of+Francisella+tularensis.">Towards proteome database of Francisella tularensis.</a> J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 787 (1), 149-149 (2003).</li><li>Pavkova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Francisella+tularensis+live+vaccine+strain:+proteomic+analysis+of+membrane+proteins+enriched+fraction.">Francisella tularensis live vaccine strain: proteomic analysis of membrane proteins enriched fraction.</a> Proteomics. 5 (9), 2460-2460 (2005).</li><li>Sandstrom, G., Tarnvik, A., Wolf-Watz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunospecific+T-lymphocyte+stimulation+by+membrane+proteins+from+Francisella+tularensis.">Immunospecific T-lymphocyte stimulation by membrane proteins from Francisella tularensis.</a> J Clin Microbiol. 25 (4), 641-641 (1987).</li><li>Sjostedt, A., Tarnvik, A., Sandstrom, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+T-cell-stimulating+17-kilodalton+protein+of+Francisella+tularensis+LVS+is+a+lipoprotein.">The T-cell-stimulating 17-kilodalton protein of Francisella tularensis LVS is a lipoprotein.</a> Infect Immun. 59 (9), 3163-3163 (1991).</li><li>Twine, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Francisella+tularensis+proteome:+low+levels+of+ASB-14+facilitate+the+visualization+of+membrane+proteins+in+total+protein+extracts.">Francisella tularensis proteome: low levels of ASB-14 facilitate the visualization of membrane proteins in total protein extracts.</a> J Proteome Res. 4 (5), 1848-1848 (2005).</li></ol>

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

इस प्रोटोकॉल spheroplasting, आसमाटिक lysis के विभिन्नता है, और sucrose के घनत्व ढाल centrifugation भौतिक जुदाई और अन्य सेलुलर घटकों 2, 3, 4 से ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया OMS के संवर्धन के लिए सोने के मानक &quot;का वर्णन करता है. जबकि हम पहले दोनों प्रकार से OMS को अलग करने के लिए इस विधि का आवेदन का वर्णन एक और एफ के प्रकार बी उपभेदों 5 tularensis, इस प्रस्तुति ओम अलगाव के लिए एक अधिक विस्तृत और अनुकूलित प्रक्रिया प्रदान करता है. दरअसल, यह इस घातक रोगज़नक़ से संभावित सतह उजागर और प्रकल्पित विषैलापन कारकों की पहचान के लिए एक महत्वपूर्ण अग्रिम है. इस प्रक्रिया के महत्व के अध्ययन में हमारे शुद्ध विषमय प्रकार एक एफ के खिलाफ पर्याप्त संरक्षण afforded OMPs के साथ चूहों की कि प्रतिरक्षण दिखा प्रयोगशाला द्वारा प्रदर्शन किया गया tularensis फेफड़े चुनौती 6. जैसा कि ऊपर उल्लेख किया, बैक्टीरियल कोशिकाओं, आसमाटिक lysis के दौरान सावधान निगरानी, ​​और झिल्ली छर्रों का कोमल resuspension के विकास के चरण महत्वपूर्ण कदम है कि करने के लिए / इस झिल्ली जुदाई प्रक्रिया की सफलता और विफलता के साथ सहसंबंधी प्रकट कर रहे हैं. हालांकि यह अनुकूलित विधि कठोर और कुछ प्रयोगात्मक परिवर्तनशीलता के अधीन है, जिसके परिणामस्वरूप OMS उल्लेखनीय बढ़ाया पवित्रता का हो सकता है के रूप में डिटर्जेंट के उपयोग, लिथियम क्लोराइड, या सोडियम कार्बोनेट 7, 8, 9, 10, 11 से हुई उन की तुलना में दिखाई देते हैं, 12.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Donor calf serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mediatech</td>
<td>35-022-CV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IsoVitaleX</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Becton Dickinson</td>
<td>211876</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cellgro molecular grade dH2O</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mediatech</td>
<td>46-000-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>38.5 ml polycarbonate bottle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FiberLite</td>
<td>010-0514</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>F50L-8x39 ultracentrifuge rotor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FiberLite</td>
<td>096-087051</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Complete mini EDTA-free protease inhibitor cocktail</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche Diagnostics</td>
<td>04693132001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Benzonase</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Novagen</td>
<td>70664-3</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DC protein assay</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BioRad</td>
<td>500-0116</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ultra-Clear 14x95mm centrifuge tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>344060</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SW-40Ti swinging bucket rotor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman Coulter</td>
<td>331301</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Abbe benchtop refractometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>13-964-10 </td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

method for the isolation of francisella tularensis outer membranes

Francisella tularensis एक ग्राम नकारात्मक intracellular coccobacillus और जूनोटिक बीमारी tularemia की प्रेरणा का एजेंट है. जब अन्य बैक्टीरियल रोगज़नक़ों, बेहद कम संक्रामक खुराक (&lt;10 CFU), तेजी से रोग प्रगति, और उच्च रुग्णता और मृत्यु दर सुझाव है कि Francisella की विषमय उपभेदों उपन्यास विषैलापन कारकों के लिए सांकेतिक शब्दों में बदलना के साथ तुलना में. भूतल उजागर अणु, अर्थात् बाहरी झिल्ली प्रोटीन (OMPs), बैक्टीरियल मेजबान सेल बंधन, प्रविष्टि, intracellular अस्तित्व, डाह और प्रतिरक्षा चोरी को बढ़ावा देने के दिखाया गया है. OMPs अध्ययन के लिए प्रासंगिकता आगे तथ्य यह है कि वे बैक्टीरियल बीमारियों की एक संख्या के खिलाफ रक्षात्मक के टीके के रूप में सेवा कर सकते हैं रेखांकित किया है. जबकि OMPs थोक centrifugation और / या डिटर्जेंट निष्कर्षण द्वारा पीछा कोशिकाओं के sonication सहित झिल्ली निष्कर्षण तकनीकों, के माध्यम से ग्राम नकारात्मक बैक्टीरिया से निकाला जा सकता है है, इन तैयारियों अक्सर periplasmic और / या cytoplasmic (आंतरिक) झिल्ली contaminants के (आईएम) के साथ दूषित कर रहे हैं. साल के लिए, ग्राम नकारात्मक आईएम और बाहरी झिल्ली के जैव रासायनिक और biophysical जुदाई के लिए &quot;सोने के मानक &#39;विधि (ओम) spheroplasting और आसमाटिक lysis विषय बैक्टीरिया को दिया गया है, sucrose के घनत्व ढाल centrifugation द्वारा पीछा किया. एक बार एक sucrose के ढाल पर स्तरित, OMS घनत्व प्रसन्नचित्त में अंतर के आधार पर आईएमएस से अलग किया जा सकता है, ओम में lipopolysaccharide उपस्थिति (LPS) बड़े पैमाने पर predicated माना जा रहा है. यहाँ, हम एक कठोर और अनुकूलित निकालने, समृद्ध, और एफ अलग विधि का वर्णन tularensis बाहरी झिल्ली और उनके संबद्ध OMPs.

Watch this Scientific Journal Video about Method for the Isolation of Francisella tularensis Outer Membranes at JoVE.com

Method for the Isolation of Francisella tularensis Outer Membranes

से आंतरिक और बाहरी झिल्ली को अलग करने के लिए एक प्रोटोकॉल<em&gt; Francisella tularensis</em&gt; Spheroplasting, आसमाटिक lysis, और sucrose घनत्व ढाल ultracentrifugation के द्वारा.

के अलगाव के लिए विधि Francisella tularensis बाहरी झिल्ली

Francisella tularensis is a Gram-negative intracellular coccobacillus and the causative agent of the zoonotic disease tularemia. When compared with other ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for the Isolation of Francisella tularensis Outer Membranes

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

माउस अग्नाशय आइलेट अलगाव और intracellular शिविर निर्धारण के लिए एक विधि

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Isolation of Neonatal Extrahepatic Cholangiocytes

नवजात extrahepatic Cholangiocytes का अलगाव

The intra and extrahepatic bile ducts of the liver are developmentally distinct, and may be differentially affected by certain diseases. However, ...

Isolation of Murine Valve Endothelial Cells

Murine वाल्व endothelial कोशिकाओं का अलगाव

Normal valve structures consist of stratified layers of specialized extracellular matrix (ECM) interspersed with valve interstitial cells (VICs) and ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

Murine कोरोनरी संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं का अलगाव

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

न्यूक्लिक एसिड की छानने का अलगाव: एक सरल और तेजी डीएनए निष्कर्षण विधि

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

A Rapid, Scalable Method for the Isolation, Functional Study, and Analysis of Cell-derived Extracellular Matrix

एक तेजी से, अलगाव, कार्यात्मक अध्ययन के लिए स्केलेबल विधि, और सेल व्युत्पन्न बाह्य मैट्रिक्स का विश्लेषण

The extracellular matrix (ECM) is recognized as a diverse, dynamic, and complex environment that is involved in multiple cell-physiological and ...

Standardized Method for High-throughput Sterilization of Arabidopsis Seeds

Arabidopsis बीजों के उच्च प्रवाह नसबंदी के लिए मानकीकृत विधि

Arabidopsis thaliana (Arabidopsis) seedlings often need to be grown on sterile media. This requires prior seed sterilization to prevent the growth of ...

Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue

Adipo-स्पष्ट: वसा ऊतक के तीन आयामी इमेजिंग के लिए एक ऊतक समाशोधन विधि

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte ...

Tethered Bilayer Lipid Membranes to Monitor Heat Transfer between Gold Nanoparticles and Lipid Membranes

सोने के नैनोकणों और लिपिड झिल्ली के बीच हीट ट्रांसफर की निगरानी करने के लिए सीमित बाइलेयर लिपिड झिल्ली

Here we report a protocol to investigate the heat transfer between irradiated gold nanoparticles (GNPs) and bilayer lipid membranes by electrochemistry ...

An Antegrade Perfusion Method for Cardiomyocyte Isolation from Mice

चूहों से कार्डियोमायोसाइट आइसोलेशन के लिए एक एंटेग्रेड परफ्यूजन विधि

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating ...