Name: quantitation of &gamma;h2ax foci in tissue samples
Uploaded: 2010-06-28T17:33:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitation of ÃŽÂ³H2AX Foci in Tissue Samples at JoVE.com

Avustralya Nükleer Bilimi ve Mühendisliği Enstitüsü destek kabul edilmektedir. TCK AINSE ödül layık görüldü. Epigenomic Tıp Laboratuarı, Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi (566.559) Avustralya tarafından desteklenmektedir. LM Melbourne Araştırma (University of Melbourne) ve Biyomedikal Görüntüleme CRC ek burs tarafından desteklenmektedir. Monash Micro Görüntüleme desteği (Dr Stephen Cody ve Iska Carmichael), bu iş için çok değerli idi. MMT Ulusal Sağlık Enstitüleri Dr Olga Sedelnikova uzman yardım ve tavsiye için minnettar olduğunu.

Dokular <ol><li> Akciğer dokusu, optimal kesim sıcaklığında (OCT) bileşik 4583 kalıplar içine gömülü bir CM Leica 1950 Kriyostat (5 mikron) kesitli ve poli-L-lisin slaytlar monte edilmiş. </li></ol> Murdoch Çocuk Araştırma Enstitüsü&#39;nde Dr. Simon Royce donmuş numuneler elde edilmiştir. Akciğer dokusunun tedavi edilmezse Balb / c farelerinde ve birçok insan astım 6 patolojik özellikleri gösteren kronik allerjik solunum yolları hastalığı, bir fare modeli...

<ol>
	<li>Rogakou, E. P., Boon, C., Redon, C., Bonner, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Megabase+chromatin+domains+involved+in+DNA+double-strand+breaks+in+vivo.">Megabase chromatin domains involved in DNA double-strand breaks in vivo.</a> J. Cell Biol. 146, 905-916 (1999).</li><li>Bonner, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gamma+H2AX+and+cancer.">Gamma H2AX and cancer.</a> Nature Reviews Cancer. 8 (12), 957-967 (2008).</li><li>Dickey, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=H2AX:+functional+roles+and+potential+applications.">H2AX: functional roles and potential applications.</a> Chromosoma. 118 (6), 683-692 (2009).</li><li>Bhogal, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Late+residual+gamma-H2AX+foci+in+murine+skin+are+dose+responsive+and+predict+radiosensitivity+in+vivo.">Late residual gamma-H2AX foci in murine skin are dose responsive and predict radiosensitivity in vivo.</a> Radiat Res. 173 (1), 1-9 (2010).</li><li>Redon, C. E., Dickey, J. S., Bonner, W. M., Sedelnikova, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=gamma-H2AX+as+a+biomarker+of+DNA+damage+induced+by+ionizing+radiation+in+human+peripheral+blood+lymphocytes+and+artificial+skin.">gamma-H2AX as a biomarker of DNA damage induced by ionizing radiation in human peripheral blood lymphocytes and artificial skin.</a> Adv Space Res. 43 (8), 1171-1178 (2009).</li><li>Locke, N. R., Royce, S. G., Wainewright, J. S., Samuel, C. S., Tang, M. L., L, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+airway+remodeling+in+acute,+subacute,+and+chronic+models+of+allergic+airways+disease.">Comparison of airway remodeling in acute, subacute, and chronic models of allergic airways disease.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 36 (5), 625-632 (2007).</li><li>Bolte, S. &. a. m. p. ;. a. m. p., Cordelieres, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guided+tour+into+subcellular+colocalization+analysis+in+light+microscopy.">A guided tour into subcellular colocalization analysis in light microscopy.</a> J Microsc. 224 (Pt 3), 213-232 (2006).</li></ol>

Tedavi edilmezse Balb / c farelerinde ve fare akciğer dokusunun kronik allerjik solunum yolları hastalığı bir fare modeli kullanılan bu gösteri amacı için. Biz biraz daha yüksek tedavi edilmezse bölümlerine göre hasarlı akciğer gözlenen ortalamaları ile hücre başına odaklarının sayısındaki farklılıklar quantitated. Özellikle, sırasıyla kantitatif, tedavi edilmezse doku ve kronik alerjik solunum yolları hastalığı doku / hücre başına 6.5 odaklar ve 9.4 odaklar başına / hücre (bölüm...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A7906</td>
<td>BSA (1%) is used to block any non-specific antibody binding. Primary and secondary antibodies are diluted in BSA.</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS (without Ca2+ and Mg2+)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17-517Q</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Optimal Cutting Temperature (OCT) Compound 4583</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tissue-Tek</td>
<td>4583</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Superfrost Plus</td>
<td>Polysine slides</td>
<td>Menzel-Gl&auml;ser, Germany</td>
<td>SF41296SP</td>
<td>Electrostatically attracts frozen tissue sections and reduces the need for additional coatings and adhesives.</td>
</tr>
<tr>
<td>Tween 20</td>
<td>Reagent</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>655205</td>
<td>Tween 20 (0.5%), is a detergent to permeabilise cells</td>
</tr>
<tr>
<td>Triton X-100</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T8787</td>
<td>Triton X-100 (0.1%) used to permeabilise cells.</td>
</tr>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>158127</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anti-phospho-&gamma;H2AX (rabbit polyclonal antibody)</td>
<td>Primary Antibody</td>
<td>Upstate, USA</td>
<td>07-164</td>
<td>Dilution of primary antibody (1:500), in 1% BSA.</td>
</tr>
<tr>
<td>Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit IgG (H+L)</td>
<td>Secondary Antibody</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A-11008</td>
<td>Dilution of secondary antibody (1:500), in 1% BSA.</td>
</tr>
<tr>
<td>Ethanol (70%)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Fisher</td>
<td>BSPEL316</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNAse A</td>
<td>Reagent</td>
<td>Qiagen </td>
<td>19101</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield PI</td>
<td>Reagent</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H-1300</td>
<td>A glycerol based mounting medium containing propidium iodide (a red nuclear stain).This medium must be used with an oil based lense that matches its refractive index. 
Note: DNA stain commonly used: 4,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI). Can only be used with microscopes with the appropriate excitation laser.</td>
</tr>
<tr>
<td>Mini PAP Pen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen, USA</td>
<td>008877</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips (22x50mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Menzel-Gl&auml;ser, Germany</td>
<td>CS2250100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin Jar, glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grale Scientific P/L</td>
<td>1771-OG</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Staining Trough</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Grale Scientific P/L</td>
<td>V1991.99</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Zeiss LSM 510 Meta Confocal</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Confocal Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CM Leica 1950 Cryostat</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metamorph</td>
<td>Software for Imaging analysis</td>
<td>Molecular Devices, USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

quantitation of &gamma;h2ax foci in tissue samples

DNA çift iplikli sonları (DSBs), endojen (fizyolojik veya patolojik) süreçleri veya dışsal faktörler, özellikle iyonlaştırıcı radyasyon ve radiomimetic bileşikleri de ortaya çıkabilir, özellikle ölümcül ve genotoksik lezyonlar vardır. Fosforilasyon serin-139 kalıntı H2A histon varyant, H2AX, son derece korunmuş C-terminal SQEY motifi, γH2AX oluşturan DNA çift iplikli tatili için erken bir cevap.<sup&gt; 1</sup&gt;. Bu fosforilasyon olayı fosfatidil-inosito 3-kinaz (PI3K) proteinleri aile, ataksi telenjiektazi mutasyona uğramış (ATM), DNA-protein kinaz katalitik subunit ve ATM ve RAD3 ilgili aracılık (ATR)<sup&gt; 2</sup&gt;. Genel olarak, ayrık nükleer γH2AX odaklarının oluşumunda DSB indüksiyon sonuçları kolayca algılanır ve immünofloresan mikroskopi tarafından quantitated hangi<sup&gt; 2</sup&gt;. Verilen bu marker benzersiz özgüllük ve duyarlılık, γH2AX odakları analiz, özellikle radyasyon biyolojisi ve nükleer tıp, biyomedikal araştırma uygulamalarında geniş bir yol açmıştır. ΓH2AX odaklarının kantitatif iyonize radyasyon kaynaklı DSBs bağlamda en yaygın olarak hücre kültürü sistemleri araştırılmıştır. Hücresel radiosensitivity dışında, immünofloresan tabanlı testleri de, etkinliğini radyasyon değiştirerek bileşikler değerlendirmek için kullanılır olmuştur. Buna ek olarak, özellikle kanser, γH2AX çeşitli DSB-indükleyici bileşiklerinin etkinliğini incelemek için bir moleküler marker olarak kullanılan ve son zamanlarda önemli bir belirteci olarak yaşlanma ve hastalık habercisi olan<sup&gt; 3</sup&gt;. Ayrıca, immünofloresan tabanlı yöntemler, uygun algılama ve kantitatif γH2AX odakları için adapte edilmiş<em&gt; Ex vivo</em&gt; Ve<em&gt; In vivo</em<sup&gt; 4,5</sup&gt;. Burada, fare dokularda γH2AX odaklarının tespiti ve kantitatif için tipik bir immünofloresan yöntemi göstermektedir.

Watch this Scientific Journal Video about Quantitation of ÃŽÂ³H2AX Foci in Tissue Samples at JoVE.com

Quantitation of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX Foci in Tissue Samples

ΓH2AX odaklarının dayanarak DNA çift iplikli sonlarının kantitasyonu doku radiosensitivity ve radyasyon değiştirerek bileşikler etkileri değerlendirilmesi için, özellikle radyasyon biyoloji, paha biçilmez bir araç haline gelmiştir. Burada doku örnekleri γH2AX odaklarının kantitatif bir immünofloresan testinin kullanımını göstermek.

Doku Örnekleri γH2AX Foci kantitasyonu

DNA double-strand breaks (DSBs) are particularly lethal and genotoxic lesions, that can arise either by endogenous (physiological or pathological) ...

Research

JoVE Journal

Biology

Quantitation of &gamma;H2AX Foci in Tissue Samples

Quantification of &gamma;H2AX Foci in Response to Ionising Radiation

Quantification of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX Foci in Response to Ionising Radiation

İyonlaştırıcı Radyasyon Cevabı γH2AX Foci Kantitasyonu

DNA double-strand breaks (DSBs), which are induced by either endogenous metabolic processes or by exogenous sources, are one of the most critical DNA ...

NanoDrop Microvolume Quantitation of Nucleic Acids

Nükleik Asitlerin NanoDrop Microvolume kantitasyonu

Biomolecular assays are continually being developed that use progressively smaller amounts of material, often precluding the use of conventional ...

Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks

KRİYOPREZERVE Numune Kurtarma için Do-It-Yourself Aygıt yanlışlıkla Kriyojenik Depolama Tankları içine Dropped

Liquid nitrogen is colorless, odorless, extremely cold (-196 &deg;C) liquid kept under pressure. It is commonly used as a cryogenic fluid for long term ...

Method for Measuring the Activity of Deubiquitinating Enzymes in Cell Lines and Tissue Samples

Hücre Kuşakları ve Doku Örneklerinde Deubiquitinating Enzim aktivitesinin ölçülmesi için bir yöntem

The ubiquitin-proteasome system has recently been implicated in various pathologies including neurodegenerative diseases and cancer. In light of this, ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Endotel Hücre yapışma miktarının belirlenmesi<em&gt; In Vitro</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Quantitation of Protein Expression and Co-localization Using Multiplexed Immuno-histochemical Staining and Multispectral Imaging

Çoklanmış Immuno-histokimyasal boyanması ve Multispektral Görüntüleme kullanma Protein Ekspresyonu ve Co-lokalizasyon Kantifikasyonu

Immunohistochemistry is a commonly used clinical and research lab detection technique for investigating protein expression and localization within ...

Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples

Hibrid-Cut: Dirençli Bir Bitki Doku Örnekleri Bir Geliştirilmiş Kesit Yöntemi

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some ...

Methods to Classify Cytoplasmic Foci as Mammalian Stress Granules

Sitoplazmik Odakları Memeli Stres Granülleri Olarak Sınıflandırma Yöntemleri

Cells are often challenged by sudden environmental changes. Stress Granules (SGs), cytoplasmic ribonucleoprotein complexes that form in cells exposed to ...

Simultaneous Mapping and Quantitation of Ribonucleotides in Human Mitochondrial DNA

Eş zamanlı haritalama ve Nefelometri Ribonucleotides insan mitokondriyal DNA'ın

Established approaches to estimate the number of ribonucleotides present in a genome are limited to the quantitation of incorporated ribonucleotides using ...

Quantitative Immunoblotting of Cell Lines as a Standard to Validate Immunofluorescence for Quantifying Biomarker Proteins in Routine Tissue Samples

Hücre hatları nicel Immunoblotting ayirt rutin doku örneklerinde biyomarker protein miktarının için doğrulamak için standart olarak

Quantification of proteins of interest in formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissue samples is important in clinical and research applications. An ...