Name: dechorionation of medaka embryos and cell transplantation for the generation of chimeras
Uploaded: 2010-12-22T17:10:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dechorionation of Medaka Embryos and Cell Transplantation for the Generation of Chimeras at JoVE.com

यह काम MRC से एम. एफएस एक अनुदान द्वारा समर्थित है.

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	<li>Furutani-Seiki, M., Sasado, T., Morinaga, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+genome-wide+screen+for+mutations+affecting+organogenesis+in+Medaka,+Oryzias+latipes.">A systematic genome-wide screen for mutations affecting organogenesis in Medaka, Oryzias latipes.</a> Mech Dev. 121, 647-658 (2004).</li><li>Furutani-Seiki, M., Wittbrodt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medaka+and+zebrafish,+an+evolutionary+twin+study.">Medaka and zebrafish, an evolutionary twin study.</a> Mech Dev. 121, 629-6237 (2004).</li><li>Hirose, Y., Varga, Z. M., Kondoh, H., Furutani-Seiki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+lineage+and+regionalization+of+cell+populations+during+Medaka+neurulation.">Single cell lineage and regionalization of cell populations during Medaka neurulation.</a> Development. 131, 2553-2563 (2004).</li><li>Iwamatsu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+normal+development+in+the+medaka+Oryzias+latipes.">Stages of normal development in the medaka Oryzias latipes.</a> Zool Sci. 11, 825-839 (1994).</li><li>Cope, J., Fluck, R., Nicklas, L., Plumhoff, L. A., Sincock, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stellate+layer+and+rhythmic+contractions+of+the+Oryzias+latipes+embryo.">The stellate layer and rhythmic contractions of the Oryzias latipes embryo.</a> J Exp Zool. 254, 270-275 (1990).</li><li>Brend, T., Holley, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+Whole+Mount+High-Resolution+Double+Fluorescent+In+Situ+Hybridization.">Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization.</a> J Vis Exp. , (2009).</li></ol>

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

हम इस वीडियो में प्रदर्शन कैसे dechorionate और medaka भ्रूण सेल transplanataion पर बाहर ले. यह chimeric भ्रूण विकास के दौरान जीन / प्रोटीन समारोह का अध्ययन, साथ ही जीन / प्रश्न में प्रोटीन की स्वायत्तता elucidating के लिए के लिए उत्पादन के लिए एक शक्तिशाली तकनीक है. Medaka यह अच्छी तरह से स्थापित भाग्य नक्शे और vivo इमेजिंग वास्तविक समय में उनकी पारदर्शिता उधार उन्हें अच्छी तरह से करने के लिए कारण तकनीक के लिए एक उपयोगी हड्डीवाला मॉडल प्रणाली रहे हैं. ट्रांसप्लांटेशन (के रूप में साथ जौव प्रोटोकॉल &#39;Medaka भ्रूण की Microinjection में उल्लिखित) तो microinjection है कि प्रतिरोपित कोशिकाओं के व्यवहार को आसानी से देखा जा सकता है है के साथ संयुक्त किया जा सकता है है.

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Embryo medium</td>
<td>Reagent</td>
<td>Made in-house</td>
<td>N/A</td>
<td>200ml 50X stock solution, 1ml 1%methyleneblue in H2O/10 liter RO water (50X stock solution: NaCl 14.7g, KCl 0.6g, CaCl2 2H2O 2.4g, MgSO4 7H2O 4.0g/1 litre RO water.)</td>
</tr>
<tr>
<td>Micro-dissecting forceps</td>
<td>Tools</td>
<td>55 INOX A.DUMONT&amp;FILS</td>
<td>N/A</td>
<td>Very sharp fine tips for removal of chorion.</td>
</tr>
<tr>
<td>Fine waterproof sandpaper - p2000 grit size</td>
<td>Tools</td>
<td>Hermes Abrasives Ltd.</td>
<td>N/A</td>
<td>Very fine grit size for rolling/cleaning embryos with chorions.</td>
</tr>
<tr>
<td>3% methylcellulose</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>M 0512</td>
<td>High viscosity for holding embryos in place during transplantation.</td>
</tr>
<tr>
<td>1X BSS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Made in-house</td>
<td>N/A</td>
<td>20XBSS: 130g NaCl, 8g KCl, 4g MgSO4.7H2O, 4g CaCl2.2H2O, and 10mg Phenol Red in 1L MilliQ water and autoclave; 500mM Hepes in MilliQ water autoclaved. Add 25ml 20XBSS and 15ml 500ml Hepes pH7.0, fill up to 500ml and filter sterilize before use.</td>
</tr>
<tr>
<td>Penicillin-streptomycin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140-122</td>
<td>Added to BSS when incubating dechorionated embryos.</td>
</tr>
<tr>
<td>Pronase</td>
<td>Reagent</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>53702</td>
<td>For dechorionation.</td>
</tr>
<tr>
<td>Hatching enzyme</td>
<td>Reagent</td>
<td>Made in-house</td>
<td>N/A</td>
<td>For dechorionation.</td>
</tr>
<tr>
<td>Tricaine mesilate (TMS)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-5040</td>
<td>400mg tricaine in 97.9ml distilled water and 2.1ml 1M Tris, pH adjusted to 7; 4.2ml of this solution in 100ml clean tank water.</td>
</tr>
<tr>
<td>3% ultra-low gelling temp. agarose</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A-2576</td>
<td>Type IX-A. Used during embedding of embryos for observation.</td>
</tr>
<tr>
<td>Petri dish culture chamber</td>
<td>Tool</td>
<td>Iwaki, Asahi Techno Glass Corp.</td>
<td>11-004-008</td>
<td>Iwaki glass base dish 35mm with 12mm window. Used during embedding of embryos for observation.</td>
</tr>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>Equipment</td>
<td>Narishige</td>
<td>N/A</td>
<td>Model MN151. For removal and insertion of cells during transplantation.</td>
</tr>
<tr>
<td>Borosilicate glass capillaries</td>
<td>Tool</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>GC100-10T</td>
<td>For making transplantation needles.</td>
</tr>
<tr>
<td>Flaming/Brown micropipette puller</td>
<td>Equipment</td>
<td>Sutter Instrument Co.</td>
<td>Model P-97 </td>
<td>For making transplantation needles.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

dechorionation of medaka embryos and cell transplantation for the generation of chimeras

Medaka एक छोटे से अंडे बिछाने मीठे पानी मछली है कि दोनों आनुवंशिक और embryological विश्लेषण की अनुमति देता है और एक तीन हड्डीवाला मॉडल जीवों में जो जीनोम चौड़ा phenotype संचालित उत्परिवर्ती स्क्रीन बाहर 1 किए गए है. Medaka और zebrafish के बीच संबंधित जीन की कार्यात्मक ओवरलैप के विचलन उपन्यास phenotypes कि एक एकल 2 प्रजातियों, इस प्रकार medaka और zebrafish हड्डीवाला जीनोम कार्यों की आनुवंशिक विच्छेदन के लिए पूरक हैं में unidentifiable रहे हैं की पहचान की अनुमति देता है. Dechorionation जैसे medaka भ्रूण, इमेजिंग और कोशिका प्रत्यारोपण के लिए बढ़ते भ्रूण की हेरफेर कुंजी प्रक्रियाओं के लिए एक प्रयोगशाला में दोनों medaka और zebrafish पर काम कर रहे हैं. सेल प्रत्यारोपण medaka परिवर्तन के सेल स्वायत्तता की जाँच. Chimeras unlabeled प्राप्तकर्ता भ्रूण में दाता भ्रूण से लेबल कोशिकाओं के प्रत्यारोपण द्वारा उत्पन्न कर रहे हैं. दाता कोशिकाओं प्राप्तकर्ता भाग्य 3 नक्शे के आधार पर इतना है कि प्रतिरोपित कोशिकाओं से क्लोन विकास के दौरान ब्याज की ऊतक में एकीकृत किया जा सकता है है भ्रूण के विशिष्ट क्षेत्रों में प्रतिरोपित किया जा सकता है. हार्ड chorion और नरम भ्रूण, medaka भ्रूण के हेरफेर के कारण अधिक zebrafish में से शामिल है. इस वीडियो में, हम विस्तृत medaka भ्रूण हेरफेर प्रक्रियाओं दिखा.

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Dechorionation of Medaka Embryos and Cell Transplantation for the Generation of Chimeras

हार्ड chorion और नरम भ्रूण, medaka भ्रूण के हेरफेर के कारण अधिक zebrafish में से शामिल है. यह वीडियो कैसे medaka भ्रूण में हेरफेर करने के लिए कदम दर कदम प्रक्रियाओं, dechorionation सहित, इमेजिंग और chimeras के उत्पादन के लिए सेल प्रत्यारोपण के लिए agarose में बढ़ते दिखाता है. इन प्रक्रियाओं के लिए एक प्रयोगशाला में medaka और zebrafish का उपयोग करने के लिए हड्डीवाला जीनोम कार्यों की आनुवंशिक विच्छेदन के लिए उनके पूरक सुविधाओं का पूरा लाभ लेने के लिए आवश्यक हैं.

Medaka भ्रूण और सेल प्रत्यारोपण के Chimeras की पीढ़ी के लिए Dechorionation

Medaka is a small egg-laying freshwater fish that allows both genetic and embryological analyses and is one of the three vertebrate model organisms in ...

Research

JoVE Journal

Biology

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