Name: identifying dysregulated genes induced by kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (kshv)
Uploaded: 2010-09-14T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus KSHV at JoVE.com

אנו מודים ג&#39;יימס EK הילדרת, Meharry Medical College, לעצתו וסקירה של כתב היד הזה. אנו מודים גם דיאנה Marver לעריכה של כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי ונדרבילט Meharry המרכז לחקר האיידס (NIH מענק AI054999 P30-05); המרכז לחקר בריאות איידס פערים, NIH מענק 5U54 RR019192-05; Meharry המרכז למחקר קליני, NIH גרנט P20RR011792, ועל ידי NIH מענק P01 CA113239. DJA מומן בחלקו על ידי מענקים ממרכז טייס ואנדרבילט-Meharry לאיידס מחקר (כפר) והמרכז Meharry למחקר קליני (CRC).

1. KSVH טיפוח זיהום של DMVEC <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקו BCBL-1 תא, במקור מבודד לימפומה חלל גוף האדם מבוסס, הוא בתרבית להשלים RPMI 1640 מדיה (Gibco, גרנד איילנד, ניו יורק). BCBL-1 תאים יוסרו חנקן נוזלי, מועבר על קרח יבש, מופשר במהירות במשך דקה 1 ב 37 ° C. Aliquot 50 μL של BCBL-...

<ol>
	<li>Sitas, F., Newton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma+in+South+Africa.">Kaposi's sarcoma in South Africa.</a> J Natl Cancer Inst Monogr. 28, 1-4 (2001).</li><li>Moore, P. S., Chang, Y., Knipe, D. M., Howley, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma+associated+herpesvirus.">Kaposi's sarcoma associated herpesvirus.</a> Field's Virology. , 2803-2833 (2002).</li><li>Chang, Y., Cesarman, E., Pessin, M. S., Lee, F., Culpepper, J., Knowles, D. M., Moore, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+herpesvirus-like+DNA+sequences+in+AIDS-associated+Kaposi's+sarcoma.">Identification of herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-associated Kaposi's sarcoma.</a> Science. 266, 1865-1869 (1994).</li><li>Cesarman, E., Chang, Y., Moore, P., Said, J. W., Knowles, D. M., M, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus-like+DNA+sequences+in+AIDS-related+body-cavity-based+lymphomas.">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-related body-cavity-based lymphomas.</a> N Engl J Med. 18, 1186-1191 (1995).</li><li>Cesarman, E., Knowles, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus:+a+lymphotropic+human+herpesvirus+associated+with+Kaposi's+sarcoma,+primary+effusion+lymphoma,+and+multicentric+Castleman's+disease.">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus: a lymphotropic human herpesvirus associated with Kaposi's sarcoma, primary effusion lymphoma, and multicentric Castleman's disease.</a> Semin Diagn Pathol. 14, 54-66 (1997).</li><li>Chiou, C. J., Poole, L. J., Kim, P. S., Ciufo, D. M., Cannon, J. S., ap Rhys, C. M., Alcendor, D. J., Zong, J. C., Ambinder, R. F., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+gene+expression+and+a+transactivation+function+exhibited+by+the+vGCR+(ORF74)+chemokine+receptor+protein+of+Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus.">Patterns of gene expression and a transactivation function exhibited by the vGCR (ORF74) chemokine receptor protein of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus.</a> J Virol. 76, 3421-3439 (2002).</li><li>Staskus, K. A., Zhong, W., Gebhard, K., Herndier, B., Wang, H., Renne, R., Beneke, J., Pudney, J., Anderson, D. J., Ganem, D., Haase, A. T., T, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus+gene+expression+in+endothelial+(spindle)+tumor+cells.">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus gene expression in endothelial (spindle) tumor cells.</a> J Virol. 71, 715-719 (1997).</li><li>Alcendor, D. J., Zhu, W. Q., Desai, P., Vigil, H. E., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KSHV+downregulation+of+galectin-3+in+kaposi's+sarcoma.">KSHV downregulation of galectin-3 in kaposi's sarcoma.</a> Glycobiology. , (2009).</li><li>Ciufo, D. M., Cannon, J. S., Poole, L. J., Wu, F. Y., Murray, P., Ambinder, R. F., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spindle+cell+conversion+by+Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus:+formation+of+colonies+and+plaques+with+mixed+lytic+and+latent+gene+expression+in+infected+primary+dermal+microvascular+endothelial+cell+cultures.">Spindle cell conversion by Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus: formation of colonies and plaques with mixed lytic and latent gene expression in infected primary dermal microvascular endothelial cell cultures.</a> J Virol. 75, 5614-5626 (2001).</li><li>Long, E., Ilie, M., Hofman, V., Havet, K., Selva, E., Butori, C., Lacour, J. P., Nelson, A. M., Cathomas, G., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LANA-1,+Bcl-2,+Mcl-1+and+HIF-1alpha+protein+expression+in+HIV-associated+Kaposi+sarcoma.">LANA-1, Bcl-2, Mcl-1 and HIF-1alpha protein expression in HIV-associated Kaposi sarcoma.</a> Virchows Arch. 2, 159-170 (2009).</li></ol>

שיטות השתמשו בדוח זה יכול להתבצע במגוון רחב של הגדרות מעבדה. הם דורשים ציוד מיוחד או גישה למתקני הגרעין. אמצעי זהירות נאות יש לנקוט כאשר עושים ניסויים מעורבים גורמי מחלה ויראלית מדבקת כמו KSHV אשר עשויה לדרוש את השימוש ברמה biosaftey 3 (BSL-3) המתקנים. רכישות רקמות חייב להיות מ?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>RPMI 1640</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>05-0001DJ</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TPA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P1585</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS pH 7.4</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10010-023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium butyrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>19364 (FLUKA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EBM-2 media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>CC-3156</td>
<td>+ bullet kits supplement </td>
</tr>
<tr>
<td>DMVEC cells (HMVEC)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>CC2543</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal calf serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30066.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chamber slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene</td>
<td>154461</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KSHV LANA Mab</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Labs</td>
<td>VP-H913</td>
<td>1:50 dilution/IFA</td>
</tr>
<tr>
<td>Galectin-3 goat pAb</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&D Systems</td>
<td>AF1154</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Donkey-anti-goat FITC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson ImmunoRessearch</td>
<td>705-095-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Donkey-anti-goat Rho</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson ImmunoRessearch</td>
<td>705-295-003</td>
<td>1:100 dilution/IFA</td>
</tr>
<tr>
<td>Mounting media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Labs</td>
<td>H 1500</td>
<td>Vectashield with DAPI</td>
</tr>
<tr>
<td>BCA Protein Assay Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pierce</td>
<td>23235</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nitrocellulose </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>161-0112</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Donkey-anti-goat-conj. </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Santa Cruz</td>
<td>SC 2020</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Western substrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pierce</td>
<td>34075</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotin-rabbit-anti goat</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO</td>
<td>305-065-045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>AP-Strepavidin conj.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO</td>
<td>K 0492 (kit)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNase DNase Free Set</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>79254</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MJ Mini Cycler</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>PTC-1148C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bio-Photometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>952000006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RC 6 Plus Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sorvall</td>
<td>46910</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coulter Optima L-90K Ultracentrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>392052</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MYiQ iCycler Real Time PCR Detection System</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>170-9770</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TE 2000S Fluorescent microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NIKON</td>
<td>TE2000S</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2100 Bioanalyzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Agilent</td>
<td>G2938C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Eclipse E 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NIKON</td>
<td>E 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sorvall Legend RT Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo</td>
<td>75004377</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

identifying dysregulated genes induced by kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (kshv)

נכון לעכשיו KS הוא השולט ביותר HIV / איידס ממאירות הקשורות בדרום אפריקה, ולכן את העולם. 1,2 הוא מאופיין כגידול angioproliferative לתאי אנדותל של כלי הדם ומייצר נדיר מחלות B תא lymphoproliferative בצורה של לימפומה השתפכות pleural (פל) וכמה צורות של המחלה multicentric של קסלמן. 3-5 רק 1-5% של תאים KS נגעים תומכים באופן פעיל שכפול ממס של קפוסי סרקומה הקשורים של וירוס ההרפס (KSHV), סוכן האטיולוגית הקשורים KS, וברור כי גורמים הסלולר חייב אינטראקציה עם גורמים ויראליים בתהליך של oncogenesis התקדמות הגידול. 6,7 זיהוי מארח גורם רומן הגורמים אשר תורמים KS הפתולוגיה חיונית לפיתוח סמנים פרוגנוסטיים להתקדמות גרורות הגידול, כמו גם לפיתוח הרפוי הרומן לטיפול KS . 8 הפרטים הווידאו המלווה את השיטות בהם אנו משתמשים כדי לזהות את התא המארח הגן ביטוי בתוכניות להשתנות עורי לתאי אנדותל כלי הדם (DMVEC) לאחר ההדבקה KSHV ועל רקמת הגידול KS. 9 לאחר גנים dysregulated מזוהים על ידי ניתוח microarray, שינויים בביטוי החלבונים הם אושר על ידי immunoblot ו immunofluorescence שכותרתו כפול. שינויים בביטוי של גנים תעתיק dysregulated הם אישרו במבחנה על ידי כמותי תגובה בזמן אמת שרשרת פולימרז (qRT-PCR). אימות של הממצאים במבחנה באמצעות ארכיוני KS רקמת הגידול מתבצע גם על ידי immunochemistry שכותרתו כפולה microarrays רקמות. 8,10 הגישה שלנו זיהוי גנים dysregulated ב microenvironment רקמת הגידול KS יאפשר פיתוח של במבחנה ולאחר מכן במערכות מודל עבור vivo גילוי והערכה של פוטנציאל טיפולית חדשנית לטיפול KS.

Watch this Scientific Journal Video about Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus KSHV at JoVE.com

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus KSHV

תא גורמים מארח לשחק תפקיד קריטי בהקמת ותחזוקה של סרקומה של קפוסי (KS). אנו המתאר שיטות לזיהוי התא המארח גורמים להשתנות KSHV תאים הנגועים DMVEC, וכן רקמת הגידול KS. גנים נייד שינו ידי וירוס תשמש יעד פוטנציאלי (ות) עבור הרפוי הרומן.

זיהוי גנים Dysregulated מושרה על ידי וירוס ההרפס הקשורים סרקומה של קפוסי (KSHV)

Currently KS is the most predominant HIV/AIDS related malignancy in Southern Africa and hence the world.1,2 It is characterized as an angioproliferative ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus (KSHV)

Transfection and Mutagenesis of Target Genes in Mosquito Cells by Locked Nucleic Acid-modified Oligonucleotides

Transfection ו mutagenesis של גני מטרה של תאים על ידי יתוש נעול חומצה שונה oligonucleotides גרעין

Plasmodium parasites, the causative agent of malaria, are transmitted through the bites of infected Anopheles mosquitoes resulting in over 250 million new ...

An Allelotyping PCR for Identifying Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, and Typhimurium

An Allelotyping PCR for Identifying Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, and Typhimurium

Allelotyping PCR לזיהוי סלמונלה enterica Serovars enteritidis, הדר, היידלברג, ו Typhimurium

Current commercial PCRs tests for identifying Salmonella target genes unique to this genus.  However, there are two species, six subspecies, and over ...

Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus

אינטראקצית מארח וירוס ביתור בשכפול של וירוס ההרפס ממוסס דגם

In response to viral infection, a host develops various defensive responses, such as activating innate immune signaling pathways that lead to antiviral ...

Identifying DNA Mutations in Purified Hematopoietic Stem/Progenitor Cells

זיהוי מוטציות DNA בתאי גזע / אב המטוהר Hematopoietic

In recent years, it has become apparent that genomic instability is tightly related to many developmental disorders, cancers, and aging. Given that stem ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

באמצעות RNA-התערבות לחקר התגובה החיסונית המולדת בהמקרופאגים עכבר

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Rapid and Robust Analysis of Cellular and Molecular Polarization Induced by Chemokine Signaling

ניתוח מהיר וחזק של תאי ומולקולרי קיטוב המושרה על ידי chemokine איתות

Cells respond to chemokine stimulation by losing their round shape in a process called polarization, and by altering the subcellular localization of many ...

Development and Validation of a Quantitative PCR Method for Equid Herpesvirus-2 Diagnostics in Respiratory Fluids

פיתוח ותיקוף של שיטת ה- PCR כמותי עבור Equid ההרפס-2 אבחון בנוזלי הנשימה

The protocol describes a quantitative RT-PCR method for the detection and quantification of EHV-2 in equine respiratory fluids according to the NF U47-600 ...

Rapid Quantification of Mitogen-induced Blastogenesis in T Lymphocytes for Identifying Immunomodulatory Drugs

כימות מהיר של Blastogenesis mitogen-Induced T לימפוציטים לזיהוי סמים המערכת החיסונית

Lymphocyte proliferation in response to antigenic or mitogenic stimulation is a readily quantifiable phenomenon useful for testing immunomodulatory (i.e., ...

A Method to Assess Fc-mediated Effector Functions Induced by Influenza Hemagglutinin Specific Antibodies

שיטה להערכת פונקציות אפקטור בתיווך Fc המושרה על ידי שפעת Hemagglutinin נוגדנים ספציפיים

Antibodies play a crucial role in coupling the innate and adaptive immune responses against viral pathogens through their antigen binding domains and ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

פקקת ורידים עמוקה שנגזרות Stasis בעכברים המנוטרת על-ידי בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...