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Visualizing Cell-to-cell Transfer of HIV using Fluorescent Clones of HIV and Live Confocal Microscopy

By fusing the green fluorescent protein to their favorite proteins, biologists now have the ability to study living complex cellular processes using ...

University of California, Davis

&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x65B9;&#x6848;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8FDE;&#x8D2F; anti-Stokes &#x62C9;&#x66FC;&#x6563;&#x5C04; (&#x8F66;) &#x955C;&#x4FE1;&#x53F7; (F) &#x5411;&#x524D;&#x548C;&#x5411;&#x540E; &#xFF08;epi-E&#xFF09; &#x4F7F;&#x7528;&#x65F6;&#x95F4;&#x76F8;&#x5173;&#x5355;&#x5149;&#x5B50;&#x8BA1;&#x6570; &#xFF08;TCSPC&#xFF09; &#x5355;&#x4E2A;&#x96EA;&#x5D29;&#x5149;&#x7535;&#x4E8C;&#x6781;&#x7BA1; (APD) &#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x7684;&#x65B9;&#x5411;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B89;&#x88C5;&#x955C;&#x50CF;&#x660E;&#x786E;&#x8DDD;&#x79BB;&#x4E4B;&#x4E0A;&#x7684;&#x8BE5;&#x793A;&#x4F8B;&#x5411;&#x524D;&#x5206;&#x6563; F &#x8F66;&#x4FE1;&#x53F7;&#x56DE;&#x5BFC;&#x81F4; F &#x548C; E &#x8F66;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7A7A;&#x95F4;&#x91CD;&#x53E0;&#x7684;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5BA2;&#x89C2;&#x53CD;&#x6620;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x65C5;&#x6E38;&#x9644;&#x52A0;&#x7684;&#x8DDD;&#x79BB; F &#x8F66;&#x4FE1;&#x53F7;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E; E &#x8F66;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;TCSPC &#x7136;&#x540E;&#x5141;&#x8BB8;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x65F6;&#x95F4;&#x57DF;&#x4E2D;&#x89E3;&#x51B3;&#x3002;&#x8FD9;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E00;&#x79CD;&#x9AD8;&#x6548;&#x3001; &#x7B80;&#x5355;&#x548C;&#x7D27;&#x51D1;&#x7684;&#x8F66;&#x4FE1;&#x53F7;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x5206;&#x6790;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x751F;&#x6D3B;&#x6765;&#x81EA;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x95F4;&#x5145;&#x8D28;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8102;&#x80AA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x5411;&#x524D;&#x548C;&#x5411;&#x540E;&#x8F66;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x3002;

&#x4E0E;&#x5355;&#x4E2A;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x76F8;&#x5173;&#x5355;&#x5149;&#x5B50;&#x8BA1;&#x6570;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x5411;&#x524D;&#x548C; epi &#x8F66;&#x955C;&#x3002;

We present a novel scheme to simultaneously detect coherent anti-Stokes Raman scattering (CARS) microscopy signals in the forward (F) and backward (epi - E) direction with a single avalanche photodiode (APD) detector using time-correlated single photon counting (TCSPC). By installing a mirror at a well-defined distance above the sample the forward-scattered F-CARS signal is reflected back into the microscope objective leading to spatial overlap of the F and E-CARS signals. Due to traveling an additional distance the F-CARS signal is time delayed relative to the E-CARS signal. TCSPC then allows for the two signals to be resolved in the time domain. This results in an efficient, simple, and compact method of CARS signal detection. We demonstrate this technique by analyzing forward and backward CARS signals obtained by imaging living adipocyte cells derived from human mesenchymal stem cells.

Simultaneous forward and epi-CARS microscopy with a single detector by time-correlated single photon counting.

Nous pr&#xE9;sentons un nouveau mod&#xE8;le pour d&#xE9;tecter simultan&#xE9;ment anti-Stokes coh&#xE9;rente de diffusion Raman (CARS) signaux de microscopie dans les d&#xE9;clarations prospectives (F) et arri&#xE8;re (epi - E) en direction d&#x26;#39;une photodiode &#xE0; avalanche unique (APD) d&#xE9;tecteur &#xE0; l&#x26;#39;aide du temps corr&#xE9;l&#xE9;e comptage de photon unique ( TCSPC). En installant un miroir &#xE0; une distance bien d&#xE9;finie ci-dessus de l&#x26;#39;&#xE9;chantillon de l&#x26;#39;diffus&#xE9;e vers l&#x26;#39;avant F-CARS signal est r&#xE9;fl&#xE9;chie vers l&#x26;#39;objectif du microscope conduisant &#xE0; chevauchement spatial des signaux F et E-CARS. En raison de voyager sur une distance suppl&#xE9;mentaire des F-CARS signal est temporis&#xE9;e par rapport au signal E-CARS. TCSPC permet alors pour les deux signaux doivent &#xEA;tre r&#xE9;solus dans le domaine temporel. Il en r&#xE9;sulte une m&#xE9;thode efficace, simple et compact de d&#xE9;tection de signal CARS. Nous validons cette technique par l&#x26;#39;analyse de signaux avant et arri&#xE8;re obtenues par imagerie CARS vivant adipocytes issus de cellules souches m&#xE9;senchymateuses humaines.

Transf&#xE9;rer simultan&#xE9;e et Epi-CARS Microscopy avec un seul d&#xE9;tecteur par corr&#xE9;lation temporelle comptage de photons uniques

Wir pr&auml;sentieren ein neues Schema gleichzeitig erkennen koh&auml;renten Anti-Stokes Raman Streuung (Fahrzeuge) Mikroskopie Signale weiterleiten (F) und r&uuml;ckw&auml;rts (Epi - E) Richtung mit einem einzigen Lawine-Photodioden (APD)-Detektor mit Zeit korrelierte single-Photon counting (TCSPC). Durch die Installation eines Spiegels in einem genau definierten Abstand oben im Beispiel spiegelt sich das vorw&auml;rtsgestreutem F-CARS-Signal wieder in das Mikroskop-Ziel zur r&auml;umlichen &Uuml;berschneidung der F und E-CARS Signale. Durch Reisen einen zus&auml;tzlichen Abstand signalisieren die F-Autos zeitverz&ouml;gert ist im Vergleich zu den E-Autos-Signal. TCSPC erm&ouml;glicht dann die beiden Signale in der Zeitdom&auml;ne aufgel&ouml;st werden. Daraus ergibt sich eine effiziente, einfache und kompakte Methode der Autos Signalerkennung. Wir zeigen diese Technik durch die Analyse der vorw&auml;rts- und R&uuml;ckw&auml;rtsbewegung Autos-Signale, die durch Bildgebung Leben Adipozyt Zellen aus humaner mesenchymaler Stammzellen gewonnen.

Gleichzeitige vorw&auml;rts und die Epi-CARS-Mikroskopie mit einem einzigen Detektor durch korrelierte Zeit single-Photon z&auml;hlen.

Vi presentiamo uno schema romanzo di rilevare contemporaneamente coerente anti-Stokes Raman scattering (automobili) microscopia segnali nella (F) in avanti e all&#39;indietro (epi - E) direzione con un rivelatore a fotodiodo (APD) singola valanga utilizzando correlati nel tempo single photon counting (TCSPC). Con l&#39;installazione di uno specchio a distanza ben definita sopra il campione il segnale F-auto sparse in avanti viene riflessa nuovamente dentro l&#39;obiettivo del microscopio che portano alla sovrapposizione spaziale dei segnali F e automobili elettriche. A causa di un&#39;ulteriore distanza F-auto segnalano &egrave; tempo in ritardo rispetto al segnale di automobili elettriche. TCSPC permette quindi di due segnali essere risolti nel dominio del tempo. Questo si traduce in un metodo efficiente, semplice e compatto di rilevazione del segnale di automobili. Dimostriamo questa tecnica attraverso l&#39;analisi di segnali auto avanti e indietro ottenuti da imaging vivono le cellule degli adipociti derivate da cellule staminali mesenchimali umane.

Simultanea microscopia avanti ed epi-auto con un singolo rivelatore da correlati nel tempo single photon counting.

&#x6642;&#x9593;&#x76F8;&#x95A2;&#x5358;&#x4E00;&#x5149;&#x5B50;&#x8A08;&#x6570;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30A2;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B7;&#x30A7;&#x30D5;&#x30A9;&#x30C8;&#x30C0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C9;&#xFF08;APD&#xFF09;&#x691C;&#x51FA;&#x5668;&#xFF08;&#x3068;&#x65B9;&#x5411; - &#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x8EE2;&#x9001;&#xFF08;F&#xFF09;&#x3068;&#x5F8C;&#x65B9;&#xFF08;E&#x30A8;&#x30D4;&#xFF09;&#x306B;&#x30B3;&#x30D2;&#x30FC;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#x53CD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30AF;&#x30B9;&#x30E9;&#x30DE;&#x30F3;&#x6563;&#x4E71;&#xFF08;CARS&#xFF09;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30B9;&#x30AD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;TCSPC&#xFF09;&#x3002;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x4E0A;&#x3067;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8DDD;&#x96E2;&#x3067;&#x30DF;&#x30E9;&#x30FC;&#x3092;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x524D;&#x65B9;&#x6563;&#x4E71;F-CARS&#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x3001;F&#x3068;E-CARS&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x91CD;&#x306A;&#x308A;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x5BFE;&#x7269;&#x306B;&#x623B;&#x3063;&#x3066;&#x53CD;&#x6620;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x8DDD;&#x96E2;&#x3092;&#x79FB;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;F-CARS&#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x3001;E-CARS&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x9045;&#x5EF6;&#x6642;&#x9593;&#x3067;&#x3059;&#x3002; TCSPC&#x306F;&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; CARS&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x304B;&#x3064;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30C8;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x524D;&#x65B9;&#x3068;&#x5F8C;&#x65B9;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x9593;&#x8449;&#x7CFB;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x8102;&#x80AA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;CARS&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x89E3;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x6642;&#x9593;&#x76F8;&#x95A2;&#x5358;&#x4E00;&#x5149;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x5668;&#x3068;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x8EE2;&#x9001;&#x3068;&#x30A8;&#x30D4;CARS&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;

&#xC120;&#xBB3C;&#xC774; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C; anti-Stokes &#xB77C;&#xB9CC; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558; &#xC18C;&#xC124; &#xAD6C;&#xC131;&#xD45C; &#xC0B0;&#xB780; (&#xC790;&#xB3D9;&#xCC28;) &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC2E0;&#xD638; (F) &#xC55E;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB4A4;&#xB85C; (epi-E) &#xC2DC;&#xAC04; &#xC0C1;&#xAD00; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAD11;&#xC790; (TCSPC) &#xACC4;&#xC0B0;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB208;&#xC0AC;&#xD0DC; &#xD3EC;&#xD1A0; &#xB2E4;&#xC774;&#xC624;&#xB4DC; (APD) &#xAC80;&#xCD9C;&#xAE30;&#xC640; &#xBC29;&#xD5A5;. &#xC0D8;&#xD50C; &#xC704;&#xC5D0; &#xC798; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xAC70;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC70;&#xC6B8;&#xC744; &#xC124;&#xCE58; &#xD558; &#xC5EC; &#xC55E;&#xC73C;&#xB85C; &#xD769;&#xC5B4;&#xC838; F &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC2E0;&#xD638; F E-&#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC2E0;&#xD638; &#xACF5;&#xAC04; &#xACB9;&#xCE68; &#xC120;&#xB3C4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBAA9;&#xD45C;&#xC5D0; &#xBC18;&#xC601; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; &#xAC70;&#xB9AC; &#xC5EC;&#xD589;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; F-&#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC804;&#xC790; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC5F0; &#xB41C; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC2E0;&#xD638;. TCSPC&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xACB0;&#xACFC; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC80;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294;, &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0;, &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xCEF4;&#xD329;&#xD2B8;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC0B4;&#xACE0; &#xC788;&#xB294; &#xC778;&#xAC04; &#xC911;&#xAC04; &#xC5FD; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xCCB4;&#xD615; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5BB;&#xC740; &#xC815;&#xBC29;&#xD5A5; &#xBC0F; &#xC5ED;&#xBC29;&#xD5A5; &#xC790;&#xB3D9;&#xCC28; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2DC;&#xAC04; &#xC0C1;&#xAD00; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAD11;&#xC790;&#xB97C; &#xACC4;&#xC0B0; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAC80;&#xCD9C;&#xAE30;&#xC640; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC55E;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xD53C; &#xCC28; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;.

Se presenta un novedoso sistema para detectar al mismo tiempo coherente de lucha contra la dispersi&#xF3;n Raman Stokes (CARS) se&#xF1;ales de microscop&#xED;a en el avance (F) y hacia atr&#xE1;s (epi - E) direcci&#xF3;n con un solo fotodiodo avalancha (APD) con detector de tiempo de conteo de fotones correlacionados sola ( TCSPC). Mediante la instalaci&#xF3;n de un espejo a una distancia bien definida sobre la muestra de la dispersa hacia el F-CARS se&#xF1;al es reflejada de nuevo en el objetivo del microscopio que conduce a superposici&#xF3;n espacial de las se&#xF1;ales de F y E CARS-. Debido a viajar una distancia adicional de los F-CARS es se&#xF1;al de tiempo de retraso con respecto a la se&#xF1;al de E-CARS. TCSPC continuaci&#xF3;n, permite que las dos se&#xF1;ales que deben resolverse en el dominio del tiempo. Esto da como resultado un m&#xE9;todo eficaz, sencilla y compacta de detecci&#xF3;n de la se&#xF1;al CARS. Se demuestra que esta t&#xE9;cnica mediante el an&#xE1;lisis de las se&#xF1;ales de avance y retroceso COCHES obtenidos por im&#xE1;genes que viven las c&#xE9;lulas adipocitos derivadas de c&#xE9;lulas madre mesenquimales.

Adelante simult&#xE1;nea y Microscop&#xED;a de Epi-CARS con un solo detector de Time-correlacionada solo fot&#xF3;n Contando

&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x5265;&#x593A;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6297;&#x764C;&#x7597;&#x6CD5;&#x5386;&#x53F2;&#x4E0A;&#x906D;&#x5230;&#x4E86;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x6210;&#x529F;&#x3002;&#x4E59;&#x4E8C;&#x9187;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178; deiminase (ADI PEG20) &#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x5DF2;&#x91CD;&#x65B0;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x5174;&#x8DA3;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x5265;&#x593A;&#x67D0;&#x4E9B;&#x764C;&#x75C7;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;ADI PEG20 &#x7684;&#x7597;&#x6548;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x5173; argininosuccinate &#x5408;&#x6210;&#x9176; (&#x5C41;&#x80A1;) &#x865A;&#x3002;CWR22Rv1 &#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0D;&#x8981;&#x53D1;&#x8868;&#x7684;&#x5C41;&#x80A1;&#xFF0C;&#x901F;&#x7387;&#x9650;&#x5236;&#x9176;&#x5408;&#x6210;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5BB9;&#x6613;&#x53D7;&#x5230; ADI-PEG20 &#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x7531; 0.3 microg &#x6BEB;&#x5347; ADI PEG20 &#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x53D1;&#x751F; 96 &#x5C0F;&#x65F6;&#x540E;&#x5904;&#x7406;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x3002;ADI-PEG20 &#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x7531; micropositron &#x53D1;&#x5C04;&#x8BA1;&#x7B97;&#x673A;&#x65AD;&#x5C42;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x793A;&#x964D;&#x4F4E;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x6D3B;&#x6027;&#x4EE5;&#x53CA;&#x51CF;&#x5C11;&#x5355;&#x836F;&#x548C;&#x4E0E;&#x591A;&#x897F;&#x7D2B;&#x6749;&#x9187;&#x5BF9; CWR22Rv1 &#x9F20;&#x6807;&#x5F02;&#x79CD;&#x79FB;&#x690D;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x751F;&#x957F;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x81EA;&#x566C; ADI PEG20 &#x7531;&#x5355;&#x4E00;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6D88;&#x8017;&#x6240;&#x81F4;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x81EA;&#x566C;&#x662F; 0.3 microg/mL ADI PEG20 &#x6CBB;&#x7597; 1 &#x5230; 4 &#x5C0F;&#x65F6;&#x5185;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x5E76;&#x4E14;&#x521D;&#x6B65;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x6027;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5230; ADI PEG20 CWR22Rv1 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x7531;&#x6C2F;&#x55B9;&#x548C; Beclin1 siRNA &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x81EA;&#x566C;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86;&#xFF0C;&#x52A0;&#x901F; ADI PEG20 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;PC3 &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x90FD;&#x8868;&#x793A;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x5C41;&#x80A1;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x63A5;&#x53D7;&#x81EA;&#x566C;&#x548C;&#x9002;&#x5E94;&#x81EA;&#x566C;&#x6291;&#x5236;&#x548C; ADI PEG20 &#x6CBB;&#x7597;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;LNCaP &#x7EC6;&#x80DE;&#x9AD8;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5C41;&#x80A1;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x8010; ADI PEG20 &#x548C;&#x81EA;&#x566C;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x70B9;&#x5230;&#x5C41;&#x80A1;&#x865A;&#x3001; &#x81EA;&#x566C;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684; ADI PEG20 &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;88 &#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x6837;&#x672C;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x82AF;&#x7247;&#x6280;&#x672F;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x7684;&#x5C41;&#x80A1;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; ADI PEG20 &#x6F5C;&#x5728;&#x65B0;&#x578B;&#x7597;&#x6CD5;&#x6CBB;&#x7597;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;

&#x4F5C;&#x4E3A;&#x65B0;&#x578B;&#x6CBB;&#x7597;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C;&#x7684;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178; deiminase &#x8BF1;&#x5BFC;&#x81EA;&#x566C;&#x548C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;

Arginine deprivation as an anticancer therapy has historically been met with limited success. The development of pegylated arginine deiminase (ADI-PEG20) has renewed interest in arginine deprivation for the treatment of some cancers. The efficacy of ADI-PEG20 is directly correlated with argininosuccinate synthetase (ASS) deficiency. CWR22Rv1 prostate cancer cells do not express ASS, the rate-limiting enzyme in arginine synthesis, and are susceptible to ADI-PEG20 in vitro. Interestingly, apoptosis by 0.3 microg/mL ADI-PEG20 occurs 96 hours posttreatment and is caspase independent. The effect of ADI-PEG20 in vivo reveals reduced tumor activity by micropositron emission tomography as well as reduced tumor growth as a monotherapy and in combination with docetaxel against CWR22Rv1 mouse xenografts. In addition, we show autophagy is induced by single amino acid depletion by ADI-PEG20. Here, autophagy is an early event that is detected within 1 to 4 hours of 0.3 microg/mL ADI-PEG20 treatment and is an initial protective response to ADI-PEG20 in CWR22Rv1 cells. Significantly, the inhibition of autophagy by chloroquine and Beclin1 siRNA knockdown enhances and accelerates ADI-PEG20-induced cell death. PC3 cells, which express reduced ASS, also undergo autophagy and are responsive to autophagy inhibition and ADI-PEG20 treatment. In contrast, LNCaP cells highly express ASS and are therefore resistant to both ADI-PEG20 and autophagic inhibition. These data point to an interrelationship among ASS deficiency, autophagy, and cell death by ADI-PEG20. Finally, a tissue microarray of 88 prostate tumor samples lacked expression of ASS, indicating ADI-PEG20 is a potential novel therapy for the treatment of prostate cancer

Arginine deiminase as a novel therapy for prostate cancer induces autophagy and caspase-independent apoptosis.

Privation d&#39;arginine comme traitement anticanc&eacute;reux a historiquement &eacute;t&eacute; rencontr&eacute;e un succ&egrave;s limit&eacute;. Le d&eacute;veloppement de p&eacute;gyl&eacute; arginine d&eacute;siminase (ADI-PEG20) a renouvel&eacute; l&#39;int&eacute;r&ecirc;t privation d&#39;arginine pour le traitement de certains cancers. L&#39;efficacit&eacute; de l&#39;ADI-PEG20 est directement corr&eacute;l&eacute;e avec le d&eacute;ficit en argininosuccinate synth&eacute;tase (ASS). Les cellules de cancer de la prostate CWR22Rv1 n&#39;expriment pas de cul, l&#39;enzyme limitante dans la synth&egrave;se de l&#39;arginine et sont sensibles &agrave; l&#39;ADI-PEG20 in vitro. Fait int&eacute;ressant, l&#39;apoptosis par 0,3 microg/mL ADI-PEG20 produit apr&egrave;s le traitement 96 heures et est ind&eacute;pendant de caspase. L&#39;effet de l&#39;ADI-PEG20 in vivo r&eacute;v&egrave;le l&#39;activit&eacute; tumorale r&eacute;duite par tomographie par &eacute;mission de micropositron mais aussi r&eacute;duit la croissance de la tumeur en monoth&eacute;rapie et en association avec le doc&eacute;taxel contre les x&eacute;nogreffes de souris CWR22Rv1. En outre, nous montrons autophagie est induite par le seul acide amin&eacute; appauvrissement par ADI-PEG20. Ici, autophagie est un &eacute;v&eacute;nement pr&eacute;coce qui est d&eacute;tect&eacute; dans les 1 &agrave; 4 heures de traitement de ADI-PEG20 0,3 microg/mL et est une premi&egrave;re r&eacute;ponse protectrice &agrave; ADI-PEG20 dans les cellules CWR22Rv1. Significativement, l&#39;inhibition de l&#39;autophagie de la chloroquine et Beclin1 siRNA knockdown am&eacute;liore et acc&eacute;l&egrave;re la mort cellulaire induite par l&#39;ADI-PEG20. Cellules PC3, qui expriment le cul r&eacute;duit, &eacute;galement subissent l&#39;autophagie et sont sensibles &agrave; l&#39;inhibition de l&#39;autophagie et traitement de l&#39;ADI-PEG20. En revanche, cellules LNCaP hautement expriment ASS et r&eacute;sistent donc &agrave; ADI-PEG20 et inhibition de l&#39;autophagie. Ces donn&eacute;es indiquent une corr&eacute;lation entre une carence en ASS, autophagie et la mort cellulaire par ADI-PEG20. Enfin, un tissu microarray de 88 &eacute;chantillons de tumeur de la prostate n&#39;avait pas l&#39;expression de l&#39;&acirc;ne, indiquant QU&#39;ADI-PEG20 est un nouveau traitement potentiel pour le traitement du cancer de la prostate

Arginine d&eacute;siminase comme une nouvelle th&eacute;rapie pour le cancer de la prostate induit autophagie et apoptose caspase-ind&eacute;pendante.

Arginin-Mangel als ein Anti-Krebs-Therapie ist historisch mit begrenztem Erfolg erreicht worden. Die Entwicklung der pegylierte Arginin Deiminase (ADI-PEG20) hat Interesse an Arginin Entbehrungen f&uuml;r die Behandlung von einigen Krebsarten erneuert. Die Wirksamkeit von ADI-PEG20 ist direkt korreliert mit Argininosuccinat-Synthetase (ASS)-Mangel. CWR22Rv1 Prostatakrebszellen nicht ausdr&uuml;cken, ASS, das geschwindigkeitsbestimmende Enzym in der Arginin-Synthese, und anf&auml;llig f&uuml;r ADI-PEG20 in-vitro. Interessanterweise Apoptosis von 0,3 &micro;g/mL ADI-PEG20 tritt 96 Stunden Posttreatment und Caspase-unabh&auml;ngigen. Die Wirkung von ADI-PEG20 in-vivo zeigt reduzierte Tumor-Aktivit&auml;t von Micropositron-Emissions-Tomographie als auch reduziert Tumorwachstum als Monotherapie und in Kombination mit Docetaxel gegen CWR22Rv1 Maus Xenografts. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir, dass Autophagy durch einzelne Aminos&auml;ure Ersch&ouml;pfung von ADI-PEG20 induziert wird. Autophagy ist hier ein fr&uuml;hes Ereignis, das innerhalb von 1 bis 4 Stunden 0,3 &micro;g/mL ADI-PEG20 Behandlung erkannt wird und ist eine erste sch&uuml;tzende Antwort auf ADI-PEG20 in den CWR22Rv1 Zellen. Deutlich, die Hemmung der Autophagy von Chloroquin und Beclin1 SiRNA Niederschlag verbessert und beschleunigt die ADI-PEG20-induced Zellentod. PC3-Zellen, die express reduzierte ASS, auch Autophagy zu unterziehen und reagieren auf Autophagy Hemmung und ADI-PEG20 Behandlung. Im Gegensatz dazu LNCaP Zellen sehr schnelles ASS und sind daher best&auml;ndig gegen ADI-PEG20 und autophagic Hemmung. Diese Daten deuten auf eine Wechselwirkung zwischen ASS-Mangel, Autophagy und Zelltod durch ADI-PEG20. Schlie&szlig;lich fehlte ein Gewebe Microarray 88 Prostata Tumor Proben Ausdruck der Esel, die angibt, dass ADI-PEG20 ist eine potenzielle neue Therapie zur Behandlung von Prostatakrebs

Arginin Deiminase als eine neuartige Therapie f&uuml;r Prostatakrebs induziert Autophagy und Caspase-unabh&auml;ngige Apoptose.

Privazione di arginina come terapia antitumorale storicamente &egrave; stata accolta con successo limitato. Lo sviluppo di peghilato arginina peptidilico (ADI-PEG20) ha rinnovato interesse nella privazione di arginina per il trattamento di alcuni tumori. L&#39;efficacia di ADI-PEG20 &egrave; direttamente correlata con argininosuccinate sintetase (ASS). CWR22Rv1 cellule tumorali della prostata non esprimono ASS, l&#39;enzima di limitazione della velocit&agrave; in sintesi di arginina e sono suscettibili di ADI-PEG20 in vitro. &Egrave; interessante notare, apoptosis da 0.3 microg/mL ADI-PEG20 &egrave; caspasi indipendente e si verifica posttreatment 96 ore. L&#39;effetto di ADI-PEG20 in vivo rivela tumore ridotta attivit&agrave; di tomografia dell&#39;emissione del micropositron cos&igrave; come riduce la crescita del tumore come una monoterapia e in combinazione con docetaxel contro xenotrapianti mouse CWR22Rv1. Inoltre, mostriamo autophagy &egrave; indotta dalla deplezione di singolo amminoacido da ADI-PEG20. Qui, autophagy &egrave; un evento precoce che viene rilevato all&#39;interno di 1 a 4 ore di trattamento di ADI-PEG20 0.3 microg/mL ed &egrave; una risposta protettiva iniziale di ADI-PEG20 nelle cellule CWR22Rv1. Significativamente, l&#39;inibizione di autophagy clorochina e Beclin1 siRNA atterramento migliora e accelera la morte cellulare indotta da ADI-PEG20. Cellule PC3, che esprimono ASS ridotta, anche sottoposti a autophagy e sono sensibili all&#39;inibizione autophagy e ADI-PEG20 trattamento. In contrasto, le cellule LNCaP altamente express culo e quindi sono resistenti all&#39;ADI-PEG20 sia autophagic inibizione. Questi dati indicano un&#39;interrelazione tra deficit, autophagy e morte cellulare da ADI-PEG20 ASS. Infine, un microarray di tessuti di 88 campioni di tumore alla prostata mancava di espressione dell&#39;asino, che indica che Adi-PEG20 &egrave; una romanzo potenziale terapia per il trattamento del cancro della prostata

Arginina peptidilico come una romanzo terapia per il cancro alla prostata induce autophagy e apoptosi caspasi-indipendente.

&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x5265;&#x596A;&#x6297;&#x764C;&#x7642;&#x6CD5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x6210;&#x529F;&#x3092;&#x6B74;&#x53F2;&#x7684;&#x306B;&#x6E80;&#x305F;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DA;&#x30B0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3; &#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x50CD;&#x304F; (ADI-PEG20) &#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x6B20;&#x4E4F;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x764C;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x95A2;&#x5FC3;&#x3092;&#x30EA;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30A2;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;ADI PEG20 &#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30CE;&#x30B3;&#x30CF;&#x30AF;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20; (&#x304A;&#x5C3B;) &#x6B20;&#x4E4F;&#x75C7;&#x95A2;&#x9023;&#x3067;&#x3059;&#x3002;CWR22Rv1 &#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x304A;&#x5C3B;&#x3001;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5236;&#x9650;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3057;&#x3001;ADI PEG20 &#x751F;&#x4F53;&#x5916;&#x3067;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;0.3 Microg/ml ADI PEG20 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F; 96 &#x6642;&#x9593;&#x5F8C;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;ADI PEG20 in vivo &#x3067;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x524A;&#x6E1B;&#x816B;&#x760D;&#x6D3B;&#x6027; micropositron &#x653E;&#x51FA;&#x65AD;&#x5C64;&#x64AE;&#x5F71;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x3057;&#x540C;&#x69D8;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306F;&#x5358;&#x72EC;&#x7642;&#x6CD5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;CWR22Rv1 &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7570;&#x7A2E;&#x79FB;&#x690D;&#x7247;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x30C9;&#x30BB;&#x30BF;&#x30AD;&#x30BB;&#x30EB;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x67AF;&#x6E07; ADI PEG20 &#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B8;&#x30FC;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B8;&#x30FC; 0.3 Microg/ml ADI PEG20 &#x6CBB;&#x7642;&#x306E; 1 &#x3092; 4 &#x6642;&#x9593;&#x4EE5;&#x5185;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x3001;&#x4FDD;&#x8B77; ADI-PEG20 CWR22Rv1 &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EC;&#x30B9;&#x30DD;&#x30F3;&#x30B9;&#x521D;&#x671F;&#x3067;&#x3059;&#x521D;&#x671F;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30AD;&#x30F3;&#x3068; Beclin1 siRNA &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B8;&#x30FC;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x3001;ADI PEG20 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x52A0;&#x901F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x524A;&#x6E1B;&#x306E;&#x304A;&#x5C3B;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3001;PC3 &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B8;&#x30FC;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B8;&#x30FC;&#x963B;&#x5BB3;&#x3068; ADI PEG20 &#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;LNCaP &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x304A;&#x5C3B;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;ADI PEG20 &#x3068; autophagic &#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x8010;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x304A;&#x5C3B;&#x6B20;&#x4E4F;, &#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B8;&#x30FC;, &#x3068; ADI PEG20 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;88 &#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x816B;&#x760D;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x304A;&#x5C3B;&#x3001;ADI PEG20 &#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x65B0;&#x898F;&#x7642;&#x6CD5;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306B;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x305F;

&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x50CD;&#x304F;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x764C;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;&#x6CBB;&#x7642;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B8;&#x30FC;&#x3068;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; &#xBD80;&#xC871; &#xD56D; &#xC554; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xC131;&#xACF5;&#xC744; &#xB9CC;&#xB09C; &#xC5ED;&#xC0AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC788;&#xB2E4;. Pegylated &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; deiminase (ADI PEG20)&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC77C;&#xBD80; &#xC554; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC744; &#xAC31;&#xC2E0; &#xD588;&#xB2E4;. ADI peg20&#xC758; &#xD6A8;&#xB2A5; argininosuccinate &#xD569;&#xC131; (&#xC5C9;&#xB369;&#xC774;) &#xACB0;&#xD54D;&#xACFC; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xAD00; &#xB41C;&#xB2E4;. CWR22Rv1 &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5C9;&#xB369;&#xC774;, &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC81C;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xD558; &#xACE0; &#xC548;&#xB155; PEG20 &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0; &#xCDE8;&#xC57D; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, 0.3 microg/mL ADI peg20&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; apoptosis 96 &#xC2DC;&#xAC04; posttreatment &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xBA70; caspase &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. ADI PEG20 in vivo &#xD6A8;&#xACFC; monotherapy&#xB85C; &#xC885;&#xC591; &#xC131;&#xC7A5;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; CWR22Rv1 &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; xenografts &#xC0C1;&#xB300;&#xB85C; docetaxel &#xAC10;&#xC18C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; micropositron &#xBC29;&#xCD9C; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xC885;&#xC591; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xC5EC; autophagy ADI peg20&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xACE0;&#xAC08;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xBC1C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, autophagy 0.3 microg/mL ADI PEG20 &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; 1 ~ 4 &#xC2DC;&#xAC04; &#xC774;&#xB0B4; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC548;&#xB155;-PEG20 CWR22Rv1 &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0; &#xCD08;&#xAE30; &#xBCF4;&#xD638; &#xB300; &#xCD08;&#xAE30; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD06C;&#xAC8C;, &#xD074;&#xB85C;&#xB85C;&#xD038;&#xACFC; Beclin1 siRNA &#xCD5C;&#xC800;&#xC758;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; autophagy&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xAC15;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xAC00;&#xC18D; ADI PEG20 &#xC720;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;. &#xB610;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC5C9;&#xB369;&#xC774; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; PC3 &#xC140; autophagy &#xBC1B;&#xC544;&#xC57C; &#xD558; &#xACE0; autophagy &#xC800;&#xD574;&#xC640; ADI PEG20 &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xBC18;&#xC751;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, LNCaP &#xC140; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC5C9;&#xB369;&#xC774; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4;&#xC640; ADI peg20&#xACFC; autophagic &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xC5C9;&#xB369;&#xC774; &#xACB0;&#xD54D;, autophagy, ADI peg20&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xAC00;&#xB9AC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, 88 &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC885;&#xC591; &#xC0D8;&#xD50C; &#xC870;&#xC9C1; microarray &#xC5C9;&#xB369;&#xC774;, ADI peg20&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xBD80;&#xC871;

&#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB85C; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC; deiminase autophagy &#xBC0F; caspase &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; apoptosis&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;.

Privaci&oacute;n de la arginina como un tratamiento contra el c&aacute;ncer ha cumplido hist&oacute;ricamente con un &eacute;xito limitado. El desarrollo de deiminase de arginina pegilada (ADI-PEG20) ha renovado el inter&eacute;s en la privaci&oacute;n de la arginina para el tratamiento de algunos tipos de c&aacute;ncer. La eficacia de la ADI-PEG20 se correlaciona directamente con deficiencia de Argininosuccinato sintetasa (culo). CWR22Rv1 las c&eacute;lulas de c&aacute;ncer de pr&oacute;stata no expresan culo, la enzima tarifa-limitadora en la s&iacute;ntesis de arginina y son susceptibles a ADI-PEG20 in vitro. Curiosamente, apoptosis por 0.3 microg/mL ADI-PEG20 ocurre posttreatment de 96 horas y es independiente de la caspasa. El efecto de ADI-PEG20 in vivo revela la actividad tumoral reducida por tomograf&iacute;a de emisi&oacute;n de micropositron as&iacute; como reduce el crecimiento del tumor como monoterapia y en combinaci&oacute;n con docetaxel contra xenoinjertos de rat&oacute;n CWR22Rv1. Adem&aacute;s, demostramos autofagia es inducida por el agotamiento de solo amino&aacute;cido por ADI-PEG20. Aqu&iacute;, autofagia es un evento temprano que se detecta dentro de 1 a 4 horas de tratamiento de ADI-PEG20 de 0.3 microg/mL y es una respuesta protectora inicial a ADI-PEG20 en c&eacute;lulas de CWR22Rv1. Significativamente, la inhibici&oacute;n de la autofagia por cloroquina y Beclin1 siRNA ca&iacute;da mejora y acelera la muerte celular inducida por ADI-PEG20. Las c&eacute;lulas PC3, que expresan el culo reducido, tambi&eacute;n se someten a autofagia y responden a la inhibici&oacute;n de la autofagia y tratamiento ADI-PEG20. En cambio, las c&eacute;lulas LNCaP altamente expresan el culo y por lo tanto son resistentes a la inhibici&oacute;n de la autofagia tanto ADI-PEG20. Estos datos apuntan a una interrelaci&oacute;n entre la deficiencia culo, autofagia y muerte celular por ADI-PEG20. Por &uacute;ltimo, un microarray de tejido de 88 muestras de tumor de pr&oacute;stata carec&iacute;a de expresi&oacute;n de culo, indicando que Adi-PEG20 es una nueva terapia potencial para el tratamiento del c&aacute;ncer de pr&oacute;stata

Arginine deiminase como una nueva terapia para el c&aacute;ncer de pr&oacute;stata induce la autofagia y apoptosis caspasa-independiente.

&#x9F20;&#x6807; (m) &#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE; (hESC CMs) &#x5DF2;&#x77E5;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x4E0D;&#x6210;&#x719F;&#x7ECF;&#x52A8;&#x6001;&#x5C0F;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5CF0;&#x503C;&#x632F;&#x5E45;&#x548C;&#x6210;&#x4EBA;&#x76F8;&#x6BD4;&#x6162;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7B49;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6210;&#x719F;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x548C;&#x6548;&#x7387;&#x7684; Ca(2+) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x5728; m &#x548C; hESC CMs&#x3001; &#x6A2A;&#x5411; (t) &#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x548C;&#x5176;&#x5BF9;&#x533A;&#x57DF;&#x7ECF;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x5728; m &#x548C; hESC CMs&#xFF0C;&#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x8272;&#x548C;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; &#xFF08;AFM&#xFF09; &#x7528;&#x4E8E;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5B58;&#x5728; t-&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3001; &#x7A96; 3&#x3001; amphiphysin-2 &#x548C;&#x4E8C;&#x6C22;&#x5421;&#x5576;&#x7C7B; (DHPRs)&#x3001; &#x5170;&#x5C3C;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53; (RyRs) &#x7684;&#x5171;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x907F;&#x514D;&#x542B;&#x7CCA;&#x4E0D;&#x6E05;&#xFF0C;&#x5355; ESC-CMs&#xFF0C;&#x800C;&#x81EA;&#x53D1;&#x5730;&#x6BB4;&#x6253;&#x96C6;&#x7FA4;&#x533A;&#x57DF;&#x7535;&#x523A;&#x6FC0;&#x7ECF;&#x52A8;&#x6001;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4F7F;&#x7528;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;m &#x548C; hESC CMs &#x8868;&#x660E;&#x6CA1;&#x6709;&#x8054;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4E0E; t-&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x65E2; DHPRs &#x548C; RyRs &#x7684;&#x5171;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x3002;&#x7A96; 3 &#x548C; amphiphysin-2&#xFF0C;t &#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x4E0E;&#x6210;&#x4EBA;&#x7684; CMs&#xFF0C;&#x9C81;&#x68D2;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x4E86;&#x5173;&#x952E;&#x8FD8;&#x4E0D;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x5355; m &#x548C; hESC CMs &#x8DE8;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x662F;&#x5178;&#x578B;&#x7684; CMs &#x7F3A; t &#x5C0F;&#x7BA1;&#x663E;&#x793A;&#x975E;&#x5747;&#x5300;&#x7ECF;&#x52A8;&#x6001;&#x3002;&#x77AC;&#x53D8;&#x7ECF;&#x5F53;&#x5730;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x5CF0;&#x503C;&#x632F;&#x5E45;&#x6BD4;&#x5728; m (+ /-&#x4E0E; 3.05 + /-0.38 0.42 3.50) &#x548C; hESC-CMs &#xFF08;+ /-0.25 + /-0.25 2.72 &#x4E0E; 2.96&#xFF09; &#x7684;&#x4E2D;&#x592E;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x8FB9;&#x7F18;&#x3002;&#x52A8;&#x529B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6BD4;&#x7387;&#x7684;&#x4E0A;&#x5347;&#x5230;&#x5CF0;&#x503C;&#x632F;&#x5E45;&#x548C;&#x77AC;&#x6001;&#x8870;&#x51CF;&#x4E86;&#x4E2D;&#x90E8;&#x5730;&#x533A;&#x4E0E;&#x5916;&#x56F4;&#x8BBE;&#x5907;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x66F4;&#x5FEB;&#x3002;&#x672A;&#x6210;&#x719F;&#x7684; m &#x548C; hESC CMs &#x663E;&#x793A;&#x4E0D;&#x540C;&#x6B65;&#x7684;&#x7ECF;&#x77AC;&#x53D8;&#x7684; t-&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x53CA;&#x57FA;&#x56E0;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x9A7E;&#x9A76;&#x7684; ESC CMs &#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#x3002;

&#x6CA1;&#x6709;&#x6A2A;&#x5411;&#x7684;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5728;&#x8001;&#x9F20;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x975E;&#x5747;&#x5300;&#x7ECF;&#x6CE2;&#x524D;&#x3002;

Mouse (m) and human embryonic stem cell-derived cardiomyocytes (hESC-CMs) are known to exhibit immature Ca(2+) dynamics such as small whole-cell peak amplitude and slower kinetics relative to those of adult. In this study, we examined the maturity and efficiency of Ca(2+)-induced Ca(2+) release in m and hESC-CMs, the presence of transverse (t) tubules and its effects on the regional Ca(2+) dynamics. In m and hESC-CMs, fluorescent staining and atomic force microscopy (AFM) were used to detect the presence of t-tubules, caveolin-3, amphiphysin-2 and colocalization of dihydropyridine receptors (DHPRs) and ryanodine receptors (RyRs). To avoid ambiguities, regional electrically-stimulated Ca(2+) dynamics of single ESC-CMs, rather than spontaneously beating clusters, were measured using confocal microscopy. m and hESC-CMs showed absence of dyads, with neither t-tubules nor colocalization of DHPRs and RyRs. Caveolin-3 and amphiphysin-2, crucial for the biogenesis of t-tubules with robust expression in adult CMs, were also absent. Single m and hESC-CMs displayed non-uniform Ca(2+) dynamics across the cell that is typical of CMs deficient of t-tubules. Local Ca(2+) transients exhibited greater peak amplitude at the peripheral than at the central region for m (3.50 +/- 0.42 vs. 3.05 +/- 0.38) and hESC-CMs (2.96 +/- 0.25 vs. 2.72 +/- 0.25). Kinetically, both the rates of rise to peak amplitude and transient decay were faster for the peripheral relative to the central region. Immature m and hESC-CMs display unsynchronized Ca(2+) transients due to the absence of t-tubules and gene products crucial for their biogenesis. Our results provide insights for driving the maturation of ESC-CMs.

Absence of transverse tubules contributes to non-uniform Ca(2+) wavefronts in mouse and human embryonic stem cell-derived cardiomyocytes.

Souris (m) et humaines cardiomyocytes d&eacute;riv&eacute;s de cellules souches embryonnaires (hESC-CMs) sont connus pour pi&egrave;ce immature Ca(2+) dynamique comme amplitude de petit pic de cellules enti&egrave;res et cin&eacute;tique plus lente par rapport &agrave; ceux des adultes. Dans cette &eacute;tude, nous avons examin&eacute; la maturit&eacute; et l&#39;efficacit&eacute; de la lib&eacute;ration induite par le Ca(2+) Ca(2+) en m et CSEh-CMs, la pr&eacute;sence des tubules transverses (t) et ses effets sur la dynamique r&eacute;gionale de Ca(2+). En m et CSEh-CMs, coloration fluorescente et microscopie &agrave; force atomique (AFM) ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s pour d&eacute;tecter la pr&eacute;sence de tubules en t, cav&eacute;oline-3, 2-amphiphysine et colocalisation des r&eacute;cepteurs dihydropyridine (DHPRs) et les r&eacute;cepteurs de la ryanodine (RyRs). Pour &eacute;viter les ambigu&iuml;t&eacute;s, dynamique de Ca(2+) r&eacute;gionale &eacute;lectriquement stimul&eacute;e de ESC-CMs simples, plut&ocirc;t spontan&eacute;ment grappes de battement, on a mesur&eacute; &agrave; l&#39;aide de la microscopie confocale. m et CSEh-CMs a montr&eacute; l&#39;absence des dyades, tubules t ni de colocalisation de DHPRs et RyRs. Cav&eacute;oline-3 et amphiphysine-2, crucial pour la biogen&egrave;se des tubules en t avec expression robuste en CMs adultes, &eacute;taient &eacute;galement absent. Simple m et CSEh-CMs affichent dynamique Ca(2+) non uniforme dans l&#39;ensemble de la cellule qui est typique des CMs d&eacute;ficient des tubules t. Locales Ca(2+) transitoires ont montr&eacute; une plus grande amplitude de cr&ecirc;te sur le p&eacute;riph&eacute;rique que dans la r&eacute;gion centrale pour m (3.50 +/-0,42 vs 3.05 +/-0,38) et CSEh-CMs (2,96 +/-0,25 vs 2,72 +/-0,25). Cin&eacute;tique, soit au taux de mont&eacute;e &agrave; l&#39;amplitude de cr&ecirc;te et d&eacute;gradation transitoire &eacute;tait plus rapide pour le p&eacute;riph&eacute;rique par rapport &agrave; la r&eacute;gion centrale. M immature et CSEh-CMs d&#39;affichage non synchronis&eacute;s Ca(2+) transitoires, en raison de l&#39;absence des g&egrave;nes et des tubules t produits cruciales pour leur biogen&egrave;se. Nos r&eacute;sultats donnent un aper&ccedil;u pour la conduite de la maturation des ESC-CMs.

Absence de tubules transverses contribue &agrave; diffusee Ca(2+) non uniforme dans des souris et des cardiomyocytes d&eacute;riv&eacute;s de cellules souches embryonnaires humaines.

Maus (m) und menschliche embryonale Stammzellen Cell-derived Cardiomyocytes (hESC-CMs) sind bekannterma&szlig;en unreifen Ca(2+) Dynamik wie kleine ganze Zellen Spitzenamplitude und langsamere Kinetik im Verh&auml;ltnis zu den Erwachsenen zu zeigen. In dieser Studie untersuchten wir die Reife und die Effizienz der Ca(2+)-induzierten Ca(2+) Version in m und hESC-CMs, das Vorhandensein von quer (t) Tubuli und deren Auswirkungen auf die regionale Ca(2+) Dynamik. In m und hESC-CMs wurden fluoreszierende F&auml;rbung und Rasterkraftmikroskopie (AFM) zum Nachweis von t-Tubuli, Caveolin-3, Amphiphysin-2 und Kolokalisation Dihydropyridin-Rezeptoren (DHPRs) und Ryanodin-Rezeptoren (RyRs). Um Mehrdeutigkeiten zu vermeiden, wurden regionale elektrisch stimuliert Ca(2+) Dynamik der einzelnen ESC-CMs, anstatt spontan schlagen-Clustern mit confocal Mikroskopie vermessen. m und hESC-CMs zeigte mangelnde Dyaden, mit t-Tubuli weder Kolokalisation von DHPRs und RyRs. Caveolin-3 und Amphiphysin-2, entscheidend f&uuml;r die Biogenese von t-Tubuli mit robusten Ausdruck im Erwachsenen CMs, wurden auch abwesend. Einzelne m und hESC-CMs ungleichm&auml;&szlig;ige Ca(2+) Dynamik &uuml;ber Zelle, die typisch f&uuml;r CMs-Mangel der t-Tubuli angezeigt. Lokale Ca(2+)-Transienten ausgestellt mehr Spitzenamplitude bei dem Peripherieger&auml;t als in der Region f&uuml;r m (3.50 +/-0,42 vs. 3.05 +/-0.38) und hESC-CMs (2.96 +/-0,25 vs. 2,72 +/-0.25). Kinetisch, waren beide die Preise des Aufstiegs zu Spitzenamplitude und Transienten Verfall schneller f&uuml;r das Peripherieger&auml;t im Verh&auml;ltnis zu der Region. Anzeigen von unreifen m und hESC-CMs nicht synchronisierte Ca(2+) Transienten aufgrund des Fehlens von t-Tubuli und Gen Produkte f&uuml;r ihre Biogenese von entscheidender Bedeutung. Unsere Ergebnisse Einblicke f&uuml;r die Reifung der ESC-CMs zu fahren.

Fehlen der transversalen Tubuli tr&auml;gt zu ungleichm&auml;&szlig;iger Ca(2+) Wellenfronten in Maus und menschlichen embryonalen Stammzellen Cell-derived Cardiomyocytes.

Mouse (m) e umana embrionale cellule staminali derivate cardiomyocytes (hESC-CMs) sono noti per esibire immaturi Ca(2+) dinamiche come piccole cellule intere picco di ampiezza e cinetica pi&ugrave; lenta rispetto a quelli dell&#39;adulto. In questo studio, abbiamo esaminato la maturit&agrave; e l&#39;efficienza del rilascio indotto da Ca(2+) Ca(2+) in m e hESC-CMs, la presenza di tubuli trasversali (t) e suoi effetti sulla dinamica regionale Ca(2+). In m e hESC-CMs, colorazione fluorescente e microscopia a forza atomica (AFM) sono stati utilizzati per rilevare la presenza di tubuli t, caveolina-3, amphiphysin-2 e presenza di recettori diidropiridinico (DHPRs) e recettori rianodinico (RyRs). Per evitare ambiguit&agrave;, stimolato elettricamente regionale Ca(2+) dinamica del singolo ESC-CMs, piuttosto che spontaneamente battendo i cluster, sono stati misurati utilizzando la microscopia confocale. m. e hESC-CMs ha mostrato assenza della diade, con tubuli t n&eacute; la presenza di DHPRs e RyRs. Caveolina-3 e amphiphysin-2, fondamentale per la biogenesi dei t-tubuli con robusto expression in adult CMs, erano anche assente. Singolo m e hESC-CMs visualizzati dynamics Ca(2+) non uniforme in tutta la cella che &egrave; tipica di CMs carenti dei tubuli t. Locale Ca(2+) transitori esposto una maggiore ampiezza di picco presso il periferico rispetto alla regione centrale per m (3,50 + 0,42 vs 3,05 + 0,38) e hESC-CMs (2,96 + /-0,25 vs 2,72 + /-0,25). Cineticamente, entrambe le tariffe dell&#39;ascesa al picco di ampiezza e transitorio decadimento erano pi&ugrave; veloci per il periferico rispetto alla regione centrale. M immaturi e hESC-CMs display sincronizzati Ca(2+) transitori a causa dell&#39;assenza di tubuli t e gene prodotti cruciale per loro biogenesi. I nostri risultati forniscono informazioni per guidare la maturazione delle ESC-CMs.

Assenza di tubuli trasversali contribuisce al non uniforme Ca(2+) fronti d&#39;onda in mouse e umani embrionali cardiomiociti derivati da cellule staminali.

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; (m) &#x3068;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x5FC3;&#x7B4B; (hESC-CMs) &#x306F;&#x3001;&#x672A;&#x719F;&#x306A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x614B;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5168;&#x4F53;&#x30BB;&#x30EB; &#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x632F;&#x5E45;&#x3068;&#x57FA;&#x6E96;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x9045;&#x3044;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x306A;&#x3069;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x719F;&#x5EA6;&#x3068; m &amp;amp; hESC CMs&#x3001;&#x6A2A;&#x884C; &#xFF08;t&#xFF09; &#x7D30;&#x7BA1;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x614B;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF; Ca(2+) &#x8A98;&#x8D77;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;M &#x304A;&#x3088;&#x3073; hESC CMs &#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x6C5A;&#x640D;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; &#xFF08;AFM&#xFF09; &#x306E; t-&#x7D30;&#x7BA1;&#x30AB;&#x30D9;&#x30AA;&#x30EA;&#x30F3; 3&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30B7;&#x30F3; 2&#x3001;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (DHPRs) &#x3068;&#x30EA;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B8;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;&#x30EA;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B8;&#x30F3;) &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3042;&#x3044;&#x307E;&#x3044;&#x3055;&#x3092;&#x56DE;&#x907F;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306F; 1 &#x3064;&#x306E; ESC CMs &#x306A;&#x304F;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306B;&#x66B4;&#x884C;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;m &#x3068; hESC CMs t-&#x7D30;&#x7BA1;&#x3082; DHPRs &#x3068;&#x30EA;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B8;&#x30F3;&#x306E;&#x6BCD;&#x5B50;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30D9;&#x30AA;&#x30EA;&#x30F3; 3 &#x3068;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30B7;&#x30F3; 2 &#x306E; t-&#x7D30;&#x7BA1;&#x30A2;&#x30C0;&#x30EB;&#x30C8; CMs &#x3067;&#x5805;&#x7262;&#x306A;&#x5F0F;&#x306E;&#x5668;&#x5B98;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3082;&#x4E0D;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x306E; m &#x304A;&#x3088;&#x3073; hESC CMs &#x975E;&#x4E00;&#x69D8;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x52D5;&#x614B;&#x306E; CMs &#x6B20;&#x4E4F; t-&#x7D30;&#x7BA1;&#x306E;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x3067;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x632F;&#x5E45;&#x3088;&#x308A;&#x672B;&#x68A2; m (3.50 &plusmn; 0.38 &plusmn; 3.05 &#x5BFE; 0.42) &#x3068; hESC-CMs (&plusmn; 0.25 &plusmn; 0.25 2.72 &#x5BFE; 2.96&#xFF09; &#x4E2D;&#x592E;&#x5730;&#x57DF;&#x3067;&#x5C55;&#x793A;&#x3002;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x3001;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x632F;&#x5E45;&#x3068;&#x904E;&#x6E21;&#x5D29;&#x58CA;&#x3078;&#x306E;&#x4E0A;&#x6607;&#x7387;&#x306F;&#x76F8;&#x5BFE;&#x4E2D;&#x592E;&#x5730;&#x57DF;&#x5468;&#x8FBA;&#x306E;&#x9AD8;&#x901F;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x672A;&#x719F;&#x306A; m &#x3068; hESC CMs t-&#x7D30;&#x7BA1;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x975E;&#x540C;&#x671F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x5668;&#x5B98;&#x3092;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;ESC CMs &#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6A2A;&#x7D30;&#x7BA1;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x30D2;&#x30C8;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x975E;&#x4E00;&#x69D8;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6CE2;&#x9762;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; (m)&#xC640; &#xC778;&#xAC04; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xB798; cardiomyocytes (hESC-CMs) &#xC791;&#xC740; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xD53C;&#xD06C; &#xC9C4;&#xD3ED; &#xBC0F; &#xADF8; &#xC131;&#xC778;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB290;&#xB9B0; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xB4F1; &#xBBF8; &#xC219; Ca(2+) &#xC5ED;&#xD559; &#xC804;&#xC2DC; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC131;&#xC219; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C0;&#xC5ED; Ca(2+) &#xC5ED;&#xD559;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;, &#xAC00;&#xB85C; (t) tubules&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; hESC CMs, m Ca(2+) Ca(2+) &#xC720;&#xB3C4; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728; &#xAC80;&#xC0AC;. M hESC Cms&#xC5D0; &#xD615;&#xAD11; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC774; &#xC9C0; &#xACE0; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (AFM) t tubules, caveolin 3, amphiphysin 2, colocalization &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; dihydropyridine (DHPRs)&#xC640; ryanodine &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (RyRs)&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xD638;&#xC131;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xB2E8;&#xC77C; ESC CMs &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC15;&#xB3D9; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC804;&#xAE30; &#xC790;&#xADF9; Ca(2+) &#xC5ED;&#xD559; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. m&#xC640; hESC CMs &#xC810;&#xC218; t tubules&#xB3C4; Dhprs&#xC640; Ryrs&#xC758; colocalization&#xC640;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. Caveolin 3, amphiphysin-2, t-tubules &#xC131;&#xC778; Cms&#xC5D0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC18D; &#xD588;&#xB2E4; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB610;&#xD55C; &#xACB0; &#xC11D;. &#xB2E8;&#xC77C; m hESC CMs t tubules&#xC758; CMs &#xACB0;&#xD54D;&#xC758; &#xC804;&#xD615;&#xC801;&#xC778; &#xC140;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xBE44; &#xADE0;&#xC77C; Ca(2+) &#xC5ED;&#xD559;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xB85C;&#xCEEC; Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; m (3.05 &plusmn; 0.38 &#xB300; 0.42 &plusmn; 3.50)&#xACFC; hESC-CMs (2.96 &plusmn; 0.25 0.25 + 2.72 &#xB300;) &#xC911;&#xBD80; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC8FC;&#xBCC0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD070; &#xD53C;&#xD06C; &#xC9C4;&#xD3ED; &#xC804;&#xC2DC;. &#xD65C;&#xB3D9;&#xC801;, &#xD53C;&#xD06C; &#xC9C4;&#xD3ED; &#xBC0F; &#xBCC0;&#xC774; &#xBD80;&#xD328; &#xC99D;&#xAC00; &#xBE44;&#xC728;&#xC740; &#xC911;&#xC559; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC7A5;&#xCE58;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBE60;&#xB978; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBBF8; &#xC219; m&#xC640; hESC CMs &#xD45C;&#xC2DC; t tubules &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC18D;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC81C;&#xD488;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; ESC Cms&#xC758; &#xC131;&#xC219; &#xC6B4;&#xC804;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;.

&#xAC00;&#xB85C; tubules&#xC758; &#xC720;&#xB2C8;&#xD3FC;&#xC774; &#xC544;&#xB2CC; Ca(2+) wavefronts &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xB798; cardiomyocytes&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD55C;&#xB2E4;.

Rat&oacute;n (m) y humanos cardiomiocitos derivadas de c&eacute;lulas madre embrionarios (hESCs-CMs) son conocidos para exponer la din&aacute;mica de CA inmaduro como amplitud de pico peque&ntilde;o de c&eacute;lulas completas y cin&eacute;tica m&aacute;s lenta en comparaci&oacute;n con los del adulto. En este estudio, examinamos la madurez y eficacia de la liberaci&oacute;n de CA Ca(2+)-inducida en m y hESCs-CMs, la presencia de t&uacute;bulos transversales (t) y sus efectos en la din&aacute;mica regional de CA. En m y hESCs-CMs, tinci&oacute;n fluorescente y microscop&iacute;a de fuerza at&oacute;mica (AFM) fueron utilizados para detectar la presencia de caveolina-3, amphiphysin-2, t-t&uacute;bulos y colocalizaci&oacute;n de receptores de dihidropiridina (DHPRs) y los receptores de Ryanodina (RyRs). Para evitar ambig&uuml;edades, regional din&aacute;mica de CA estimulado el&eacute;ctricamente de solos ESC-CMs m&aacute;s espont&aacute;neamente grupos de paliza, fueron medido usando microscopia confocal. m y hESCs-CMs demostraron ausencia de d&iacute;adas, con t-t&uacute;bulos ni colocalizaci&oacute;n de DHPRs y RyRs. Caveolina-3 y amphiphysin-2, crucial para la biog&eacute;nesis de t-t&uacute;bulos con expresi&oacute;n robusta en CMs adultos, fueron tambi&eacute;n ausente. Solo m y hESCs-CMs muestran din&aacute;mica de CA no uniforme en toda la c&eacute;lula t&iacute;pica de CMs deficientes de t-t&uacute;bulos. Transitorios de CA locales exhibieron una mayor amplitud de pico en el perif&eacute;rico que en la regi&oacute;n central de m (3.50 + /-0.42 vs 3.05 +/-0.38) y hESCs-CMs (2.96 +/-0.25 vs 2,72 +-0.25). Cin&eacute;ticamente, tanto las tasas de ascenso a la m&aacute;xima amplitud y decadencia transitoria fueron m&aacute;s r&aacute;pidas para el perif&eacute;rico en relaci&oacute;n con la regi&oacute;n central. M inmadura y c&eacute;lulas-CMs Mostrar sincronizados CA transitorios debido a la ausencia de t-t&uacute;bulos y gene productos cruciales para su biog&eacute;nesis. Nuestros resultados proporcionan ideas para conducir la maduraci&oacute;n de la ESC-CMs.

Ausencia de t&uacute;bulos transversales contribuye a frentes de onda de CA no uniforme en cardiomiocitos de derivados de c&eacute;lulas madre embrionarios humanos y de rat&oacute;n.

&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F20;&#x64AD;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x662F;&#x5927;&#x5927;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4E86;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x8FDE;&#x79F0;&#x4E3A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7A81;&#x89E6;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5E95;&#x5C42;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x4E00;&#x76F4;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x4E0E;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x514B;&#x9686;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8DDF;&#x8E2A; Gag &#x6D3B;&#x7684; CD4 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x8FD0;&#x52A8;&#x548C;&#x6355;&#x83B7;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8DE8;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#x76F4;&#x63A5;&#x6613;&#x4F4D;&#x3002;&#x5B9A;&#x91CF;&#x3001; &#x9AD8;&#x901F;&#x4E09;&#x7EF4; (3D) &#x89C6;&#x9891;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x663E;&#x793A;&#x5FAE;&#x7C73;&#x5927;&#x5C0F;&quot;&#x6309;&#x94AE;&quot;&#x542B; oligomerized &#x75C5;&#x6BD2; hiv-1 &#x6838;&#x5FC3;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6309;&#x94AE;&#x6324;&#x6EE1;&#x4E86;&#x840C;&#x82BD;&#x75C5;&#x6BD2; crescents&#x3002;&#x5F80;&#x7A97;&#x4F53;&#x75C5;&#x6BD2;-&#x62C9;&#x767B;&#x5185;&#x90E8;&#x8F66;&#x53A2;&#x5728;&#x9776;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F20;&#x8F93;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x8FDE;&#x7EED;&#x5B9A;&#x65F6;&#x76D1;&#x6D4B;&#x8868;&#x660E;&#x901A;&#x8FC7;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F18;&#x60E0;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x901A;&#x8FC7;&#x8026;&#x5408;&#x5230;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x541E;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7A81;&#x89E6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x52A0;&#x5F3A;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F20;&#x64AD;&#x3002;

&#x5B9A;&#x91CF; 3D &#x89C6;&#x9891;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x8DE8;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x89E6;&#x3002;

The spread of HIV between immune cells is greatly enhanced by cell-cell adhesions called virological synapses, although the underlying mechanisms have been unclear. With use of an infectious, fluorescent clone of HIV, we tracked the movement of Gag in live CD4 T cells and captured the direct translocation of HIV across the virological synapse. Quantitative, high-speed three-dimensional (3D) video microscopy revealed the rapid formation of micrometer-sized "buttons" containing oligomerized viral Gag protein. Electron microscopy showed that these buttons were packed with budding viral crescents. Viral transfer events were observed to form virus-laden internal compartments within target cells. Continuous time-lapse monitoring showed preferential infection through synapses. Thus, HIV dissemination may be enhanced by virological synapse-mediated cell adhesion coupled to viral endocytosis.

Quantitative 3D video microscopy of HIV transfer across T cell virological synapses.

La propagation du VIH entre les cellules immunitaires est grandement renforc&#xE9;e par cellule-cellule, appel&#xE9;es synapses virologiques adh&#xE9;rences, bien que les m&#xE9;canismes sous-jacents ont &#xE9;t&#xE9; claire. Avec l&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;une maladie infectieuse, le clone fluorescent du VIH, nous avons suivi le mouvement de Gag en direct les cellules T CD4 et s&#x26;#39;empara de la translocation directe du VIH &#xE0; travers la synapse virologique. Quantitative, &#xE0; haute vitesse en trois dimensions la vid&#xE9;o-microscopie (3D) a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; la formation rapide d&#x26;#39;taille microm&#xE9;trique &#x26;quot;boutons&#x26;quot; contenant oligom&#xE9;ris&#xE9; prot&#xE9;ine Gag virale. La microscopie &#xE9;lectronique a montr&#xE9; que ces boutons ont &#xE9;t&#xE9; emball&#xE9;s avec herbe croissants virales. &#xC9;v&#xE9;nements de transfert virales ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;es pour former charg&#xE9;es de virus compartiments internes au sein des cellules cibles. Continue time-lapse de surveillance ont montr&#xE9; une infection pr&#xE9;f&#xE9;rentielle par des synapses. Ainsi, la diffusion du VIH peut &#xEA;tre renforc&#xE9;e par l&#x26;#39;adh&#xE9;sion cellulaire m&#xE9;di&#xE9;e par synapse virologique coupl&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;endocytose virale.

Microscopie quantitative vid&#xE9;o 3D du VIH de transfert &#xE0; travers les synapses virologiques cellules T

Die Ausbreitung von HIV zwischen Immunzellen wird durch Zell-Zell-Adh&auml;sionen genannt virologische Synapsen erheblich verbessert, obwohl die zugrunde liegenden Mechanismen unklar gewesen. Mit Einsatz von einer infekti&ouml;sen, fluoreszierend Klon des HIV wir verfolgt die Bewegung der Gag in lebenden CD4 T-Zellen und erfasst den direkten Translokation von HIV in der virologischen Synapse. Quantitative, High-Speed-dreidimensionale (3D)-video-Mikroskopie deckte die rasche Bildung von Mikrometer Gr&ouml;&szlig;e &quot;Schaltfl&auml;chen&quot; mit oligomerized virale Gag-Protein. Elektronenmikroskopie zeigte, dass diese Tasten mit angehenden virale Halbmonde verpackt wurden. Zum Formular Virus beladene Innenf&auml;cher in Zielzellen wurden virale Transfer Ereignisse beobachtet. Kontinuierliche &Uuml;berwachung der Zeitraffer zeigte bevorzugte Infektionen durch Synapsen. Somit kann HIV-Verbreitung durch virologische Synapse-vermittelte Zelladh&auml;sion gekoppelt mit viralen Endozytose verbessert werden.

Quantitative 3D video-Mikroskopie der HIV-&Uuml;bertragung &uuml;ber T-Zell-virologischen Synapsen.

La diffusione dell&#39;HIV tra cellule del sistema immunitario &egrave; notevolmente migliorata da adesioni cellula-cellula chiamati sinapsi virologiche, sebbene i meccanismi sottostanti sono state poco chiari. Con l&#39;uso di un clone infettivo, fluorescente dell&#39;HIV, abbiamo monitorato il movimento di Gag in vivo delle cellule T CD4 e catturato la traslocazione diretta dell&#39;HIV attraverso la sinapsi virologica. Quantitativa, ad alta velocit&agrave; tridimensionale (3D) video microscopia rivel&ograve; la rapida formazione di dimensioni micrometriche &quot;pulsanti&quot; contenente oligomerized proteina virale di Gag. La microscopia elettronica ha dimostrato che questi pulsanti sono stati confezionati con mezzaluna virale in erba. Gli eventi di trasferimento virale sono stati osservati a scomparti interni carichi di virus forma all&#39;interno delle cellule bersaglio. Time-lapse di monitoraggio continuo hanno mostrato infezione preferenziale attraverso la sinapsi. Cos&igrave;, diffusione dell&#39;HIV pu&ograve; essere rafforzata dall&#39;adesione virologica mediata da sinapsi cellulare accoppiato per endocitosi virale.

Quantitativa 3D video microscopia del trasferimento dell&#39;HIV attraverso cellule T virologica sinapsi.

&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x5E83;&#x304C;&#x308A;&#x304C;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x63A5;&#x7740;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; HIV&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306E;CD4 T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3057;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3092;&#x8D8A;&#x3048;&#x3066;HIV&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x6355;&#x7372;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x3001;&#x9AD8;&#x901F;&#x306A;3&#x6B21;&#x5143;&#xFF08;3D&#xFF09;&#x30D3;&#x30C7;&#x30AA;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5316;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;Gag&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x542B;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E; &#x26;quot;&#x30DC;&#x30BF;&#x30F3;&#x26;quot;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30DC;&#x30BF;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x51FA;&#x82BD;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4E09;&#x65E5;&#x6708;&#x304C;&#x8A70;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x542B;&#x3093;&#x3060;&#x5185;&#x90E8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x9023;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x6642;&#x9593;&#x7D4C;&#x904E;&#x306E;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x304C;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;HIV&#x306E;&#x666E;&#x53CA;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3092;&#x8D8A;&#x3048;&#x3066;HIV&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;3D&#x30D3;&#x30C7;&#x30AA;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;

&#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC04;&#xC758; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;&#xC758; &#xD655;&#xC0B0;&#xC740; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xBD84;&#xBA85; &#xC788;&#xB2E4; &#xC9C0;&#xB9CC; &#xC140; &#xC720;&#xCC29; virological &#xB0C5; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xD558;&#xBA74; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. HIV&#xC758; &#xC804;&#xC5FC; &#xC131;, &#xD615;&#xAD11; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAC1C; &#xADF8; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; CD4 T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC744; &#xCD94;&#xC801; &#xD558; &#xACE0; &#xCEA1;&#xCC98;&#xD55C; virological &#xB0C5;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; HIV&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xC804;. &#xC591;&#xC801;, &#xACE0;&#xC18D; 3 &#xCC28;&#xC6D0; (3D) &#xC601;&#xC0C1; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xBBF8;&#xD130; &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; &quot;&#xBC84;&#xD2BC;&quot; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; oligomerized &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC1C; &#xADF8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC774;&#xC774; &#xB2E8;&#xCD94; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD06C;&#xB808;&#xC13C;&#xD2B8;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD3EC;&#xC7A5; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xB300;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xB0B4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xB77C;&#xB374; &#xB0B4;&#xBD80; &#xAD6C;&#xD68D; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5F0;&#xC18D; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC6B0;&#xC120; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; HIV &#xBCF4;&#xAE09; virological &#xB0C5; &#xC911;&#xC7AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; endocytosis &#xD558; &#xAC8C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

T &#xC140; virological &#xAC78;&#xCCD0; HIV &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xC591;&#xC801; 3D &#xBE44;&#xB514;&#xC624; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; synapses.

La propagaci&#xF3;n del VIH entre las c&#xE9;lulas del sistema inmune es mucho mayor por las adherencias c&#xE9;lula-c&#xE9;lula llamadas sinapsis virol&#xF3;gicas, aunque los mecanismos subyacentes no han sido claros. Con el uso de un clon infeccioso, fluorescente de VIH, seguimiento del movimiento de la mordaza en vivo las c&#xE9;lulas T CD4 y captur&#xF3; la translocaci&#xF3;n directa del VIH a trav&#xE9;s de la sinapsis virol&#xF3;gica. Cuantitativo, de alta velocidad en tres dimensiones (3D) la microscop&#xED;a de v&#xED;deo revela la r&#xE1;pida formaci&#xF3;n de micr&#xF3;metros de tama&#xF1;o &#x26;quot;botones&#x26;quot; que contienen la prote&#xED;na Gag oligomerizarse viral. La microscopia electr&#xF3;nica demostr&#xF3; que estos botones se llena de medias lunas en ciernes virales. Eventos virales de transferencia se observaron para formar virus cargados de compartimentos internos dentro de las c&#xE9;lulas diana. Continua de lapso de tiempo de seguimiento mostraron infecci&#xF3;n preferencial a trav&#xE9;s de las sinapsis. As&#xED;, la difusi&#xF3;n del VIH puede ser mejorada por adhesi&#xF3;n celular sinapsis virol&#xF3;gicas mediada acoplado a endocitosis viral.

Microscop&#xED;a cuantitativa de v&#xED;deo 3D del VIH de transferencia a trav&#xE9;s de sinapsis virol&#xF3;gicas de c&#xE9;lulas T

&#x901A;&#x8FC7;&#x76F4;&#x63A5;&#x63A5;&#x89E6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8702;&#x7A9D;&#x901A;&#x4FE1;&#x548C;&#x534F;&#x8C03;-&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6211; &#xFF08;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;-1&#xFF09; &#x8BF1;&#x5BFC;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; CD4(+) &#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7C7B;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5411; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x8FC7;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7A81;&#x89E6;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7A7F;&#x68AD;&#x3002;&#x76EE;&#x6807;&#x4E86;&#x89E3;&#x901A;&#x8FC7;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7A81;&#x89E6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F93;&#x9001;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x662F;&#x786E;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56FD;&#x5BB6;&#x5141;&#x8BB8;&#x6709;&#x673A;&#x4F1A;&#x9047;&#x5230;&#x6210;&#x4E3A;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;-&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x954A;&#x5B50;&#x6765;&#x64CD;&#x7EB5;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; Gag iGFP &#x9644;&#x8FD1;&#x672A;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x539F; CD4(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x67D3; Jurkat T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6765;&#x63A2;&#x6D4B;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x7A33;&#x5B9A;&#x9ECF;&#x9644;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x4E0D;&#x53EA;&#x662F;&#x4E3A;&#x4E86;&#x65B9;&#x4FBF;&#x8054;&#x7CFB;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x540C;&#x65F6;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7A81;&#x89E6;&#x5F62;&#x6210;&#x65F6;&#x4E0E;&#x5FEB;&#x901F; 4 D &#x5171;&#x7126;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x672F;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5229;&#x7528;&#x5149;&#x5B66;&#x954A;&#x5B50;&#x548C;&#x6700;&#x7EC8;&#x6765;&#x63A2;&#x6D4B;&#x4E4B;&#x524D;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;

&#x64CD;&#x7EB5; CD4 + T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5149;&#x954A;&#x542F;&#x52A8;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1&#x3002;

Cell-cell interactions through direct contact are very important for cellular communication and coordination - especially for immune cells. The human immunodeficiency virus type I (HIV-1) induces immune cell interactions between CD4(+) cells to shuttle between T cells via a virological synapse. A goal to understand the process of cell-cell transmission through virological synapses is to determine the cellular states that allow a chance encounter between cells to become a stable cell-cell adhesion. We demonstrate the use of optical tweezers to manipulate uninfected primary CD4(+) T cells near HIV Gag-iGFP transfected Jurkat T cells to probe the determinants that induce stable adhesion. When combined with fast 4D confocal fluorescence microscopy, optical tweezers can be utilized not only to facilitate cell-cell contact, but also to simultaneously track the formation of a virological synapse, and ultimately to probe the events that precede virus transfer.

Manipulating CD4+ T cells by optical tweezers for the initiation of cell-cell transfer of HIV-1.

Interactions cellule-cellule par contact direct sont tr&#xE8;s importants pour la communication cellulaire et de la coordination - en particulier pour les cellules immunitaires. Le virus de l&#x26;#39;immunod&#xE9;ficience humaine de type I (VIH-1) induit des interactions entre les cellules immunitaires CD4 (+) pour la navette entre les lymphocytes T via une synapse virologique. Un but de comprendre le processus de la cellule des cellules de transmission par des synapses virologiques est de d&#xE9;terminer les &#xE9;tats cellulaires qui permettent une rencontre fortuite entre les cellules de devenir une &#xE9;curie adh&#xE9;sion cellule-cellule. Nous d&#xE9;montrons l&#x26;#39;utilisation des pinces optiques &#xE0; manipuler non infect&#xE9;s CD4 primaires (+) des cellules T pr&#xE8;s du VIH Gag-iGFP cellules transfect&#xE9;es T Jurkat pour sonder les d&#xE9;terminants qui induisent une adh&#xE9;sion stable. Lorsqu&#x26;#39;il est combin&#xE9; avec la microscopie de fluorescence 4D rapide confocale, pinces optiques peuvent &#xEA;tre utilis&#xE9;s non seulement pour faciliter contact cellule-cellule, mais aussi de suivre simultan&#xE9;ment la formation d&#x26;#39;une synapse virologique, et, finalement, pour sonder les &#xE9;v&#xE9;nements qui pr&#xE9;c&#xE8;dent le transfert du virus.

Manipulation cellules T CD4 + par pinces optiques pour l&#x26;#39;Initiation de cellule-cellule de transfert du VIH-1

Zell-Zell-Interaktionen durch den direkten Kontakt sind sehr wichtig f&uuml;r zellulare Kommunikation und Koordination - vor allem f&uuml;r Immunzellen. Der humanen Immundefizienz-Virustyp I HIV-1 induziert Immunzellen Interaktionen zwischen CD4(+) Zellen an Shuttle zwischen T-Zellen &uuml;ber eine virologische Synapse. Ein Ziel zu verstehen, dass der Prozess der Zell-Zell-&Uuml;bertragung durch virologischen Synapsen ist f&uuml;r die Bestimmung die zellul&auml;ren Staaten, die eine Chance erm&ouml;glichen Begegnung zwischen Zellen, eine stabile Zell-Zell-Adh&auml;sion zu werden. Wir zeigen, dass die Verwendung von optischen Pinzette, nicht infizierte prim&auml;re CD4(+) T-Zellen in der N&auml;he von HIV Gag-iGFP zu manipulieren die transfected Jurkat T-Zellen um die Determinanten zu sondieren, die stabile Haftung ausl&ouml;sen. In Kombination mit schnellen 4D konfokale Fluoreszenzmikroskopie kann eine optische Pinzette verwendet werden, nicht nur f&uuml;r Zell-Zell-Kontakt zu erleichtern, sondern auch gleichzeitig die Bildung einer virologischen Synapse, verfolgen und letztlich um die Ereignisse zu untersuchen, die Virus-&Uuml;bertragung vorausgehen.

Bearbeiten von CD4 + T &uuml;bertragen Zellen durch Optische Pinzette f&uuml;r die Einleitung von Zell-Zell HIV-1.

Interazioni cellula-cellula attraverso il contatto diretto sono molto importanti per la comunicazione cellulare e coordinamento - soprattutto per le cellule del sistema immunitario. Il virus dell&#39;immunodeficienza umana tipo I (HIV-1) induce le interazioni cellula immunitaria tra CD4(+) cellule a navetta tra cellule T attraverso una sinapsi virologiche. Un obiettivo per capire il processo di trasmissione della cellula-cellula attraverso sinapsi virologiche &egrave; quello di determinare gli Stati cellulari che permettono una possibilit&agrave; incontro tra cellule a diventare un&#39;adesione cellula-cellula stabili. Dimostriamo che l&#39;uso di una pinzetta ottica per manipolare le cellule T CD4(+) primarie non infette vicino HIV Gag-iGFP transfected le cellule Jurkat T per sondare i determinanti che inducono adesione stabile. Quando combinato con microscopia di fluorescenza confocale veloce 4 D, pinzette ottiche possono essere utilizzate non solo per facilitare il contatto cellula-cellula, ma anche di monitorare contemporaneamente la formazione di una sinapsi virologiche e in definitiva per sondare gli eventi che precedono il trasferimento di virus.

Manipolare T CD4 + le cellule di una pinzetta ottica per l&#39;avvio della cellula-cellula trasferimento di HIV-1.

&#x76F4;&#x63A5;&#x63A5;&#x89E6;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30CB;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x8ABF;&#x6574;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B; - &#x7279;&#x306B;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;I&#x578B;&#xFF08;HIV-1&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;T&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB;&#x30D0;&#x30B9;&#x306B;CD4&#xFF08;+&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x5076;&#x7136;&#x306E;&#x51FA;&#x4F1A;&#x3044;&#x304C;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x63A5;&#x7740;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5149;&#x30D4;&#x30F3;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x63A5;&#x7740;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x63A2;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;HIV GAG-iGFP&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;Jurkat T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x4E3B;&#x306A;CD4&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x901F;&#x3044;4D&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x5149;&#x30D4;&#x30F3;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x63A5;&#x89E6;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x540C;&#x200B;&#x200B;&#x6642;&#x306B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CD4&#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;+ HIV-1&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x8EE2;&#x9001;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5149;&#x30D4;&#x30F3;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;

&#xC140;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xC811;&#xCD09;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xD1B5;&#xC2E0; &#xBC0F; &#xC870;&#xC815;-&#xD2B9;&#xD788; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC720;&#xD615; I (HIV-1) CD4(+) &#xAC04;&#xC758; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4; &#xC138;&#xD3EC; virological &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774; &#xC154;&#xD2C0;&#xC744;. Virological &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC140; &#xC804;&#xC1A1; &#xACFC;&#xC815; &#xAE30;&#xD68C;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xBAA9;&#xD45C; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC140; &#xC811;&#xCC29; &#xB418;&#xB294; &#xC140; &#xC0AC;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xAC1C; &#xADF8;-iGFP &#xADFC;&#xCC98; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xAE30;&#xBCF8; CD4(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC870;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xAD11;&#xD559; &#xD540;&#xC14B;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD398; Jurkat T &#xC138;&#xD3EC; &#xC548;&#xC815; &#xB41C; &#xC811;&#xCC29; &#xB825;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Virological &#xB0C5;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xCD94;&#xC801; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC140; &#xC811;&#xCD09;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xAD11;&#xD559; &#xD540;&#xC14B;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBE60;&#xB978; 4d confocal &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xD568;&#xAED8; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xBA74; &#xAD81;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC55E;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;.

&#xC140;&#xC758; &#xAC1C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD11;&#xD559; &#xD540;&#xC14B;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xC870;&#xC791; CD4 + T V-1&#xC758; &#xC804;&#xC1A1;.

Interacciones c&#xE9;lula-c&#xE9;lula a trav&#xE9;s de contacto directo son muy importantes para la comunicaci&#xF3;n celular y la coordinaci&#xF3;n - especialmente para las c&#xE9;lulas del sistema inmune. El virus de inmunodeficiencia humana tipo I (VIH-1) induce interacciones celulares inmunes entre las c&#xE9;lulas CD4 (+) a lanzadera entre las c&#xE9;lulas T a trav&#xE9;s de una sinapsis virol&#xF3;gica. Un objetivo de comprender el proceso de c&#xE9;lula-c&#xE9;lula de transmisi&#xF3;n a trav&#xE9;s de las sinapsis virol&#xF3;gicas es determinar los estados celulares que permiten un encuentro casual entre las c&#xE9;lulas para convertirse en un estable adhesi&#xF3;n c&#xE9;lula-c&#xE9;lula. Se demuestra el uso de pinzas &#xF3;pticas para manipular c&#xE9;lulas CD4 infectadas primarias (+) cerca de las c&#xE9;lulas T contra el VIH iGFP Gag transfectadas las c&#xE9;lulas Jurkat T para investigar los factores determinantes que inducen la adhesi&#xF3;n estable. Cuando se combina con microscop&#xED;a de fluorescencia confocal r&#xE1;pido 4D, pinzas &#xF3;pticas se pueden utilizar no s&#xF3;lo para facilitar contacto c&#xE9;lula-c&#xE9;lula, sino tambi&#xE9;n para rastrear simult&#xE1;neamente la formaci&#xF3;n de una sinapsis virol&#xF3;gica, y en &#xFA;ltima instancia para sondar los eventos que preceden a la transferencia de virus.

La manipulaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T CD4 + por Pinzas &#xD3;pticas para el inicio de la transferencia de c&#xE9;lulas de c&#xE9;lulas del VIH-1

&#x5371;&#x7684;&#x6BDB;&#x5B54;&#x4E2D;&#x809D;&#x7AA6;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7B5B;&#x9009;&#x886C;&#x5E95;&#x548C;&#x8840;&#x4E0E;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x788E;&#x7247;&#x3002;&#x5371;&#x5DF2;&#x8001;&#x5316;&#x548C;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x8C03;&#x63A7;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#x89C4;&#x6A21;&#x8F83;&#x5C0F; &#xFF08;&lt; 200 nm&#xFF09; &#x5DF2;&#x901A;&#x8FC7;&#x5149;&#x955C;&#x7981;&#x6B62;&#x4EFB;&#x4F55;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x7528;&#x7ED3;&#x6784;&#x5316;&#x7684;&#x7167;&#x660E;&#x5149;&#x955C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5371;&#x5728;&#x79BB;&#x4F53;&#x5927;&#x9F20;&#x809D;&#x7AA6;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x975E;&#x5E38;&#x660E;&#x786E;&#x548C;&#x7A7A;&#x95F4;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5371;&#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784; (&#x76F4;&#x5F84; 123 + /-24 nm&#xFF09; &#x7B5B;&#x677F;&#x9610;&#x660E;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x5371;&#x53D1;&#x751F;&#x7A81;&#x7136;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7A00;&#x758F;&#x7684;&#x5730;&#x533A; &#xFF08;+ /-54 165 &#x4E0E; 292 + /-103 nm nm P &#x975E;&#x5F00;&#x5730;&#x533A; &lt; 0.0001)&#x3002;&#x7B5B;&#x677F;&#x4E0D;&#x662F;&#x4F18;&#x5148;&#x4E0E;&#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x548C;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x5408;&#x9176; co-localized&#xFF0C;&#x4F46;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x51CF;&#x6BD2;&#x975E;&#x7B4F;&#x5730;&#x533A;&#x51FA;&#x73B0;&#x3002;&#x672A;&#x770B;&#x5230;&#x8FF7;&#x5BAB;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x6240;&#x6709;&#x5371;&#x77ED;&#x5706;&#x67F1;&#x5B54;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784;&#x5316;&#x7684;&#x7167;&#x660E;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5DF2;&#x542F;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x8272;&#x548C;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x65E0;&#x9650;&#x7684;&#x7684;&#x6743;&#x529B;&#x63ED;&#x793A;&#x6709;&#x5173;&#x5371;&#x548C;&#x7B5B;&#x677F;&#x65B0;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;

&#x4E09;&#x7EF4;&#x7ED3;&#x6784;&#x7167;&#x660E;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x809D;&#x7AA6;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5371;&#x3002;

Fenestrations are pores in liver sinusoidal endothelial cells that filter substrates and debris between the blood and hepatocytes. Fenestrations have significant roles in aging and the regulation of lipoproteins. However their small size (<200 nm) has prohibited any functional analysis by light microscopy. We employed structured illumination light microscopy to observe fenestrations in isolated rat liver sinusoidal endothelial cells with great clarity and spatial resolution. With this method, the three-dimensional structure of fenestrations (diameter 123+/-24 nm) and sieve plates was elucidated and it was shown that fenestrations occur in areas of abrupt cytoplasmic thinning (165+/-54 nm vs. 292+/-103 nm in non-fenestrated regions, P<0.0001). Sieve plates were not preferentially co-localized with fluorescently labeled F-actin stress fibers and endothelial nitric oxide synthase but appeared to occur in primarily attenuated non-raft regions of the cell membrane. Labyrinthine structures were not seen and all fenestrations were short cylindrical pores. In conclusion, three-dimensional structured illumination microscopy has enabled the unlimited power of fluorescent immunostaining and co-localization to reveal new structural and functional information about fenestrations and sieve plates.

Three-dimensional structured illumination microscopy of liver sinusoidal endothelial cell fenestrations.

Fenestrations sont des pores dans les cellules endoth&#xE9;liales sinuso&#xEF;dales du foie que les supports de filtres et de d&#xE9;bris entre le sang et les h&#xE9;patocytes. Fenestrations ont des r&#xF4;les importants dans le vieillissement et la r&#xE9;glementation des lipoprot&#xE9;ines. Cependant, leur petite taille (&#x26;lt;200 nm) a interdit toute analyse fonctionnelle par microscopie optique. Nous avons utilis&#xE9; la microscopie optique d&#x26;#39;illumination structur&#xE9;e pour observer fenestrations dans isol&#xE9;es de foie de rat les cellules endoth&#xE9;liales sinuso&#xEF;dales avec une grande clart&#xE9; et une r&#xE9;solution spatiale. Avec cette m&#xE9;thode, la structure tridimensionnelle de fenestrations (diam&#xE8;tre 123 + / -24 nm) et des plaques de tamis a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;lucid&#xE9; et il a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; que fenestrations se produire dans les zones de brusque &#xE9;claircie cytoplasmique (165 + / -54 nm vs 292 + / -103 nm non-fen&#xEA;tr&#xE9;es r&#xE9;gions, P &#x26;lt;0,0001). Plateaux perfor&#xE9;s ne sont pas de pr&#xE9;f&#xE9;rence co-localis&#xE9;e avec marqu&#xE9;es par fluorescence des fibres de stress d&#x26;#39;actine et F-synthase endoth&#xE9;liale de l&#x26;#39;oxyde nitrique, mais semblait se produire principalement dans des att&#xE9;nu&#xE9;s non-raft r&#xE9;gions de la membrane cellulaire. Labyrinthiques structures n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; vu et toutes les fenestrations &#xE9;taient courtes pores cylindriques. En conclusion, en trois dimensions microscopie illumination structur&#xE9;e a permis &#xE0; la puissance illimit&#xE9;e de immunomarquage fluorescent et la co-localisation de r&#xE9;v&#xE9;ler de nouvelles informations structurales et fonctionnelles sur les fenestrations et des plaques de tamis.

Tridimensionnelle Microscopie illumination structur&#xE9;e de sinuso&#xEF;dales h&#xE9;patiques fenestrations cellules endoth&#xE9;liales

Fenestrations sind Poren in Leber sinusf&ouml;rmige Endothelzellen, die Substrate und Tr&uuml;mmer zwischen Blut und Hepatozyten zu filtern. Fenestrations haben bedeutende Rollen in Altern und die Regulierung der Lipoproteine. Doch ihre geringe Gr&ouml;&szlig;e (&lt; 200 nm) hat jede funktionale Analyse durch Lichtmikroskopie verboten. Wir besch&auml;ftigten strukturierte Beleuchtung Lichtmikroskopie Fenestrations in isolierten Ratte Leber sinusf&ouml;rmige Endothelzellen mit gro&szlig;er Klarheit und r&auml;umliche Aufl&ouml;sung beobachten. Mit dieser Methode, die dreidimensionale Struktur des Fenestrations (Durchmesser 123 +/-24 nm) und Sieb Platten wurde aufgekl&auml;rt und es wurde gezeigt, dass Fenestrations in Bereichen des abrupten zytoplasmatischen Ausd&uuml;nnung auftreten (165 +/-54 nm vs. 292 +/-103 nm in nicht-gefenstertes Regionen, P &lt; 0,0001). Sieb-Platten wurden nicht bevorzugt co-localized mit Leuchtstoff beschriftetem F-Actin-Spannung-Fasern und endotheliale Stickstoffmonoxid-Synthase aber schien in haupts&auml;chlich abgeschw&auml;chte nicht-Raft-Regionen der Zellmembran auftreten. Labyrinthische Strukturen wurden nicht gesehen, und alle Fenestrations wurden kurze zylindrische Poren. Abschlie&szlig;end konnten dreidimensional strukturierte Beleuchtung, Mikroskopie unbegrenzte Kraft der fluoreszierenden Paraffinschnitten und Doppelhybridisierung, neue strukturelle und funktionelle Informationen &uuml;ber Fenestrations und Sieb Platten zu offenbaren.

Dreidimensional strukturierte Beleuchtung Mikroskopie der Leber sinusf&ouml;rmige endothelial Zellen Fenestrations.

Finestrature sono pori nel fegato cellule endoteliali sinusoidali che filtrano i substrati e detriti tra il sangue e gli epatociti. Finestrature hanno ruoli significativi nell&#39;invecchiamento e il regolamento delle lipoproteine. Tuttavia loro piccole dimensioni (&lt; 200 nm) ha proibito qualsiasi analisi funzionale di microscopia chiara. Abbiamo impiegato la microscopia in luce illuminazione strutturata per osservare finestrature nel ratto isolato le cellule endoteliali sinusoidali epatiche con grande chiarezza e risoluzione spaziale. Con questo metodo, la struttura tridimensionale delle finestrature (diametro 123 + 24 nm) e piastre setaccio &egrave; stata chiarita e si era dimostrato che finestrature si verificano nelle zone di assottigliamento brusco citoplasmatici (165 + 54 nm vs 292 + 103 nm in regioni non fenestrate, P &lt; 0.0001). Setaccio piastre non erano preferenzialmente co-localized con fibre di stress di F-actina fluorescente contrassegnati ed endoteliali di ossido nitrico sintasi, ma sembrava verificarsi nelle regioni non-zattera principalmente attenuati della membrana cellulare. Strutture labirintiche non erano visti e tutte le finestrature sono stati brevi pori cilindrici. In conclusione, microscopia tridimensionale strutturato illuminazione ha permesso il potere illimitato di immunostaining fluorescenti e collocazione rivelare nuove informazioni strutturali e funzionali su finestrature e piastre di setaccio.

Microscopia tridimensionale illuminazione strutturata delle finestrature delle cellule endoteliali sinusoidali del fegato.

&#x30D4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x6DB2;&#x3068;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30BF;&#x57FA;&#x677F;&#x3068;&#x7834;&#x7247;&#x3001;&#x809D;&#x985E;&#x6D1E;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x9F62;&#x5316;&#x3084;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#xFF08;&#x26;lt;200 nm&#xFF09;&#x306F;&#x5149;&#x5B66;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x7981;&#x6B62;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5049;&#x5927;&#x306A;&#x660E;&#x5FEB;&#x3055;&#x3068;&#x7A7A;&#x9593;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3067;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x809D;&#x985E;&#x6D1E;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30D4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3059;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7167;&#x660E;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF08;&#x76F4;&#x5F84;123 + / -24 nm&#xFF09;&#x3068;&#x7BE9;&#x677F;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x30D4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;165 + / -54&#x30CA;&#x30CE;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#x5BFE;292 + /&#x9593;&#x4F10;&#x7A81;&#x7136;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x975E;&#x6709;&#x7A93;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;-103 nm&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;P &#x26;lt;0.0001&#xFF09;&#x3002;&#x3075;&#x308B;&#x3044;&#x677F;&#x306F;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;F-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC;&#x3068;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x578B;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x4E3B;&#x306B;&#x6E1B;&#x8870;&#x3057;&#x3001;&#x975E;&#x30E9;&#x30D5;&#x30C8;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x305F;&#x3002;&#x8FF7;&#x8DEF;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30D4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x77ED;&#x3044;&#x5186;&#x7B52;&#x72B6;&#x306E;&#x5B54;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x5316;&#x7167;&#x660E;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;&#x958B;&#x7A93;&#x3068;&#x3075;&#x308B;&#x3044;&#x677F;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x514D;&#x75AB;&#x67D3;&#x8272;&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x7121;&#x9650;&#x306E;&#x529B;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x809D;&#x985E;&#x6D1E;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x69CB;&#x9020;&#x5316;&#x7167;&#x660E;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;

Fenestrations&#xB294; &#xD544;&#xD130; &#xAE30;&#xD310; &#xBC0F; &#xD608;&#xC561; &#xC0AC;&#xC774; hepatocytes &#xD30C;&#xD3B8; &#xAC04; &#xC815;&#xD604;&#xD30C; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBAA8; &#xACF5;. Fenestrations &#xC5D0;&#xC774;&#xC9D5; &#xBC0F; &#xC9C0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xD06C;&#xAE30; (&lt; 200 nm) &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xAE08;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC88B;&#xC740; &#xC120;&#xBA85;&#xB3C4;&#xC640; &#xACF5;&#xAC04; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xAC04; &#xC815;&#xD604;&#xD30C; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xC950;&#xC5D0; fenestrations&#xB97C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xB41C; &#xC870;&#xBA85; &#xBE5B; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xACE0;&#xC6A9;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; fenestrations&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870; (24 + &#xC9C1;&#xACBD; 123 nm) &#xCCB4; &#xC811;&#xC2DC;&#xB294; &#xD574;&#xBA85; &#xBC0F; fenestrations &#xAC11;&#xC791;&#xC2A4;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC231;&#xC774;&#xC758; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; (54 + 165 103 + 292 &#xB300; nm nm &#xBE44; fenestrated &#xC9C0;&#xC5ED;, P &lt; 0.0001). &#xCCB4; &#xD310; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD99;&#xC77C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xB41C; F &#xB9D0;&#xB77C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC12C;&#xC720; &#xBC0F; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C; synthase co-localized &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC758; &#xC8FC;&#xB85C; &#xAC10;&#xC1E0; &#xB5CF;&#xBAA9;&#xC774; &#xC544;&#xB2CC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC778;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC870; &#xBCFC; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xACE0; &#xBAA8;&#xB4E0; fenestrations &#xD588;&#xB2E4; &#xC9E7;&#xC740; &#xC6D0;&#xD1B5;&#xD615; &#xBAA8; &#xACF5;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xB41C; &#xC870;&#xBA85; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; fenestrations &#xBC0F; &#xCCB4; &#xD310;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC815;&#xBCF4; &#xD615;&#xAD11; immunostaining&#xC640; co-localization&#xC758; &#xBB34;&#xD55C; &#xD55C; &#xD798;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xAC8C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC04; &#xC815;&#xD604;&#xD30C; fenestrations&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xB41C; &#xC870;&#xBA85; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;.

Fenestraciones son poros en las c&#xE9;lulas endoteliales del h&#xED;gado sinusoidales que los sustratos de filtro y los desechos entre la sangre y los hepatocitos. Fenestraciones tienen un papel importante en el envejecimiento y la regulaci&#xF3;n de las lipoprote&#xED;nas. Sin embargo, su peque&#xF1;o tama&#xF1;o (&#x26;lt;200 nm) se ha prohibido cualquier an&#xE1;lisis funcional por microscop&#xED;a de luz. Se emple&#xF3; el microscopio de iluminaci&#xF3;n de luz estructurada para observar fenestraciones en aisladas de h&#xED;gado de rata c&#xE9;lulas endoteliales sinusoidales con gran claridad y resoluci&#xF3;n espacial. Con este m&#xE9;todo, la estructura tridimensional de fenestraciones (di&#xE1;metro 123 + / -24 nm) y las placas de criba fue aclarada y se demostr&#xF3; que fenestraciones se producen en zonas de abrupta citopl&#xE1;smica adelgazamiento (165 + / -54 nm frente a 292 + / -103 nm de no fenestrados regiones, P &#x26;lt;0,0001). Placas-tamiz no eran preferentemente co-localizado con la etiqueta fluorescente fibras de estr&#xE9;s de actina F-sintetasa endotelial, y el &#xF3;xido n&#xED;trico, pero parece que se produzca en primer lugar atenuadas no balsa regiones de la membrana celular. Laber&#xED;nticas estructuras no fueron vistos y todas las fenestraciones eran cortos poros cil&#xED;ndricos. En conclusi&#xF3;n, la microscop&#xED;a tridimensional de iluminaci&#xF3;n estructurada ha permitido que el poder ilimitado de inmunomarcaci&#xF3;n fluorescente y la co-localizaci&#xF3;n para revelar nueva informaci&#xF3;n estructural y funcional de fenestraciones y placas-tamiz.

Tridimensional Microscop&#xED;a iluminaci&#xF3;n estructurada de h&#xED;gado fenestraciones las c&#xE9;lulas endoteliales sinusoidales

&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x6807;&#x8BB0;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x5728;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x671F;&#x95F4;&#x542F;&#x7528;&#x4E86;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x76D1;&#x6D4B;&#x548C;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x4F18;&#x5316; Gag GFP &#x6784;&#x9020;&#x5DF2;&#x7528;&#x4E8E;&#x7814;&#x7A76;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6837;&#x9897;&#x7C92; &#xFF08;VLP&#xFF09; &#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x548C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5F88;&#x5BB9;&#x6613;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E2D;&#x3002;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x53D8;&#x79CD;&#x643A;&#x5E26;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4E86;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E00;&#x76F4;&#x5728;&#x76D1;&#x6D4B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x540E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7A81;&#x89E6;&#x5F62;&#x6210;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x7279;&#x522B;&#x6709;&#x7528;&#x3002;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; Gag iGFP&#xFF0C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x5305;&#x542B;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x63D2;&#x5165;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x77E9;&#x9635; (MA) &#x548C;&#x8863;&#x58F3; (CA) &#x57DF;&#xFF0C;&#x662F;&#x538B;&#x5236;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x590D;&#x5236;&#x4E3B;&#x7BA1;&#x5206;&#x5B50;&#x514B;&#x9686;&#x751F;&#x6210;&#x8367;&#x5149;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x9897;&#x7C92;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5229;&#x7528;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; Gag iGFP &#x6D41;&#x5F0F;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F20;&#x64AD;&#x7684;&#x5728;&#x5927;&#x4F1A;&#x548C;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x4F20;&#x8F93;&#x671F;&#x95F4;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x8DDF;&#x8E2A;&#x548C;&#x5B9A;&#x91CF;&#x8367;&#x5149;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4F20;&#x9001;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

The green fluorescent protein (GFP) is a powerful genetic marking tool that has enabled virologists to monitor and track viral proteins during HIV infection. Expression-optimized Gag-GFP constructs have been used to study virus-like particle (VLP) assembly and localization in cell types that are easily transfected. The development of HIV-1 variants carrying GFP within the context of the viral genome has facilitated the study of infection and has been particularly useful in monitoring the transfer of virus between cells following virological synapse formation. HIV Gag-iGFP, a viral clone that contains GFP inserted between the matrix (MA) and capsid (CA) domains of Gag, is the first replication competent molecular clone that generates fluorescent infectious particles. Here, we discuss some methods that exploit HIV Gag-iGFP to quantify cell-to-cell transmission of virus by flow cytometry and to track the proteins during assembly and transmission using live-cell imaging.

Tracking and quantitation of fluorescent HIV during cell-to-cell transmission.

La prot&#xE9;ine fluorescente verte (GFP) est un puissant outil de marquage g&#xE9;n&#xE9;tique qui a permis virologues pour surveiller et suivre les prot&#xE9;ines virales lors de l&#x26;#39;infection par le VIH. Expression optimis&#xE9;s Gag-GFP ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;es pour &#xE9;tudier les virus-like particle (VLP) de montage et de la localisation dans des types cellulaires qui sont facilement transfect&#xE9;es. Le d&#xE9;veloppement de la lutte contre le VIH-1 des variantes portant GFP dans le contexte du g&#xE9;nome viral a facilit&#xE9; l&#x26;#39;&#xE9;tude de l&#x26;#39;infection et a &#xE9;t&#xE9; particuli&#xE8;rement utile dans le suivi du transfert du virus entre les cellules suivantes formation de la synapse virologique. VIH-gag iGFP, un clone viral qui contient la GFP ins&#xE9;r&#xE9; entre la matrice (MA) et de capside (CA) de domaines Gag, la premi&#xE8;re r&#xE9;plication est comp&#xE9;tente clone mol&#xE9;culaire qui g&#xE9;n&#xE8;re fluorescentes particules infectieuses. Ici, nous discutons de certaines m&#xE9;thodes qui exploitent le VIH Gag-iGFP de quantifier de cellule &#xE0; cellule de transmission du virus par cytom&#xE9;trie de flux et de suivre les prot&#xE9;ines lors de l&#x26;#39;assemblage et la transmission en utilisant imagerie des cellules vivantes.

Suivi et quantification de Fluorescent VIH cours de cellule &#xE0; cellule-Transmission

Das gr&uuml;ne fluoreszierende Protein (GFP) ist eine starke genetische Kennzeichnung-Tool, mit dem Virologen zur &Uuml;berwachung und Verfolgung virale Proteine w&auml;hrend der HIV-Infektion aktiviert hat. Optimiert f&uuml;r Ausdruck Gag-GFP-Konstrukte sind benutzt worden, Virus-Like Particle (VLP) Montage und Lokalisierung in Zelltypen, die leicht die transfected sind zu studieren. Die Entwicklung von HIV-1 Varianten mit GFP im Rahmen des viralen Genoms hat erleichtert das Studium der Infektion und wurde besonders f&uuml;r die &Uuml;bertragung des Virus zwischen Zellen, die nach Gr&uuml;ndung der virologischen Synapse &Uuml;berwachung. HIV Gag-iGFP, eine virale Klon, die GFP eingef&uuml;gt zwischen der Matrix (MA) und Kapsid (CA) Dom&auml;nen der Gag, enth&auml;lt ist die erste Replikation zust&auml;ndigen Molekulare Klon, der fluoreszierende infekti&ouml;se Partikel erzeugt. Hier diskutieren wir einige Methoden, die HIV Gag-iGFP, Zell-Zell-&Uuml;bertragung des Virus durch Durchflusszytometrie zu quantifizieren und die Proteine w&auml;hrend der Versammlung und Getriebe nach Leben-Zelle Darstellung verfolgen ausnutzen.

Tracking und quantitative Bestimmung der fluoreszierenden HIV w&auml;hrend der &Uuml;bertragung von Zelle zu Zelle.

La proteina fluorescente verde (GFP) &egrave; uno strumento potente marcatura genetica che ha permesso i virologi a monitor e traccia le proteine virali durante l&#39;infezione da HIV. Espressione-ottimizzato costrutti Gag-GFP sono stati utilizzati per studiare le particelle virus-simili (VLP) montaggio e localizzazione in tipi di celle transfected facilmente. Lo sviluppo delle varianti di HIV-1 che trasportano GFP all&#39;interno del contesto del genoma virale ha facilitato lo studio dell&#39;infezione ed &egrave; stato particolarmente utile nel monitoraggio il trasferimento del virus tra cellule in seguito formazione sinapsi virologiche. HIV Gag-iGFP, un clone virale contenente GFP inserito tra i domini di capside (CA) di Gag, e matrix (MA) &egrave; il primo replica competente molecular clone che genera particelle infettive fluorescenti. Qui, discuteremo alcuni metodi che sfruttano l&#39;HIV Gag-iGFP per quantificare la cella di trasmissione del virus tramite citometria a flusso e per tenere traccia delle proteine durante la trasmissione utilizzando live-cell imaging e assemblaggio.

Rilevamento e la quantificazione dell&#39;HIV fluorescenti durante la trasmissione di cella.

&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;GFP&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x8005;&#x306F;&#x3001;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x6642;&#x306B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3057;&#x3001;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30AE;&#x30E3;&#x30B0;-GFP&#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x304C;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x69D8;&#x7C92;&#x5B50;&#xFF08;VLP&#xFF09;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x5185;&#x3067;GFP&#x3092;&#x904B;&#x3076;HIV-1&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5F62;&#x6210;&#x5F8C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x306E;&#x76E3;&#x8996;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; HIV GAG-iGFP&#x3001;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xFF08;MA&#xFF09;&#x3068;Gag&#x306E;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#xFF08;CA&#xFF09;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9593;&#x306B;&#x633F;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;GFP&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x611F;&#x67D3;&#x6027;&#x7C92;&#x5B50;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x80FD;&#x3092;&#x5206;&#x5B50;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;HIV GAG-iGFP&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3001;&#x4F1D;&#x9001;&#x4E2D;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6D3B;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BB;&#x30EB;&#x3078;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x9001;&#x4FE1;&#x6642;&#x306E;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;HIV&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;

&#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP)&#xB294; HIV &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; virologists &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xBC0F; &#xCD94;&#xC801; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC1C; &#xADF8;-GFP &#xAD6C;&#xBB38; &#xC2DD; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xC27D;&#xAC8C; &#xD398; &#xC140; &#xD615;&#xC2DD;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC19;&#xC740; &#xC785;&#xC790; (VLP) &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xB97C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hiv-1 &#xBCC0;&#xC885; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; GFP&#xB97C; &#xC6B4;&#xBC18;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xB294; &#xACE0; virological &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC140; &#xAC04;&#xC758; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC804;&#xC1A1;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; &#xC720;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xAC1C; &#xADF8;-iGFP, GFP &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; (MA)&#xACFC; &#xAC1C; &#xADF8;&#xC758; capsid (CA) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0AC;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC720;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xD074;&#xB860;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD615;&#xAD11; &#xC804;&#xC5FC; &#xC131; &#xC785;&#xC790;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC545;&#xC6A9; HIV &#xAC1C; &#xADF8;-iGFP cytometry&#xB85C; &#xC140; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xACC4;&#xB7C9; &#xD558; &#xACE0; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC804;&#xC1A1; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xCD94;&#xC801; &#xD558;&#xB294; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCD94;&#xC801; &#xBC0F; &#xC140; &#xC804;&#xC1A1; &#xC911; &#xD615;&#xAD11; HIV&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;.

La prote&#xED;na verde fluorescente (GFP) es una poderosa herramienta de marcado gen&#xE9;tico que ha permitido a los vir&#xF3;logos para supervisar y realizar un seguimiento de las prote&#xED;nas virales durante la infecci&#xF3;n por el VIH. Optimizaci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n-GFP Gag-construcciones se han utilizado para estudiar el virus-como part&#xED;cula (VLP) de la Asamblea y la localizaci&#xF3;n de los tipos de c&#xE9;lulas que son f&#xE1;cilmente transfectadas. El desarrollo de VIH-1 variantes que llevan GFP en el contexto del genoma viral ha facilitado el estudio de la infecci&#xF3;n y ha sido particularmente &#xFA;tiles para controlar la transferencia de virus entre las c&#xE9;lulas siguientes formaci&#xF3;n de sinapsis virol&#xF3;gicas. VIH Gag-iGFP, un clon viral que contiene las buenas pr&#xE1;cticas agrarias insertada entre la matriz (MA) y la c&#xE1;pside (CA) los dominios de la mordaza, es la primera replicaci&#xF3;n competente clon molecular que genera fluorescentes part&#xED;culas infecciosas. En este caso, hablamos de algunos de los m&#xE9;todos que se aprovechan de VIH Gag-iGFP para cuantificar la c&#xE9;lula a c&#xE9;lula de transmisi&#xF3;n del virus por citometr&#xED;a de flujo y para realizar un seguimiento de las prote&#xED;nas durante el montaje y la transmisi&#xF3;n que utiliza c&#xE9;lulas vivas im&#xE1;genes.

Seguimiento y cuantificaci&#xF3;n de VIH durante el fluorescente de la c&#xE9;lula a c&#xE9;lula de transmisi&#xF3;n

&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;-1 &#x53EF;&#x7531;&#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F53;&#x76F4;&#x63A5;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x901A;&#x8FC7;&#x63A5;&#x89E6;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x79F0;&#x4E3A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6; (VS)&#x3002;&#x671F;&#x95F4; VS &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x611F;&#x67D3;&#xFF0C;virions &#x5728;&#x76EE;&#x6807;&#x5355;&#x5143;&#x683C; endosomes &#x5185;&#x5806;&#x79EF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7A7F;&#x8D8A; VS &#x540E;, &#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7ECF;&#x5386;&#x6210;&#x719F;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x3002;VS &#x8F6C;&#x8BA9;&#x540E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x51FA;&#x73B0;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684; virions &#x5411;&#x75C5;&#x4EBA;&#x8840;&#x6E05;&#x76F8;&#x6BD4;&#x6210;&#x719F;&#x3001; &#x65E0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2;&#x663E;&#x793A;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x964D;&#x4F4E;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7C92;&#x5B50;&#x878D;&#x5408;&#x9700;&#x8981;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684; virions &#x63A5;&#x53D7;&#x627F;&#x5151;&#x4EBA;&#x7EC6;&#x80DE; endosomes&#xFF0C;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x65F6;&#x5185;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x6210;&#x719F;&#x3002;&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x8868;&#x660E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x878D;&#x5408;&#x53EF;&#x51FA;&#x73B0;&#x5728;&#x5DF2;&#x8FC1;&#x79BB; VS &#x7684;&#x8F66;&#x53A2;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x9897;&#x7C92;&#x6210;&#x719F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x878D;&#x5408;&#x5728;&#x76EE;&#x6807; CD4 + T &#x7EC6;&#x80DE; endosomes &#x4EE5;&#x4E0B;&#x901A;&#x8FC7; VS &#x4F20;&#x8F93;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EE3;&#x8868;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x9003;&#x907F;&#x6297;&#x4F53;&#x4E2D;&#x548C;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;

&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7A81;&#x89E6;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;-1 &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x75C5;&#x6BD2;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x7684; endosomal &#x75C5;&#x6BD2;&#x4F53;&#x6210;&#x719F;&#x3002;

HIV-1 can infect T cells by cell-free virus or by direct virion transfer between cells through cell contact-induced structures called virological synapses (VS). During VS-mediated infection, virions accumulate within target cell endosomes. We show that after crossing the VS, the transferred virus undergoes both maturation and viral membrane fusion. Following VS transfer, viral membrane fusion occurs with delayed kinetics and transferred virions display reduced sensitivity to patient antisera compared to mature, cell-free virus. Furthermore, particle fusion requires that the transferred virions undergo proteolytic maturation within acceptor cell endosomes, which occurs over several hours. Rapid, live cell confocal microscopy demonstrated that viral fusion can occur in compartments that have moved away from the VS. Thus, HIV particle maturation activates viral fusion in target CD4+ T cell endosomes following transfer across the VS and may represent a pathway by which HIV evades antibody neutralization.

Cell-to-cell transfer of HIV-1 via virological synapses leads to endosomal virion maturation that activates viral membrane fusion.

VIH-1 peut infecter des cellules T par acellulaire virus ou par transfert direct entre virion cellules &#xE0; travers de cellules de contact induites structures appel&#xE9; synapses virologiques (VS). Au cours de VS-m&#xE9;diation infection, les virions s&#x26;#39;accumulent dans la cellule cible endosomes. Nous montrons que, apr&#xE8;s avoir travers&#xE9; la VS, le virus transmis subit &#xE0; la fois la maturation et la fusion des membranes virale. Apr&#xE8;s le transfert VS, la fusion des membranes virale se produit avec une cin&#xE9;tique retard&#xE9;s et des virions transf&#xE9;r&#xE9;es s&#x26;#39;affichent une sensibilit&#xE9; r&#xE9;duite &#xE0; antis&#xE9;rums patient par rapport &#xE0; maturit&#xE9;, sans cellule du virus. En outre, la fusion des particules exige que les virions transmis subissent une maturation prot&#xE9;olytique dans la cellule accepteur endosomes, qui se produit pendant plusieurs heures. Rapide, la microscopie confocale de cellules vivantes ont d&#xE9;montr&#xE9; que la fusion virale peut se produire dans les compartiments qui ont d&#xE9;m&#xE9;nag&#xE9; loin de la VS. Ainsi, la maturation des particules VIH active la fusion virale des cellules CD4 + lymphocytes T cibles endosomes apr&#xE8;s le transfert &#xE0; travers le VS et peut repr&#xE9;senter une voie par laquelle le VIH &#xE9;chappe la neutralisation des anticorps.

Cell-&#xE0;-cellule de transfert du VIH-1 via les synapses virologiques m&#xE8;ne &#xE0; la maturation Virion endosomal qui active Fusion membrane virale

HIV-1 T-Zellen durch zellfreien Virus infizieren kann oder durch direkte Virion &Uuml;bertragung von Zellen durch Zelle Kontakt induziert Strukturen genannt virologischen Synapsen (VS). Sammeln Sie w&auml;hrend der VS-vermittelte Infektion Virionen innerhalb deiner Zelle Endosomen. Wir zeigen, dass das &uuml;bertragene Virus nach dem &Uuml;berqueren der VS, Reifung und virale Membrane Fusion durchl&auml;uft. Nach VS-Transfer virale Membran Verschmelzung tritt bei verz&ouml;gerten Kinetik und &uuml;bertragene Virionen geringere Empfindlichkeit f&uuml;r Patienten im Vergleich zu Reifen, zellfreien Virus Antiseren anzuzeigen. Partikel Fusion erfordert dar&uuml;ber hinaus, dass die &uuml;bertragenen Virionen proteolytische Reifung innerhalb Akzeptor Zelle Endosomen, unterziehen, die &uuml;ber mehrere Stunden auftritt. Schnelle, live Zelle confocal Mikroskopie gezeigt, dass virale Verschmelzung in den Abteilen auftreten kann, die Weg von der VS verschoben haben. Daher aktiviert HIV-Partikel-Reifung virale Schmelzverfahren in deiner CD4 + T Zelle Endosomen Folgendes &uuml;ber die VS &uuml;bertragen und kann einen Weg durch den HIV Antik&ouml;rper Neutralisierung entzieht.

Zell-Zell-&Uuml;bertragung von HIV-1 &uuml;ber virologischen Synapsen f&uuml;hrt zu Endosomen Virion Reifung, die virale Membran Verschmelzung aktiviert wird.

HIV-1 possono infettare le cellule T dal virus senza cellula o di trasferimento diretto virione tra cellule attraverso strutture cellulari indotta dal contatto chiamati virologiche sinapsi (VS). Durante l&#39;infezione VS-mediata, virioni si accumulano all&#39;interno endosomes delle cellule bersaglio. Mostriamo che dopo aver attraversato il VS, il virus trasferito subisce la maturazione e la fusione della membrana virale. In seguito VS trasferimento, fusione della membrana virale avviene con ritardo cinetica e virioni trasferiti visualizzazione ridotta sensibilit&agrave; al pazienti antisieri rispetto al virus maturo, privo di cella. Inoltre, la fusione delle particelle richiede che i virioni trasferiti sottoposti a maturazione proteolitica entro accettore cella endosomes, che si verifica sopra parecchie ore. Microscopia confocale cella rapida, diretta ha dimostrato che la fusione virale pu&ograve; verificarsi in compartimenti che hanno allontanato la VS. Cos&igrave;, maturazione della particella HIV attiva fusione virale nel bersaglio CD4 + T cell endosomes seguente trasferimento attraverso la VS e possono rappresentare un percorso da cui l&#39;HIV sfugge neutralizzazione dell&#39;anticorpo.

Trasferimento a cella di HIV-1 via sinapsi virologiche conduce alla maturazione del virione endosomal che attiva la fusione della membrana virale.

HIV-1&#x306F;&#x3001;&#x7121;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#xFF08;VS&#xFF09;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x89E6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x8EE2;&#x9001;&#x306B;&#x3088;&#x308B;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002; VS-&#x5A92;&#x4ECB;&#x611F;&#x67D3;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7C92;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5185;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;VS&#x3092;&#x6A2A;&#x65AD;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x8EE2;&#x9001;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x304C;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; VS&#x8EE2;&#x9001;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x9045;&#x5EF6;&#x53CD;&#x5FDC;&#x901F;&#x5EA6;&#x3084;&#x8EE2;&#x9001;&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x7121;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x60A3;&#x8005;&#x8840;&#x6E05;&#x306B;&#x611F;&#x5EA6;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x9001;&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x6570;&#x6642;&#x9593;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x5185;&#x3067;&#x5206;&#x89E3;&#x719F;&#x6210;&#x3092;&#x7D4C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x8FC5;&#x901F;&#x3001;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x306F;VS&#x304B;&#x3089;&#x96E2;&#x308C;&#x3066;&#x79FB;&#x52D5;&#x3057;&#x305F;&#x533A;&#x753B;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;HIV&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;CD4&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;+ T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;VS&#x3092;&#x8D8A;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x6B21;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;HIV&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x4F53;&#x4E2D;&#x548C;&#x3092;&#x5FCC;&#x907F;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;

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&#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xC140; &#xBB34;&#xB8CC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB610;&#xB294; virological &#xC774;&#xB77C;&#xB294; &#xC140; &#xC811;&#xCD09; &#xC720;&#xBC1C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC140; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; virion &#xC1A1;&#xAE08; synapses (&#xB300;). VS &#xC911;&#xC7AC; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; virions &#xB300;&#xC0C1; &#xC140; endosomes &#xB0B4;&#xC758; &#xCD95;&#xC801;. &#xC6B0;&#xB9AC; VS &#xAC74;&#xB108; &#xD6C4; &#xC131;&#xC219;&#xACFC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB9C9; &#xD4E8;&#xC804; &#xC804;&#xC1A1; &#xB41C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC218;&#xD589;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300; &#xC804;&#xC1A1; &#xC9C0;&#xC5F0;&#xB41C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB9C9; &#xD4E8;&#xC804;&#xC744; &#xC804;&#xC1A1; &#xB41C; virions &#xD658;&#xC790; antisera &#xC131;&#xC219;, &#xC140; &#xBB34;&#xB8CC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xAC10;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC785;&#xC790; &#xD4E8;&#xC804; &#xC804;&#xC1A1; &#xB41C; virions &#xC218;&#xC220; &#xBA87; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; &#xC140; endosomes &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC131;&#xC219; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xD4E8;&#xC804; VS &#xBA40;&#xB9AC; &#xC774;&#xB3D9; &#xB41C; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; HIV &#xC785;&#xC790; &#xC131;&#xC219; &#xB300;&#xC0C1; CD4 + T &#xC138;&#xD3EC; endosomes &#xB2E4;&#xC74C; &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xC1A1; &#xD558; &#xACE0;&#xB294; HIV &#xD56D; &#xCCB4; &#xC911;&#xD654;&#xB97C; evades &#xD1B5;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC735;&#xD569;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Virological &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; h i V-1&#xC758; &#xC140; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB9C9; &#xC735;&#xD569; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; endosomal virion &#xC131;&#xC219;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;.

VIH-1 puede infectar a las c&#xE9;lulas T de c&#xE9;lulas libres de virus o viri&#xF3;n transferencia directa entre las c&#xE9;lulas a trav&#xE9;s de c&#xE9;lulas inducidas por contacto-estructuras llamadas sinapsis virol&#xF3;gicas (VS). Durante la infecci&#xF3;n VS-mediada, los viriones se acumulan en la c&#xE9;lula diana endosomas. Se demuestra que despu&#xE9;s de cruzar el VS, el virus se transfiere sufre la maduraci&#xF3;n y la fusi&#xF3;n de la membrana viral. Despu&#xE9;s de la transferencia de VS, la fusi&#xF3;n de la membrana viral se produce con retraso y la cin&#xE9;tica de viriones transferidas aparecen disminuci&#xF3;n de la sensibilidad a la paciente en comparaci&#xF3;n con antisueros madura, c&#xE9;lulas libres de virus. Adem&#xE1;s, la fusi&#xF3;n de part&#xED;culas requiere que los viriones transferidos someterse a la maduraci&#xF3;n proteol&#xED;tica dentro de la celda aceptor endosomas, que se produce durante varias horas. Microscopio r&#xE1;pido, celular confocal en vivo demostr&#xF3; que la uni&#xF3;n del virus puede ocurrir en compartimientos que se han alejado de los SV. De este modo, la maduraci&#xF3;n de las part&#xED;culas del VIH activa la uni&#xF3;n del virus en las c&#xE9;lulas CD4 + de destino de las c&#xE9;lulas T endosomas despu&#xE9;s de su traslado a trav&#xE9;s de la SV y puede representar una v&#xED;a por la cual el VIH evade la neutralizaci&#xF3;n de anticuerpos.

De la c&#xE9;lula a c&#xE9;lula de transferencia del VIH-1 trav&#xE9;s de las sinapsis virol&#xF3;gicas lleva a la maduraci&#xF3;n del viri&#xF3;n endosomal que activa fusi&#xF3;n de la membrana viral

Gregory P. McNerney

NSF Center for Biophotonics

University of California, Davis

Visualizing Cell-to-cell Transfer of HIV using Fluorescent Clones of HIV and Live Confocal Microscopy

Gregory P. McNerney

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University of California, Davis

Visualizing Cell-to-cell Transfer of HIV using Fluorescent Clones of HIV and Live Confocal Microscopy

NSF Center for Biophotonics