Name: adult and embryonic skeletal muscle microexplant culture and isolation of skeletal muscle stem cells
Uploaded: 2010-09-21T17:10:00
Duration: 14 min 36 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells at JoVE.com

نشكر باتريك Paddison عن هديته للناقلات المكوك shRNAi. ولدت انجيلا سلون صورة رني GFP في الشكل 3. ونشكر أيضا هيئات التمويل التالية لدعمها : العضلات منح الحملة عدد الضمور RA2/592/2 ؛ الشرر منح عدد 02BHM04 ، عدد الملكي منح جمعية 574006.G503/1948./JE BBSRC ومنح عدد 6/SAG10077.

<ol>
	<li>Yaffe, D., Saxel, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+passaging+and+differentiation+of+myogenic+cells+isolated+from+dystrophic+mouse+muscle.">Serial passaging and differentiation of myogenic cells isolated from dystrophic mouse muscle.</a> Nature. 270, 725-727 (1997).</li><li>Askanas, V., Engel, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+program+for+investigating+adult+human+skeletal+muscle+grown+aneurally+in+tissue+culture.">A new program for investigating adult human skeletal muscle grown aneurally in tissue culture.</a> Neurology. 25, 58-67 (1975).</li><li>Smith, J., Schofield, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+fibroblast+growth+factors+in+long+term+primary+culture+of+dystrophic+(mdx)+mouse+muscle+myoblasts.">The effects of fibroblast growth factors in long term primary culture of dystrophic (mdx) mouse muscle myoblasts.</a> Exp Cell Res. 210, 86-93 (1994).</li><li>Fell, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+in+culture.">The cell in culture.</a> J Clin Pathol. 11, 489-495 (1958).</li><li>Stewart, D. C., Kirk, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+simultaneous+measurement+of+several+parameters+of+embryo+heart+explants+growth+in+vitro.">The simultaneous measurement of several parameters of embryo heart explants growth in vitro.</a> J Cell Physiol. 40, 183-198 (1952).</li><li>Harvey, A. L., Robertson, J. G., Witkowski, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+human+skeletal+muscle+fibres+in+explant+tissue+culture.">Maturation of human skeletal muscle fibres in explant tissue culture.</a> J Neurol Sci. 41, 115-122 (1979).</li><li>Zammit, P. S., Heslop, L., Hudon, V., Rosenblatt, J. D., Tajbakhsh, S., Buckingham, M. E., Beauchamp, J. R., Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+myoblast+proliferation+show+that+resident+satellite+cells+are+competent+to+fully+regenerate+skeletal+muscle+fibers.">Kinetics of myoblast proliferation show that resident satellite cells are competent to fully regenerate skeletal muscle fibers.</a> Exp Cell Res. 281, 39-49 (2002).</li><li>Konigsberg, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The embryonic origin of muscle. , (1986).</li><li>Trainor, P. A., Tan, S. S., Tam, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cranial+paraxial+mesoderm:+regionalization+of+cell+fate+and+impact+on+craniofacial+development+in+mouse+embryos.">Cranial paraxial mesoderm: regionalization of cell fate and impact on craniofacial development in mouse embryos.</a> Development. 120, 2397-2408 (1994).</li><li>Tajbakhsh, S., Rocancourt, D., Cossu, G., Buckingham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Redefining+the+genetic+hierarchies+controlling+skeletal+myogenesis+Pax-3+and+Myf-5+act+upstream+of+MyoD.">Redefining the genetic hierarchies controlling skeletal myogenesis Pax-3 and Myf-5 act upstream of MyoD.</a> Cell. 89, 127-138 (1997).</li><li>Tremblay, P., Dietrich, S., Mericskay, M., Schubert, F. R., Li, Z., Paulin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+crucial+role+for+Pax3+in+the+development+of+the+hypaxial+musculature+and+the+longrange+migration+of+muscle+precursors.">A crucial role for Pax3 in the development of the hypaxial musculature and the longrange migration of muscle precursors.</a> Dev Biol. 203, 49-61 (1998).</li><li>Tajbakhsh, S., Bober, E., Babinet, C., Pournin, S., Arnold, H., Buckingham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+targeting+the+myf-5+locus+with+nlacZ+reveals+expression+of+this+myogenic+factor+in+mature+skeletal+muscle+fibres+as+well+as+early+embryonic+muscle.">Gene targeting the myf-5 locus with nlacZ reveals expression of this myogenic factor in mature skeletal muscle fibres as well as early embryonic muscle.</a> Dev Dyn. 206, 291-300 (1996).</li><li>Tam, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+study+of+the+pattern+of+prospective+somites+in+the+presomitic+mesoderm+of+mouse+embryos.">A study of the pattern of prospective somites in the presomitic mesoderm of mouse embryos.</a> J Embryol Exp Morphol. 92, 269-285 (1986).</li><li>Cossu, G., Kelly, R., Donna, S. D. i., Vivarelli, E., Buckingham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myoblast+differentiation+during+mammalian+somitogenesis+is+dependent+upon+a+community+effect.">Myoblast differentiation during mammalian somitogenesis is dependent upon a community effect.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 92, 2254-2258 (1995).</li><li>Shainberg, A., Yagil, G., Yaffe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+myogenesis+in+vitro+by+Ca2++concentration+in+nutritional+medium.">Control of myogenesis in vitro by Ca2+ concentration in nutritional medium.</a> Exp Cell Res. 58, 163-167 (1969).</li><li>Dodson, M. V., Martin, E. L., Brannon, M. A., Mathison, B. A., McFarland, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+bovine+satellite+cell-derived+myotube+formation+in+vitro.">Optimization of bovine satellite cell-derived myotube formation in vitro.</a> Tissue Cell. 19, 159-166 (1987).</li><li>Smith, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+Growth+factors,+ubiquitin+and+apoptosis+in+dystrophic+muscle:+Apoptosis+declines+with+age+in+the+mdx+mouse.">Muscle Growth factors, ubiquitin and apoptosis in dystrophic muscle: Apoptosis declines with age in the mdx mouse.</a> B Appl Myol. 6, 279-284 (1996).</li><li>Smith, J., Fowke, G., Schofield, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+cell+death+in+dystrophic+(mdx)+muscle+is+inhibited+by+IGF-II.">Programmed cell death in dystrophic (mdx) muscle is inhibited by IGF-II.</a> Cell Death Differ. 2, 243-251 (1995).</li><li>Smith, J., Schofield, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+integration+of+an+mdx+skeletal+muscle+cell+line+into+dystrophic+(mdx)+skeletal+muscle:+evidence+for+stem+cell+status.">Stable integration of an mdx skeletal muscle cell line into dystrophic (mdx) skeletal muscle: evidence for stem cell status.</a> Cell Growth Differ. 8, 927-934 (1997).</li><li>O Shea, L., Johnson, C., Rooney, M., Gleeson, R., Woods, K., Smith, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipogenesis+and+skeletal+muscle+ageing.">Adipogenesis and skeletal muscle ageing.</a> Mech Ageing Dev. 122, 1354-1355 (2001).</li><li>Merrick, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A role for Igf-2 in fast skeletal muscle specification during myogenesis in dystrophic and wild type embryos [dissertation]. , (2006).</li><li>Stadler, L. K. J., Merrick, D., Smith, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+stem+cell+and+fast+myosin+abnormalities+in+the+cav-3+/+and+mdx+dystrophic+embryo+reveal+an+embryonic+basis+for+muscular+dystrophy.">Morphological stem cell and fast myosin abnormalities in the cav-3 / and mdx dystrophic embryo reveal an embryonic basis for muscular dystrophy.</a> Abstr. Genet.Res. 90, 281-289 (2008).</li><li>Merrick, D., Stadler, L. K. J., Larner, D. P., Smith, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+stem+cell+and+fast+myosin+abnormalities+in+the+cav-3+/+and+mdx+dystrophic+embryo+reveal+an+embryonic+basis+for+muscular+dystrophy.">Morphological stem cell and fast myosin abnormalities in the cav-3 / and mdx dystrophic embryo reveal an embryonic basis for muscular dystrophy.</a> Dis Model Mech. 2, 374-388 (2009).</li><li>Matschak, T., Stickland, N. C., Smith, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Explants+of+embryonic+Atlantic+salmon+muscle+in+culture.">Explants of embryonic Atlantic salmon muscle in culture.</a> Proc Soc Exp Biol A. 1, 23-23 (1997).</li><li>Smith, J., Hooper, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominance+and+independent+segregation+of+metabolic+cooperation+competence+and+pluripotency+in+an+embryonal+carcinoma+cell+hybrid.">Dominance and independent segregation of metabolic cooperation competence and pluripotency in an embryonal carcinoma cell hybrid.</a> Exp Cell Res. 181, 40-50 (1989).</li><li>Bulfield, G., Siller, W. G., Wight, P. A., Moore, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X+chromosome+linked+muscular+dystrophy+(mdx)+in+the+mouse.">X chromosome linked muscular dystrophy (mdx) in the mouse.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 81, 1189-1192 (1984).</li><li>Hagiwara, Y., Sasaoka, T., Araishi, K., Imamura, M., Yorifuji, H., Nonaka, I., Ozawa, E., Kikuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caveolin-3+deficiency+causes+muscle+degeneration+in+mice.">Caveolin-3 deficiency causes muscle degeneration in mice.</a> Hum Mol Genet. 9, 3047-3054 (2000).</li><li>Westbury, J., Watkins, M., Ferguson-Smith, A. C., Smith, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+temporal+and+spatial+regulation+of+the+cdk+inhibitor+p57+(kip2)+during+embryo+morphogenesis.">Dynamic temporal and spatial regulation of the cdk inhibitor p57 (kip2) during embryo morphogenesis.</a> Mech Dev. 109, 83-89 (2001).</li><li>Merrick, D., Ting, T., Stadler, L. K. J., Smith, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+Insulin-like+growth+factor+2+in+specification+of+the+fast+skeletal+muscle+fibre.">A role for Insulin-like growth factor 2 in specification of the fast skeletal muscle fibre.</a> BMC Dev Biol. 7, 65-65 (2007).</li><li>Paddison, P. J., Caudy, A. A., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+suppression+of+gene+expression+by+RNAi+in+mammalian+cells+AQ4.">Stable suppression of gene expression by RNAi in mammalian cells AQ4.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 99, 1443-1448 (2002).</li><li>Smith, J., Merrick, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+Muscle+Microexplant+Culture+and+Isolation+of+Skeletal+Muscle+Stem+Cells.">Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells.</a> Methods in Molecular Biology. 633, (2010).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

ويمكن استخدام الثقافات يزدرع Microdissected موثوق لعزل السكان وبتكاثر الخلايا التي تحتوي على نسبة عالية جدا (~ 85 ٪) من Myf - 5 التكاثري إيجابية الخلايا الجذعية العضلية الهيكلية (SMSC). في ظل الظروف الثقافة خاضعة لرقابة صارمة وصفها هنا يمكن استخدامها الثقافات يزدرع الأولية لتوصيف سلوكيات نمو SMSC الماوس متحولة وراثيا ، ويمكن استخدامها كوسيلة لتوليد myotubes لتحليل مفصل في المختبر لعمليات المفاضلة. صيانة دقيقة والتلاعب في هذه الثقافات يمكن على المدى الطويل والثقافة ، والتوسع. باستخدام الأساليب المذكورة هنا فإنه من الممكن أيضا أن تستمد نسيلي الجذعية خطوط الخلية العضلية الهيكلية من ثقافات يزدرع عن طريق تخفيف خلية واحدة. لتحقيق انتشار الخلايا وحيدة معزولة أثناء إجراء الاستنساخ ، &quot;متوسطة مشروطة&quot; يستخدم لمحاكاة الشرط الطبيعي من هذه الخلايا لثقافة عالية الكثافة. الأسلوب هو المعمول به (مع التعديل) إلى الأنسجة ، الجنينية الكبار والمسنين البالغين ، وبالإضافة إلى الماوس يمكن استخدامها لعزل خلايا من عضلات الهيكل العظمي من الأنواع الأخرى بما في ذلك الإنسان (راو وسميث ، غير منشورة) ، وأسماك الفرخ الجنين ( سمك السلمون) 24. ويمكن تحليل SMSC المستمدة Clonally في الجسم الحي بواسطة زرع العضلي وتحت هذه الظروف حقن SMSC سوف تتحد مع myotubes المضيف لتشكيل الألياف العضلية الهجين. SMSC حقن العضل لا تشكل الأورام والتي وجدت في العضلات المضيف في موقف الخلية الأقمار الصناعية أكثر من سنة بعد الحقن ، مما يشير إلى أنها تخضع لرقابة الذاتية من قبل الأقمار الصناعية الخلايا الجذعية niche.These الخلية يمكن إعادة معزولة عن حقن كما يستضيف SMSC التكاثري أكثر من 12 شهرا بعد حقن المضيف 19.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM/F12 1:1 mix</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich Company</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Liquid medium: (Dulbecco's Modified Eagles's medium and Ham's F12 medium, 1:1 v/v)</td>
</tr>
<tr>
<td>100&#215; Glutamine (200mM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich Company</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Diluted in medium to a 1&#215; concentration of 2 mM (Glutamine HYBRI-MAX R)
</td>
</tr>
<tr>
<td>Fetal calf serum (FCS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>From a number of different companies</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Batch tested on primary cultures and skeletal muscle cell lines. 10-20% supplement to liquid media</td>
</tr>
<tr>
<td>Heraeus Labofuge 300</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Heraeus and distributors of Heraeus equipment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lab centrifuge capable of reaching 1,000 rpm</td>
</tr>
<tr>
<td>15 ml Falcon centrifuge tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Must fit lab centrifuge</td>
</tr>
<tr>
<td>Tissue culture plasticware (25, 75 or 175 mm2 tissue culture vessels; 96-well tissue culture plates. 60 mm Petri dishes).</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nunc (available from Fisher Scientific in the UK)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Humidified CO2 incubator (Heraeus)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Heraeus and distributors of Heraeus equipment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ours is copper lined, recommended for reducing contamination</td>
</tr>
<tr>
<td>Sterile hood with laminar air flow (Heraeus)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Heraeus and distributors of Heraeus equipment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ours is a Class II hood &#x2013; suitable for use with Human tissues</td>
</tr>
<tr>
<td>Water Bath</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grant Equipment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Maintained always at 37&deg;C</td>
</tr>
<tr>
<td>Inverted microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica DMIRB, Leica Instruments, UK)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>70% Ethanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>For sterilization (animals, dissection instruments) and swabbing benches, hood, etc. </td>
</tr>
<tr>
<td>Calcium- and magnesium-free phosphate-buffered saline (PBS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich Company, UK</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cell culture-tested PBS (Dulbecco&#x2019;s formula) is purchased as a ready-mixed powder or in tablet form and made up with doubledistilled water before sterilization by autoclave. PBS consists of 2.68 mM potassium chloride (KCl); 1.47 mM potassium phosphate monobasic (KH2PO4); 0.137 M sodium chloride (NaCl); and 8.1 mM sodium phosphate
dibasic (Na2HPO4). PBS can be prepared from scratch as follows: 200 mg KCl, 200 mg KH2PO4, 8 g NaCl and 1.15 g Na2HPO4/l of double-distilled water followed by
sterilization by autoclave.
</td>
</tr>
<tr>
<td>CryoTube vials</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nunc (see above)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>A Neubauer haematocytometer and coverslips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific, UK</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>For estimating cell counting</td>
</tr>
<tr>
<td>Hand counter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific, UK</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissection microscope, Zeiss Stemi 1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zeiss, UK</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>For preparation of explants</td>
</tr>
<tr>
<td>Small sterile hood</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile dissection instruments (including Jeweler&#x2019;s forceps)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sterilised by autoclave</td>
</tr>
<tr>
<td>Sterile plastic collecting vessels (7 ml bijou tubes or 20ml universals)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nunc (Fisher Scientific)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Warm PECM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Constituents purchased from Sigma-Aldrich, UK as above</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Made up in the sterile hood and warmed to 37&deg;C in the tissue culture waterbath. DMEM:F-12 supplemented with 20% FCS, 1% glutamine and + 1% penicillin &amp; streptomycin solution</td>
</tr>
<tr>
<td>Dispase (50 &mu;g/ml, equivalent to 6 units/mg) </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Available from MP Biomedicals, UK</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 &mu;g/ml 4_,6 Diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride (DAPI).</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich, UK</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>For microscopic visualization of apoptosis and mitosis</td>
</tr>
<tr>
<td>Vectashield fluorescent mounting fluid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories, UK</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fluorescent upright microscope with ultraviolet filter (we use a Nikon Eclipse E600)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon, UK</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Digital camera and imaging software (we use a Nikon Coolpix 995 camera; A Nikon D3 camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon, UK</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>OpenLab4.0a software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Improvision, UK</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Photoshop CS4</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Adobe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

adult and embryonic skeletal muscle microexplant culture and isolation of skeletal muscle stem cells

مثقف من الاجنة والبالغين خلايا عضلات الهيكل العظمي لديها عدد من الاستخدامات المختلفة. الجزئي تشريح explants تقنية وصفها في هذا الفصل هو وسيلة قوية وموثوق بها من أجل عزل أعداد كبيرة نسبيا من التكاثري خلايا عضلات الهيكل العظمي من العضلات ، والأحداث أو البالغين الجنينية كمصدر للخلايا الجذعية العظمية العضلية. وقد استخدم واضعو الدقيقة تشريح الثقافات يزدرع لتحليل خصائص نمو خلايا العضلات والهيكل العظمي في العضلات من النوع البري والتصنع. كل واحد من مكونات نمو الأنسجة ، يمكن تحليل بقاء الخلية وهي الانتشار ، الشيخوخة والتمايز بشكل منفصل باستخدام الأساليب المذكورة هنا. يمكن تأسيس الأثر الصافي لجميع عناصر النمو من خلال وسائل لقياس معدلات نمو ازدراع. ويمكن استخدام أسلوب الدقيقة يزدرع لإنشاء الثقافات الأساسي من مجموعة واسعة من أنواع مختلفة من العضلات والأعمار ، وكما هو موضح هنا ، وقد تم تكييفه من قبل المؤلفين لتمكين عزلة الجنينية السلائف العضلات والهيكل العظمي. فريد ، استخدمت الدقيقة يزدرع الثقافات لاشتقاق نسيلي (أصل واحد الخلية) الهيكل العظمي الخلايا الجذعية العضلية (SMSC) خطوط التي يمكن توسيعها واستخدامها في عمليات زرع في الجسم الحي. زرعها في الجسم الحي SMSC تتصرف على النحو الوظيفي ، وأنسجة معينة ، والخلايا الأقمار الصناعية التي تسهم في تجديد عضلة الهيكل العظمي ولكن الألياف التي يتم الاحتفاظ أيضا (في محراب الخلية الأقمار الصناعية) ، ومجموعة صغيرة من الخلايا الجذعية غير المتمايزة التي يمكن إعادة معزولة في الثقافة باستخدام أسلوب الدقيقة ازدراع.

Watch this Scientific Journal Video about Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells at JoVE.com

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

الجزئي تشريح تقنية explants هو أسلوب قوي وموثوق بها من أجل عزل التكاثري خلايا عضلات الهيكل العظمي من العضلات ، والأحداث أو البالغين الجنينية كمصدر للخلايا الجذعية العظمية العضلية. فريد ، كانت هذه الخلايا المشتقة clonally الهيكل العظمي لإنتاج خطوط الخلايا الجذعية العضلية تستخدم لزرع في الجسم الحي.

الكبار والعضلات والهيكل العظمي الجنينية Microexplant الثقافة وعزل خلايا جذعية عضلية هيكلية

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Research

JoVE Journal

Biology

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

الميتوكوندريا من عزل العضلات والهيكل العظمي

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

تنقية الأسلاف من الهيكل العظمي والعضلات

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

فيفو السابقين تقييم من تعب، وانقباض في عضلات الهيكل العظمي تناوب متفرقة

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

الليزر بإلحاق الضرر من العضلات الهيكلية اسماك الزرد الجنينية

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

العزلة وثقافة فردية وMyofibers زنزاناتهم القمر الصناعي من العضلات الهيكلية الكبار

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Isolation, Culture, and Transplantation of Muscle Satellite Cells

العزلة والثقافة، وزرع خلايا العضلات الأقمار الصناعية

Muscle satellite cells are a stem cell population required for postnatal skeletal muscle development and regeneration, accounting for 2-5% of sublaminal ...

Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle

العزلة من الدم والأوعية المشتقة متعددة القدرات السلائف من العضلات الهيكلية البشرية

Since the discovery of mesenchymal stem/stromal cells (MSCs), the native identity and localization&#160;of MSCs have been obscured by their retrospective ...

Isolation and Characterization of Exosomes from Skeletal Muscle Fibroblasts

عزل وتوصيف الإكسوسومات من الخلايا الليفية العضلية الهيكلية

Exosomes are small extracellular vesicles released by virtually all cells and secreted in all biological fluids. Many methods have been developed for the ...

Isolation of Mitochondria from Mouse Skeletal Muscle for Respirometric Assays

عزل الميتوكوندريا عن العضلات الهيكلية للفأر لإجراء فحوصات قياس التنفس

Most of the cell&#39;s energy is obtained through the degradation of glucose, fatty acids, and amino acids by different pathways that converge on the ...

Electroporation of Plasmid DNA into Mouse Skeletal Muscle

كهربية الحمض النووي البلازميد في العضلات الهيكلية للفأر

Transient gene expression modulation in murine skeletal muscle by plasmid electroporation is a useful tool for assessing normal and pathological ...