Name: visualizing cell-to-cell transfer of hiv using fluorescent clones of hiv and live confocal microscopy
Uploaded: 2010-10-07T17:00:00
Duration: 13 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing Cell-to-cell Transfer of HIV using Fluorescent Clones of HIV and Live Confocal Microscopy at JoVE.com

इस समीक्षा स्वास्थ्य अनुदान के राष्ट्रीय संस्थानों, AI074420-02, Burroughs Wellcome अन्वेषक पुरस्कार, Hirschl कैरियर BKC वैज्ञानिक पुरस्कार और Biophotonics विज्ञान और प्रौद्योगिकी के लिए NSF केंद्र, सहकारी समझौते PHY012099, और एक UCD स्वास्थ्य प्रणाली अनुसंधान वें पुरस्कार द्वारा समर्थित किया गया UCD CTSC NCRR ULRR024146.

<ol>
	<li>Blanco, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+level+of+coreceptor-independent+HIV+transfer+induced+by+contacts+between+primary+CD4+T+cells.">High level of coreceptor-independent HIV transfer induced by contacts between primary CD4 T cells.</a> J Biol Chem. 279, 51305-51314 (2004).</li><li>Sourisseau, M., Sol-Foulon, N., Porrot, F., Blanchet, F., Schwartz, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inefficient+human+immunodeficiency+virus+replication+in+mobile+lymphocytes.">Inefficient human immunodeficiency virus replication in mobile lymphocytes.</a> J Virol. 81, 1000-1012 (2007).</li><li>Jolly, C., Kashefi, K., Hollinshead, M., Sattentau, Q. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+cell+to+cell+transfer+across+an+Env-induced,+actin-dependent+synapse.">HIV-1 cell to cell transfer across an Env-induced, actin-dependent synapse.</a> J Exp Med. 199, 283-293 (2004).</li><li>Hubner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sequence+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+(HIV-1)+Gag+localization+and+oligomerization+monitored+with+live+confocal+imaging+of+a+replication-competent,+fluorescently+tagged+HIV-1.">Sequence of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) Gag localization and oligomerization monitored with live confocal imaging of a replication-competent, fluorescently tagged HIV-1.</a> J Virol. 81, 12596-12607 (2007).</li><li>Hubner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+3D+video+microscopy+of+HIV+transfer+across+T+cell+virological+synapses.">Quantitative 3D video microscopy of HIV transfer across T cell virological synapses.</a> Science. 323, 1743-1747 (2009).</li></ol>

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

हम यहाँ सेल सेल से एचआईवी के हस्तांतरण visualizing के लिए एक सरल विधि का वर्णन. हमारी प्रयोगशाला और दूसरों से हाल के शोध से पता चलता है कि इस टी कोशिकाओं के बीच फैल एचआईवी के प्रमुख विधा किया जा सकता है. विधि यहाँ वर्णित एचआईवी की एक रीकॉम्बीनैंट फार्म रोजगार, एचआईवी चुप iGFP, जो एक आनुवंशिक रूप से इनकोडिंग कोर संरचनात्मक प्रोटीन झूठ, में हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन टैग किया जाता है बुलाया. GFP के उच्च स्तर के प्रत्येक वायरस कण में उत्पादित की वजह से, इस क्लोन प्रतिकृति - सक्षम एचआईवी के शोधकर्ताओं करने के लिए सक्षम बनाता है वास्तविक समय में अलग - अलग वायरस कणों को ट्रैक. यह वायरस विधानसभा और सेल सेल एचआईवी के हस्तांतरण से संबंधित अध्ययन में विशेष रूप से उपयोगी होना चाहिए. सेल सेल हस्तांतरण द्वारा एचआईवी के हस्तांतरण अत्यधिक कुशल है. एक तीन घंटे के दौरान सह संस्कृति, हम दिनचर्या को देखने के वायरस प्राथमिक टी कोशिकाओं की 20-30% करने के लिए हस्तांतरित के रूप में प्रवाह cytometry द्वारा मूल्यांकन. इसी तरह के क्षमता गुणात्मक जीना सेल इमेजिंग के दौरान देखा जाता है. Virally संक्रमित टी कोशिकाओं असंक्रमित सह संस्कृति की दीक्षा के बाद लगभग तुरंत प्राथमिक टी कोशिकाओं के साथ synapses गठन शुरू करते हैं. दिलचस्प है, प्राथमिक टी नहीं सभी कोशिकाओं लेजर चिमटी (अप्रकाशित टिप्पणियों, जीएम) के साथ मजबूर बातचीत के बावजूद एचआईवी संक्रमित Jurkat कोशिकाओं के साथ बातचीत करने में सक्षम हैं. चुप - iGFP एचआईवी निस्संदेह टी सेल सबसेट है कि सबसे करने के लिए स्थानांतरण सेल सेल, दोनों इन विट्रो में और vivo में करने के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं निर्धारित करने के लिए उपयोगी हो जाएगा.

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		<div>
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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Jurkat T Cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ATCC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Leukocyte buffy coats from whole blood</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>New York Blood Center</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hyclone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nucleofector System and Solution V</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EndoFree Maxi Prep Kits</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HIV Gag-iGFP plasmid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chen Laboratory</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CD4+ T Cell Isolation Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ficoll-Paque</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Celltracker/CellTrace Dyes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CO2-Independent Media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Imaging Chambers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ibidi</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Olympus IX-71 Inverted Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PlanApo N 1.42NA 60X oil objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Innova 70C ArKr ion gas laser</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coherent </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CSU-10 Nipkow-type spinning disk confocal unit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Yokogawa</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Di01-T405/488/568/647-13x15x0.5 dichroic beamsplitter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Semrock</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>525/50 bandpass filter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Semrock</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>iXon+ 897 electron-multiplied charged coupled devise camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Andor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ASI 400 Thermostatic Heater</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nevtek</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

visualizing cell-to-cell transfer of hiv using fluorescent clones of hiv and live confocal microscopy

अपने पसंदीदा प्रोटीन के लिए हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन fusing, जीव अब जटिल सेलुलर प्रतिदीप्ति वीडियो माइक्रोस्कोपी का उपयोग प्रक्रियाओं रह अध्ययन करने की क्षमता है. सेल करने वाली सेल मानव इम्यूनो वायरस के ट्रांसमिशन के दौरान मानव इम्यूनो वायरस कोर प्रोटीन की गतिविधियों पर नज़र रखने के लिए, हम एचआईवी के एक संक्रामक आणविक क्लोन के संदर्भ में चुप प्रोटीन, एचआईवी चुप - iGFP बुलाया GFP टैग. हम इस वायरल वीडियो confocal माइक्रोस्कोपी का उपयोग क्लोन अध्ययन. निम्नलिखित कल्पना प्रयोग में, हम चुप - iGFP एचआईवी के साथ एक मानव टी सेल लाइन transfect, और हम fluorescently लेबल असंक्रमित सीडी 4 + टी कोशिकाओं को वायरस के लिए लक्ष्य कोशिकाओं के रूप में सेवा का उपयोग करें. विभिन्न फ्लोरोसेंट लेबल हम कहनेवाला संरचनाओं के पार आसानी से वायरल उत्पादन और परिवहन का पालन कर सकते हैं का प्रयोग virological synapses बुलाया. सरल गैस पारगम्य इमेजिंग कक्षों हमें दिनों मिनट से जीना confocal माइक्रोस्कोपी के साथ synapses निरीक्षण करने के लिए अनुमति देते हैं. इन तरीकों वायरल प्रोटीन को ट्रैक के रूप में वे एक कक्ष से अगले कदम के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

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Visualizing Cell-to-cell Transfer of HIV using Fluorescent Clones of HIV and Live Confocal Microscopy

यह कल्पना प्रयोग एचआईवी के रहते confocal इमेजिंग प्रयोगों के लिए एक फ्लोरोसेंट आणविक क्लोन का उपयोग करने के लिए एक गाइड है.

Visualizing एचआईवी के स्थानांतरण सेल के लिए सेल एचआईवी और लाइव confocal माइक्रोस्कोपी के प्रतिदीप्त क्लोन का उपयोग

By fusing the green fluorescent protein to their favorite proteins, biologists now have the ability to study living complex cellular processes using ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Specific Marking of HIV-1 Positive Cells using a Rev-dependent Lentiviral Vector Expressing the Green Fluorescent Protein

एचआईवी -1 सकारात्मक कक्ष का उपयोग एक रेव निर्भर lentiviral वेक्टर हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन व्यक्त की विशिष्ट चिह्नित

Most of HIV-responsive expression vectors are based on the HIV promoter, the long terminal repeat (LTR). While responsive to an early HIV protein, Tat, ...

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

V3 के एचआईवी -1 tropism के genotypic निष्कर्ष का प्रयोग जनसंख्या आधारित अनुक्रमण

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Structure of HIV-1 Capsid Assemblies by Cryo-electron Microscopy and Iterative Helical Real-space Reconstruction

क्रायो - इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा एचआईवी -1 capsid विधानसभाओं की संरचना और चलने का पेचदार रियल अंतरिक्ष पुनर्निर्माण

Cryo-electron microscopy (cryo-EM), combined with image processing, is an increasingly powerful tool for structure determination of macromolecular protein ...

Prediction of HIV-1 Coreceptor Usage (Tropism) by Sequence Analysis using a Genotypic Approach

Prediction of HIV-1 Coreceptor Usage Tropism by Sequence Analysis using a Genotypic Approach

एचआईवी 1 अनुक्रम विश्लेषण द्वारा Coreceptor का उपयोग (tropism) की भविष्यवाणी एक genotypic दृष्टिकोण का उपयोग

Maraviroc (MVC) is the first licensed antiretroviral drug from the class of coreceptor antagonists. It binds to the host coreceptor CCR5, which is used by ...

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

एचआईवी-1 कोर की इन विट्रो Uncoating में

The genome of the retroviruses is encased in a capsid surrounded by a lipid envelope. For lentiviruses, such as HIV-1, the conical capsid shell is ...

Rapid Screening of HIV Reverse Transcriptase and Integrase Inhibitors

एचआईवी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस और इंटिग्रेस inhibitors की तेजी से जांच

Although a number of anti HIV drugs have been approved, there are still problems with toxicity and drug resistance. This demonstrates a need to identify ...

Conformational Evaluation of HIV-1 Trimeric Envelope Glycoproteins Using a Cell-based ELISA Assay

एक सेल आधारित एलिसा परख का उपयोग एचआईवी -1 trimeric लिफाफा glycoproteins के गठनात्मक मूल्यांकन

HIV-1 envelope glycoproteins (Env) mediate viral entry into target cells and are essential to the infectious cycle. Understanding how those glycoproteins ...

Isolation of Exosomes from the Plasma of HIV-1 Positive Individuals

एचआईवी -1 सकारात्मक व्यक्तियों के प्लाज्मा से Exosomes का अलगाव

Exosomes are small vesicles ranging in size from 30 nm to 100 nm that are released both constitutively and upon stimulation from a variety of cell types. ...

Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1

फेगोसोम प्रवासन और वेग लाइव प्राथमिक मानव मैक्रोफेज एचआईवी -1 से संक्रमित में मापा

Macrophages are phagocytic cells that play a major role at the crossroads between innate and specific immunity. They can be infected by the human ...

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

का नाप<em&gt; इन विट्रो</em&gt; एचआईवी -1 Preintegration परिसर की एकता गतिविधि

HIV-1 envelope proteins engage cognate receptors on the target cell surface, which leads to viral-cell membrane fusion followed by the release of the ...