Name: visualisation and quantification of intracellular interactions of neisseria meningitidis and human &alpha;-actinin by confocal imaging
Uploaded: 2010-10-24T17:30:00
Duration: 12 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualisation and Quantification of Intracellular Interactions of Neisseria meningitidis and Human ÃŽÂ±-actinin by Confocal Imaging at JoVE.com

وتم تمويل هذه الدراسات من قبل ويلكوم ترست والمملكة المتحدة والتهاب السحايا. وقدمت HBMEC خط خلية KS الدكتور كيم. أجريت التصوير مبائر والمجهر الإلكتروني في مرفق Bioimaging ولفسون ، جامعة بريستول. نود أيضا أن نشكر السيد آلان Leard ، الدكتور مارك جيبسون (جامعة بريستول) ، والسيد آلان تيلي (PerkinElmer) لما قدموه من مساعدة والمشورة.

<ol>
	<li>Virji, M., Makepeace, K., Moxon, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+mechanisms+of+interactions+of+Opc-expressing+meningococci+at+apical+and+basolateral+surfaces+of+human+endothelial+cells;+the+role+of+integrins+in+apical+interactions.">Distinct mechanisms of interactions of Opc-expressing meningococci at apical and basolateral surfaces of human endothelial cells; the role of integrins in apical interactions.</a> Molecular Microbiology. 14, 173-184 (1994).</li><li>Virji, M., Makepeace, K., Peak, I. R., Ferguson, D. J., Jennings, M. P., Moxon, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opc-+and+pilus-+dependent+interactions+of+meningococci+with+human+endothelial+cells:+molecular+mechanisms+and+modulation+by+surface+polysaccharides.">Opc- and pilus- dependent interactions of meningococci with human endothelial cells: molecular mechanisms and modulation by surface polysaccharides.</a> Molecular Microbiology. 18, 741-754 (1995).</li><li>Sa E Cunha, C., Griffiths, N. J., Murillo, I., Virji, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neisseria+meningitidis+Opc+invasin+binds+to+the+cytoskeletal+protein+alpha-actinin.">Neisseria meningitidis Opc invasin binds to the cytoskeletal protein alpha-actinin.</a> Cellular Microbiology. 11, 384-405 (2009).</li><li>Virji, M., Kayhty, H., Ferguson, D. J., Alexandrescu, C., Alexandrescu, J. E., Heckels, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+pili+in+the+interactions+of+pathogenic+Neisseria+with+cultured+human+endothelial+cells.">The role of pili in the interactions of pathogenic Neisseria with cultured human endothelial cells.</a> Molecular Microbiology. 5, 1831-1841 (1991).</li><li>Manders, E. M. M., Verbeek, F. J., Aten, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+colocalization+of+objects+in+dual+color+confocal+images.">Measurement of colocalization of objects in dual color confocal images.</a> Journal of Microscopy. 6, 357-382 (1993).</li><li>Zinchuk, V., Zinchuk, O., Okada, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+colocalization+analysis+of+multicolor+confocal+immunofluorescence+microscopy+images:+pushing+pixels+to+explore+biological+phenomena.">Quantitative colocalization analysis of multicolor confocal immunofluorescence microscopy images: pushing pixels to explore biological phenomena.</a> Acta Histochemica et Cytochemica. 40, 101-111 (2007).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

إمكانية ربط المنضوية OPC ، معربا عن النيسرية السحائية لα - actinin تم استكشافها من قبل باستخدام HBMEC فحص colocalisation من البكتيريا والبروتين هيكل الخلية في الخلايا المصابة بعد 3 و 8 فترة حضانة ح. بواسطة الفحص المجهري متحد البؤر ، يمكن أن يكون أظهر colocalisation من النيسرية السحائية مع α - actinin. على وجه الخصوص ، على الرغم من أن البكتيريا المنضوية في 3 ساعات ، كان هناك القليل مع colocalisation α - actinin في هذه النقطة الزمنية. وكانت أعداد كبيرة من الجراثيم البكتيرية الجمعيات مع هيكل الخلية البروتين يبدو بحاجة إلى فترة أطول من الإقامة داخل الخلايا وبعد فترة العدوى ح 8 ، α - actinin على ما يبدو في ارتباط وثيق. ألفا actinin هو بروتين متعددة الوظائف ، والتفاعلات البكتيرية مع هيكل الخلية يمكن أن يكون عنصر تأثير كبير على وظيفة خلايا الهدف الذي هو موضوع الدراسات الحالية. الكمي للcolocalisation على النحو المبين أعلاه يتطلب إعداد دقيق العينة. وينبغي إيلاء اهتمام خاص لتثبيت العينة ، وعرقلة الفترة والتخفيفات الأضداد. للحصول على أفضل إشارة إلى نسبة الضوضاء ، ينبغي معاير كل الأضداد الابتدائية والثانوية في التجارب الأولية لتحديد تركيزات الأمثل. في تجربتنا ، أنتجت Mowiol المتوسطة المتزايدة أفضل الصور.

1. الميكروسكوب الضوئي ليزر متحد البؤر (CLSM) : ايكا SP5 نظام التصوير مبائر : هذا النظام ، وذلك باستخدام مزيج من AOTF (صوتية البصرية تصفية tuneable) وAOBS ملف (صوتية بصرية شعاع التقسيم) ، ويبسط الإثارة مع أطوال موجة معينة. 2 - البرامج : ايكا مبائر LCS البرنامج ، لايكا مايكروسيستمز ، ألمانيا. Volocity 5 ، الارتجال ، PerkinElmer ، الولايات المتحدة الأمريكية.

visualisation and quantification of intracellular interactions of neisseria meningitidis and human &alpha;-actinin by confocal imaging

البروتين بمسانده من النيسرية السحائية (نيوتن متر ، المكورة السحائية) هي أرض لا يتجزأ من البروتين وأعربت الغشاء الخارجي ، والتي يمكن أن تكون بمثابة adhesin وفعالة لالإنفازين الإنسان الخلايا الظهارية والبطانية. حددنا البطانية ارض تقع لل integrins باسم المستقبلات الرئيسية لمكتب أمين المظالم ، وهي عملية تتطلب OPC لربط أول يغاندس إنتغرين مثل vitronectin وعبر هذه إلى خلايا مستقبلات أعرب 1. هذه العملية يؤدي إلى الغزو الجرثومي للخلايا بطانة الأوعية الدموية 2. في الآونة الأخيرة ، لاحظنا التفاعل مع بمسانده من البروتين الموجود في 100kDa lysates خلية كاملة من الخلايا البشرية 3. لاحظنا في البداية هذا التفاعل عندما بروتينات الخلية المضيفة مفصولة الكهربي ونشف إلى النيتروسليلوز كانوا مضافين مع OPC ، معربا عن نيوتن متر. كان التفاعل المباشر ، ولم يتضمن جزيئات متوسطة. بواسطة مطياف الكتلة ، أنشأنا هوية البروتين كما α - actinin. كما أعرب عن أي سطح عثر α - actinin على أي من خطوط الخلايا eight فحصها ، كما والتفاعلات OPC مع الخلايا البطانية في وجود الرصاص في الدم للدخول البكتيريا الى الخلايا المستهدفة ، ونحن دراسة إمكانية التفاعل البروتينين intracellularly. لهذا ، أصيب الاوعية الدموية الدقيقة في الدماغ البشري مثقف الخلايا البطانية (HBMECs) مع OPC ، معربا عن نيوتن متر لفترات طويلة والمواقع من البكتيريا والمنضوية α actinin ، تم فحص المجهري متحد البؤر التي كتبها. لاحظنا الوقت التي تعتمد على زيادة في colocalisation نيوتن متر من البروتين مع هيكل الخلية ، التي كانت كبيرة بعد فترة ثماني ساعات من تدخيل البكتيرية. بالإضافة إلى ذلك ، مكن استخدام برامج التصوير الكمي لنا للحصول على قياس نسبي لcolocalisation نيوتن متر مع α - actinin هيكل الخلية والبروتينات الأخرى. هنا نقدم بروتوكول للمرئيات والكمي لcolocalisation للبكتيريا مع البروتينات داخل الخلايا البكتيرية بعد دخوله إلى الخلايا البطانية الإنسان ، على الرغم من أن هذا الإجراء ينطبق أيضا على الخلايا الظهارية البشرية.

Watch this Scientific Journal Video about Visualisation and Quantification of Intracellular Interactions of Neisseria meningitidis and Human ÃŽÂ±-actinin by Confocal Imaging at JoVE.com

Visualisation and Quantification of Intracellular Interactions of Neisseria meningitidis and Human ÃƒÅ½Ã‚Â±-actinin by Confocal Imaging

يمكن النيسرية السحائية (نيوتن متر) ، وهي سلبية غرام الممرض التنفسي للإنسان على وجه التحديد ، ربط الإنسان actinin - α. هنا نقدم بروتوكول للتصور colocalisation للبكتيريا مع الخلايا α - actinin بعد دخول البكتيريا إلى خلايا الاوعية الدموية الدقيقة في الدماغ البطانية (HBMECs).

التخيل والكمي لالتفاعلات داخل الخلايا النيسرية السحائية والإنسان α - actinin بواسطة التصوير متحد البؤر

The Opc protein of Neisseria meningitidis (Nm, meningococcus) is a surface-expressed integral outer membrane protein, which can act as an adhesin and an ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Visualisation and Quantification of Intracellular Interactions of Neisseria meningitidis and Human &alpha;-actinin by Confocal Imaging

Single Cell Measurements of Vacuolar Rupture Caused by Intracellular Pathogens

القياسات خلية واحدة من تمزق رغوي الناجمة عن مسببات الأمراض بين الخلايا

Shigella flexneri are pathogenic bacteria that invade host cells entering into an endocytic vacuole. Subsequently, the rupture of this membrane-enclosed ...

Imaging InlC Secretion to Investigate Cellular Infection by the Bacterial Pathogen Listeria monocytogenes

Imaging InlC Secretion to Investigate Cellular Infection by the Bacterial Pathogen Listeria monocytogenes

التصوير InlC إفراز المعنية بالتحقيق في العدوى البكتيرية الخلوية من قبل الممرض<em&gt; المستوحدة الليستيريا</em

Bacterial intracellular  pathogens can be conceived as molecular tools to dissect cellular signaling  cascades due to their capacity to exquisitely ...

Discovery of New Intracellular Pathogens by Amoebal Coculture and Amoebal Enrichment Approaches

اكتشاف جديد بين الخلايا مسببات الأمراض عن طريق Amoebal Coculture والمناهج Amoebal التخصيب

Intracellular pathogens such as legionella, mycobacteria and Chlamydia-like organisms are difficult to isolate because they often grow poorly or not at ...

Real-time Imaging of Myeloid Cells Dynamics in ApcMin/+ Intestinal Tumors by Spinning Disk Confocal Microscopy

Real-time Imaging of Myeloid Cells Dynamics in ApcMin/+ Intestinal Tumors by Spinning Disk Confocal Microscopy

التصوير في الوقت الحقيقي من خلايا الدم النخاعي في ديناميات<em&gt; APC<sup&gt; مين / +</sup</em&gt; الأورام المعوية التي كتبها غزل القرص متحد البؤر المجهر

Myeloid cells are the most abundant immune cells within tumors and have been shown to promote tumor progression. Modern intravital imaging techniques ...

A New Method for Qualitative Multi-scale Analysis of Bacterial Biofilms on Filamentous Fungal Colonies Using Confocal and Electron Microscopy

طريقة جديدة لتحليل نوعي متعدد حجم البكتيرية الأغشية الحيوية على شعيري الفطرية المستعمرات عن طريق متحد البؤر والمجهر الإلكتروني

Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and can be involved in numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic ...

Flow Virometry to Analyze Antigenic Spectra of Virions and Extracellular Vesicles

تدفق Virometry لتحليل الأنتيجين أطياف Virions وخارج الخلية الحويصلات

Cells release small extracellular vesicles (EVs) into the surrounding media. Upon virus infection cells also release virions that have the same size of ...

Optical Screening of Novel Bacteria-specific Probes on Ex Vivo Human Lung Tissue by Confocal Laser Endomicroscopy

Optical Screening of Novel Bacteria-specific Probes on Ex Vivo Human Lung Tissue by Confocal Laser Endomicroscopy

تحقيقات الفحص البصري للرواية الخاصة بالبكتيريا في أنسجة الرئة البشرية السابقين فيفو بالليزر [كنفوكل] اندوميكروسكوبي

Improving the speed and accuracy of bacterial detection is important for patient stratification and to ensure the appropriate use of antimicrobials. To ...

Visualizing Intracellular SNARE Trafficking by Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

تصور داخل الخلايا المطوقة الاتجار بواسطة عمر Fluorescence التصوير المجهري

Soluble N-ethylmaleimide sensitive fusion protein (NSF) attachment protein receptor (SNARE) proteins are key for membrane trafficking, as they catalyze ...

Ex Vivo Infection of Human Lymphoid Tissue and Female Genital Mucosa with Human Immunodeficiency Virus 1 and Histoculture

Ex Vivo Infection of Human Lymphoid Tissue and Female Genital Mucosa with Human Immunodeficiency Virus 1 and Histoculture

السابقين فيفو التهاب الغشاء المخاطي للأعضاء التناسلية أنثى والأنسجة اللمفاوية البشرية مع فيروس نقص المناعة البشرية 1 وهيستوكولتوري

Histocultures allow studying intercellular interactions within human tissues, and they can be employed to model host-pathogen interactions under ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

التحديد الكمي افيروسيتوسيس بالفحص المجهري Fluorescence خلية واحدة

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...