Name: quantitation of &gamma;h2ax foci in tissue samples
Uploaded: 2010-06-28T17:33:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitation of ÃŽÂ³H2AX Foci in Tissue Samples at JoVE.com

ومن المسلم به بدعم من المعهد الأسترالي للعلوم والهندسة النووية. وكان TCK المستلم من الجوائز AINSE. يتم اعتماد مختبر الطب التي Epigenomic الوطني للصحة ومجلس البحوث الطبية في استراليا (566559). ويدعم LM عن طريق البحث في ملبورن (جامعة ملبورن) والمنح الطبية التكميلية لجنة حقوق الطفل التصوير. وبدعم من جامعة موناش مايكرو التصوير (الدكاترة ستيفن كودي وكارمايكل Iśka) لا تقدر بثمن لهذا العمل. MMT تشعر بالامتنان للمساعدة والمشورة من الخبراء الدكتورة أولغا Sedelnikova من المعاهد الوطنية للصحة.

الأنسجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كان نسيج الرئة ، وجزءا لا يتجزأ من قوالب القطع في درجة الحرارة المثلى (أكتوبر) 4583 مركب ، مقطوع (5 ميكرون) باستخدام CM ايكا 1950 ناظم البرد والتي شنت على بولي - L - يسين الشرائح. </li></ol>...

<ol>
	<li>Rogakou, E. P., Boon, C., Redon, C., Bonner, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Megabase+chromatin+domains+involved+in+DNA+double-strand+breaks+in+vivo.">Megabase chromatin domains involved in DNA double-strand breaks in vivo.</a> J. Cell Biol. 146, 905-916 (1999).</li><li>Bonner, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gamma+H2AX+and+cancer.">Gamma H2AX and cancer.</a> Nature Reviews Cancer. 8 (12), 957-967 (2008).</li><li>Dickey, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=H2AX:+functional+roles+and+potential+applications.">H2AX: functional roles and potential applications.</a> Chromosoma. 118 (6), 683-692 (2009).</li><li>Bhogal, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Late+residual+gamma-H2AX+foci+in+murine+skin+are+dose+responsive+and+predict+radiosensitivity+in+vivo.">Late residual gamma-H2AX foci in murine skin are dose responsive and predict radiosensitivity in vivo.</a> Radiat Res. 173 (1), 1-9 (2010).</li><li>Redon, C. E., Dickey, J. S., Bonner, W. M., Sedelnikova, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=gamma-H2AX+as+a+biomarker+of+DNA+damage+induced+by+ionizing+radiation+in+human+peripheral+blood+lymphocytes+and+artificial+skin.">gamma-H2AX as a biomarker of DNA damage induced by ionizing radiation in human peripheral blood lymphocytes and artificial skin.</a> Adv Space Res. 43 (8), 1171-1178 (2009).</li><li>Locke, N. R., Royce, S. G., Wainewright, J. S., Samuel, C. S., Tang, M. L., L, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+airway+remodeling+in+acute,+subacute,+and+chronic+models+of+allergic+airways+disease.">Comparison of airway remodeling in acute, subacute, and chronic models of allergic airways disease.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 36 (5), 625-632 (2007).</li><li>Bolte, S. &. a. m. p. ;. a. m. p., Cordelieres, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guided+tour+into+subcellular+colocalization+analysis+in+light+microscopy.">A guided tour into subcellular colocalization analysis in light microscopy.</a> J Microsc. 224 (Pt 3), 213-232 (2006).</li></ol>

لغرض هذه المظاهرة كنا الماوس أنسجة الرئة من دون علاج BALB / ج والفئران من نموذج الفأر من مرض مزمن في الشعب الهوائية التحسسي. quantitated نحن اختلافات في عدد من البؤر في زنزانة مع المعدلات أعلى قليلا لوحظت في الرئة مقارنة المقاطع التالفة دون علاج. على وجه التحديد ، أشار الكميا?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A7906</td>
<td>BSA (1%) is used to block any non-specific antibody binding. Primary and secondary antibodies are diluted in BSA.</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS (without Ca2+ and Mg2+)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17-517Q</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Optimal Cutting Temperature (OCT) Compound 4583</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tissue-Tek</td>
<td>4583</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Superfrost Plus</td>
<td>Polysine slides</td>
<td>Menzel-Gl&auml;ser, Germany</td>
<td>SF41296SP</td>
<td>Electrostatically attracts frozen tissue sections and reduces the need for additional coatings and adhesives.</td>
</tr>
<tr>
<td>Tween 20</td>
<td>Reagent</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>655205</td>
<td>Tween 20 (0.5%), is a detergent to permeabilise cells</td>
</tr>
<tr>
<td>Triton X-100</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T8787</td>
<td>Triton X-100 (0.1%) used to permeabilise cells.</td>
</tr>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>158127</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anti-phospho-&gamma;H2AX (rabbit polyclonal antibody)</td>
<td>Primary Antibody</td>
<td>Upstate, USA</td>
<td>07-164</td>
<td>Dilution of primary antibody (1:500), in 1% BSA.</td>
</tr>
<tr>
<td>Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit IgG (H+L)</td>
<td>Secondary Antibody</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A-11008</td>
<td>Dilution of secondary antibody (1:500), in 1% BSA.</td>
</tr>
<tr>
<td>Ethanol (70%)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Fisher</td>
<td>BSPEL316</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNAse A</td>
<td>Reagent</td>
<td>Qiagen </td>
<td>19101</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield PI</td>
<td>Reagent</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H-1300</td>
<td>A glycerol based mounting medium containing propidium iodide (a red nuclear stain).This medium must be used with an oil based lense that matches its refractive index. 
Note: DNA stain commonly used: 4,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI). Can only be used with microscopes with the appropriate excitation laser.</td>
</tr>
<tr>
<td>Mini PAP Pen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen, USA</td>
<td>008877</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips (22x50mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Menzel-Gl&auml;ser, Germany</td>
<td>CS2250100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin Jar, glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grale Scientific P/L</td>
<td>1771-OG</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Staining Trough</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grale Scientific P/L</td>
<td>V1991.99</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Zeiss LSM 510 Meta Confocal</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Confocal Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CM Leica 1950 Cryostat</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metamorph</td>
<td>Software for Imaging analysis</td>
<td>Molecular Devices, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

quantitation of &gamma;h2ax foci in tissue samples

الحمض النووي مزدوج الجديلة (DSBs) هي آفات فتاكة بشكل خاص وسام للجينات ، التي يمكن أن تنشأ إما عن طريق عمليات داخلية (فسيولوجية أو مرضية) أو بفعل عوامل خارجية ، وخاصة الإشعاعات المؤينة والمركبات محاك للإشعاع. الفسفرة من البديل H2A هيستون ، H2AX ، على بقايا سيرين 139 ، في غاية الحفظ عزر SQEY C - المحطة ، وتشكيل γH2AX ، هو الاستجابة المبكرة لالحمض النووي المزدوج الجديلة<sup&gt; 1</sup&gt;. وتتوسط هذا الحدث من قبل الفسفرة فسفاتيديل inosito - 3 - كيناز (PI3K) عائلة من البروتينات ، رنح توسع الشعيرات تحور (ATM) ، الوحيدات كيناز الحمض النووي من البروتين المحفز وأجهزة الصراف الآلي وRAD3 ذات الصلة (ATR)<sup&gt; 2</sup&gt;. عموما ، نتائج التوجيهي DSB في تشكيل بؤر منفصلة γH2AX النووية التي يمكن الكشف عنها بسهولة وquantitated بواسطة المجهر المناعي<sup&gt; 2</sup&gt;. نظرا لخصوصية فريدة وحساسية هذه العلامة ، وتحليل بؤر γH2AX أدى إلى طائفة واسعة من التطبيقات في مجال البحوث الطبية الحيوية ، وبخاصة في مجال البيولوجيا الإشعاعية والطب النووي. كانت الكميات من بؤر γH2AX التحقيق على نطاق واسع في معظم نظم زراعة الخلايا في سياق DSBs المستحثة بالإشعاع المؤين. وبصرف النظر عن حساسية للأشعة الخلوية ، كما تم بناء المقايسات المناعي المستخدمة لتقييم فعالية الإشعاع تعديل المركبات. بالإضافة إلى ذلك ، تم استخدام γH2AX كعلامة الجزيئية لدراسة فعالية مركبات DSB الذي يحفز مختلف ، وآخرها كما بشرت علامة هامة للتقدم في السن والمرض ، وبصفة خاصة السرطان<sup&gt; 3</sup&gt;. وقد تم تكييف مزيد من التألق المناعي القائم على أساليب للكشف وتناسب الكميات من بؤر γH2AX<em&gt; خارج الحي</em&gt; و<em&gt; في الجسم الحي</em<sup&gt; 4،5</sup&gt;. هنا ، علينا أن نظهر طريقة نموذجية المناعي للكشف عن الكميات وبؤر γH2AX في الأنسجة الماوس.

Watch this Scientific Journal Video about Quantitation of ÃŽÂ³H2AX Foci in Tissue Samples at JoVE.com

Quantitation of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX Foci in Tissue Samples

لقد أصبح من الكميات فواصل المزدوج حبلا الحمض النووي على أساس من بؤر γH2AX أداة لا تقدر بثمن ، لا سيما في مجال البيولوجيا الإشعاعية ، لتقييم حساسية للأشعة الأنسجة وآثار الاشعاع تعديل المركبات. نحن هنا لشرح استخدام للمقايسة التألق المناعي عن الكميات من بؤر γH2AX في عينات الأنسجة.

الكميات بؤر γH2AX في عينات الأنسجة

DNA double-strand breaks (DSBs) are particularly lethal and genotoxic lesions, that can arise either by endogenous (physiological or pathological) ...

Research

JoVE Journal

Biology

Quantitation of &gamma;H2AX Foci in Tissue Samples

Quantification of &gamma;H2AX Foci in Response to Ionising Radiation

Quantification of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX Foci in Response to Ionising Radiation

الكمي بؤر γH2AX في الاستجابة للإشعاع المؤين

DNA double-strand breaks (DSBs), which are induced by either endogenous metabolic processes or by exogenous sources, are one of the most critical DNA ...

NanoDrop Microvolume Quantitation of Nucleic Acids

NanoDrop Microvolume الكميات من الأحماض النووية

Biomolecular assays are continually being developed that use progressively smaller amounts of material, often precluding the use of conventional ...

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks

افعل ذلك بنفسك جهاز لاستخراج العينات Cryopreserved سقطت سهوا في صهاريج التخزين المبردة

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term ...

Method for Measuring the Activity of Deubiquitinating Enzymes in Cell Lines and Tissue Samples

طريقة لقياس آخر من Deubiquitinating الانزيمات في خطوط الخلايا وعينات الأنسجة

The ubiquitin-proteasome system has recently been implicated in various pathologies including neurodegenerative diseases and cancer. In light of this, ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

الكميات من البطانية الإلتصاق الخليوي<em&gt; في المختبر</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Quantitation of Protein Expression and Co-localization Using Multiplexed Immuno-histochemical Staining and Multispectral Imaging

الكميات التعبير البروتين والتعاون التعريب عن طريق تعدد المناعية النسيجية تلطيخ والمتعددة الأطياف التصوير

Immunohistochemistry is a commonly used clinical and research lab detection technique for investigating protein expression and localization within ...

Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples

الهجين قطع: طريقة محسنة باجتزاء لعينات الأنسجة النباتية المتمردة

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some ...

Methods to Classify Cytoplasmic Foci as Mammalian Stress Granules

طرق لتصنيف البؤر السيتوبلازمية كما حبيبات الإجهاد الثدييات

Cells are often challenged by sudden environmental changes. Stress Granules (SGs), cytoplasmic ribonucleoprotein complexes that form in cells exposed to ...

Simultaneous Mapping and Quantitation of Ribonucleotides in Human Mitochondrial DNA

المتزامن لرسم الخرائط وكوانتيتاتيون من ريبونوكليوتيديس في الحمض النووي البشري

Established approaches to estimate the number of ribonucleotides present in a genome are limited to the quantitation of incorporated ribonucleotides using ...

Quantitative Immunoblotting of Cell Lines as a Standard to Validate Immunofluorescence for Quantifying Biomarker Proteins in Routine Tissue Samples

إيمونوبلوتينج كمية من خطوط الخلايا كمعيار للتحقق من صحة الفلورة للتحديد الكمي للعلامات البيولوجية البروتينات في عينات الأنسجة الروتينية

Quantification of proteins of interest in formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue samples is important in clinical and research applications. An ...