Name: identifying dysregulated genes induced by kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (kshv)
Uploaded: 2010-09-14T17:00:00
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我々は彼のアドバイスとこの原稿の見直しのためにジェームズEKヒルドレス、メハリー医科大学を、感謝。我々はまた、原稿の編集にダイアナマーバーに感謝。エイズの健康格差研究センター、NIHの助成金5U54 RR019192 - 05;臨床研究のためのメハリーセンター、NIHグラントP20RR011792、この作品は、エイズ研究のためのメハリーヴァンダービルトセンター（NIHの助成金P30 AI054999 - 05）によってサポートされ、NIHで助成金P01 CA113239。 DJAは部分的にエイズ研究のためのヴァンダービルト - メハリーセンター（CFAR）と臨床研究​​のためのメハリーセンター（CRC）からのパイロットの補助金によって賄われていた。

1。 DMVECの栽培と感染をKSVH <ol><li>もともと人間の体の空洞に基づくリンパ腫から分離されたBCBL - 1細胞​​株は、、完全RPMI 1640培地（Gibco社、グランドアイランド、NY）中で培養する。 BCBL - 1細胞​​を、液体窒素から削除ドライアイスで輸送し、すぐに37℃で1分間のために解凍されている℃に密度1 × 10 4細胞/ mLの50μLの1 BCBL細胞のアリコートを10％ウシ胎児血清、1 ×ペニシリン/ス?...

<ol>
	<li>Sitas, F., Newton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma+in+South+Africa.">Kaposi's sarcoma in South Africa.</a> J Natl Cancer Inst Monogr. 28, 1-4 (2001).</li><li>Moore, P. S., Chang, Y., Knipe, D. M., Howley, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma+associated+herpesvirus.">Kaposi's sarcoma associated herpesvirus.</a> Field's Virology. , 2803-2833 (2002).</li><li>Chang, Y., Cesarman, E., Pessin, M. S., Lee, F., Culpepper, J., Knowles, D. M., Moore, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+herpesvirus-like+DNA+sequences+in+AIDS-associated+Kaposi's+sarcoma.">Identification of herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-associated Kaposi's sarcoma.</a> Science. 266, 1865-1869 (1994).</li><li>Cesarman, E., Chang, Y., Moore, P., Said, J. W., Knowles, D. M., M, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus-like+DNA+sequences+in+AIDS-related+body-cavity-based+lymphomas.">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-related body-cavity-based lymphomas.</a> N Engl J Med. 18, 1186-1191 (1995).</li><li>Cesarman, E., Knowles, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus:+a+lymphotropic+human+herpesvirus+associated+with+Kaposi's+sarcoma,+primary+effusion+lymphoma,+and+multicentric+Castleman's+disease.">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus: a lymphotropic human herpesvirus associated with Kaposi's sarcoma, primary effusion lymphoma, and multicentric Castleman's disease.</a> Semin Diagn Pathol. 14, 54-66 (1997).</li><li>Chiou, C. J., Poole, L. J., Kim, P. S., Ciufo, D. M., Cannon, J. S., ap Rhys, C. M., Alcendor, D. J., Zong, J. C., Ambinder, R. F., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+gene+expression+and+a+transactivation+function+exhibited+by+the+vGCR+(ORF74)+chemokine+receptor+protein+of+Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus.">Patterns of gene expression and a transactivation function exhibited by the vGCR (ORF74) chemokine receptor protein of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus.</a> J Virol. 76, 3421-3439 (2002).</li><li>Staskus, K. A., Zhong, W., Gebhard, K., Herndier, B., Wang, H., Renne, R., Beneke, J., Pudney, J., Anderson, D. J., Ganem, D., Haase, A. T., T, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus+gene+expression+in+endothelial+(spindle)+tumor+cells.">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus gene expression in endothelial (spindle) tumor cells.</a> J Virol. 71, 715-719 (1997).</li><li>Alcendor, D. J., Zhu, W. Q., Desai, P., Vigil, H. E., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KSHV+downregulation+of+galectin-3+in+kaposi's+sarcoma.">KSHV downregulation of galectin-3 in kaposi's sarcoma.</a> Glycobiology. , (2009).</li><li>Ciufo, D. M., Cannon, J. S., Poole, L. J., Wu, F. Y., Murray, P., Ambinder, R. F., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spindle+cell+conversion+by+Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus:+formation+of+colonies+and+plaques+with+mixed+lytic+and+latent+gene+expression+in+infected+primary+dermal+microvascular+endothelial+cell+cultures.">Spindle cell conversion by Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus: formation of colonies and plaques with mixed lytic and latent gene expression in infected primary dermal microvascular endothelial cell cultures.</a> J Virol. 75, 5614-5626 (2001).</li><li>Long, E., Ilie, M., Hofman, V., Havet, K., Selva, E., Butori, C., Lacour, J. P., Nelson, A. M., Cathomas, G., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LANA-1,+Bcl-2,+Mcl-1+and+HIF-1alpha+protein+expression+in+HIV-associated+Kaposi+sarcoma.">LANA-1, Bcl-2, Mcl-1 and HIF-1alpha protein expression in HIV-associated Kaposi sarcoma.</a> Virchows Arch. 2, 159-170 (2009).</li></ol>

このレポートで使用されている手法は、実験室のさまざまな設定で行うことができます。彼らはいくつかの特別な機器やコア施設へのアクセスが必要です。 biosafteyレベル3（BSL - 3）施設の使用が必要な場合がありますKSHVのような感染性ウイルス性病原体が関与する実験を行うときに適切な予防措置が取られている必要があります。組織の買収は、適切な制度審査委員会（IRBの）によって承認...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>RPMI 1640</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>05-0001DJ</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TPA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P1585</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS pH 7.4</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10010-023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium butyrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>19364 (FLUKA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EBM-2 media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>CC-3156</td>
<td>+ bullet kits supplement </td>
</tr>
<tr>
<td>DMVEC cells (HMVEC)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>CC2543</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal calf serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30066.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chamber slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene</td>
<td>154461</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KSHV LANA Mab</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Labs</td>
<td>VP-H913</td>
<td>1:50 dilution/IFA</td>
</tr>
<tr>
<td>Galectin-3 goat pAb</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&D Systems</td>
<td>AF1154</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Donkey-anti-goat FITC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson ImmunoRessearch</td>
<td>705-095-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Donkey-anti-goat Rho</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson ImmunoRessearch</td>
<td>705-295-003</td>
<td>1:100 dilution/IFA</td>
</tr>
<tr>
<td>Mounting media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Labs</td>
<td>H 1500</td>
<td>Vectashield with DAPI</td>
</tr>
<tr>
<td>BCA Protein Assay Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pierce</td>
<td>23235</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nitrocellulose </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>161-0112</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Donkey-anti-goat-conj. </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Santa Cruz</td>
<td>SC 2020</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Western substrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pierce</td>
<td>34075</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotin-rabbit-anti goat</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO</td>
<td>305-065-045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>AP-Strepavidin conj.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO</td>
<td>K 0492 (kit)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNase DNase Free Set</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>79254</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MJ Mini Cycler</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>PTC-1148C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bio-Photometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>952000006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RC 6 Plus Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sorvall</td>
<td>46910</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coulter Optima L-90K Ultracentrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>392052</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MYiQ iCycler Real Time PCR Detection System</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>170-9770</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TE 2000S Fluorescent microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NIKON</td>
<td>TE2000S</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2100 Bioanalyzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Agilent</td>
<td>G2938C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Eclipse E 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NIKON</td>
<td>E 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sorvall Legend RT Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo</td>
<td>75004377</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

identifying dysregulated genes induced by kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (kshv)

現在、KSは、南部アフリカで最も優勢なHIV / AIDS関連悪性腫瘍であり、それゆえ世界。1,2は、それが血管内皮細胞のangioproliferative腫瘍として特徴付けられると胸水のリンパ腫の形態では珍しいB細胞リンパ増殖性疾患（PEL）を生成と多中心性キャッスルマン病のいくつかの形態が。KSの細胞の 3〜5 1〜5％が積極的にカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（KSHV）、KSに関連付けられている病原体の溶菌複製をサポートしている病変、それは細胞因子が必要があることは明らかです。発癌と腫瘍の進行の過程におけるウイルス因子と相互作用。KS病理学に寄与する6,7の識別小説ホスト因子の決定要因は、KSの治療のための新たな治療薬を開発するなど、同様に腫瘍の進行や転移の予後マーカーを開発するために不可欠です。 dysregulated遺伝子をマイクロアレイ解析により識別されれば8付属のビデオの詳細我々はKSHV感染後、KS腫瘍組織における皮膚微小血管内皮細胞（DMVEC）に変更された宿主細胞の遺伝子発現プログラムを識別するために使用するメソッドは9、タンパク質発現の変化はイムノブロットおよびデュアルラベル付け免疫蛍光法によって確認した。調節不全の遺伝子の転写発現の変化を定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（定量RT - PCR） により in vitro で確認されています。アーカイブKS腫瘍組織を用いた in vitroの結果での検証は、デュアル標識した免疫化学と組織マイクロアレイによって実行されます。8,10我々のアプローチは、in vitroで 、その後、in vivoモデル系での開発ができるようになりますKS腫瘍組織の微小環境での調節不全遺伝子を特定するKSの治療のための潜在的な新規治療薬の発見と評価。

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Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus KSHV

宿主細胞因子がカポジ肉腫（KS）の確立と維持において重要な役割を果たす。我々は、KSHV感染DMVEC細胞に、とKS腫瘍組織に改変宿主細胞因子を特定する方法の概要を示します。ウイルスによって変更さ細胞の遺伝子は、新規な治療のための潜在的なターゲット（複数可）として機能します。

カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（KSHV）によって誘発される調節不全遺伝子を特定

Currently KS is the most predominant HIV/AIDS related malignancy in Southern Africa and hence the world.1,2 It is characterized as an angioproliferative ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus (KSHV)

Transfection and Mutagenesis of Target Genes in Mosquito Cells by Locked Nucleic Acid-modified Oligonucleotides

ロックされた核酸修飾オリゴヌクレオチドによるトランスフェクションおよび蚊細胞における標的遺伝子の変異

Plasmodium parasites, the causative agent of malaria, are transmitted through the bites of infected Anopheles mosquitoes resulting in over 250 million new ...

An Allelotyping PCR for Identifying Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, and Typhimurium

An Allelotyping PCR for Identifying Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, and Typhimurium

識別のためのアレロタイプ化PCRサルモネラ血清型Enteritidisは、ハダル、ハイデルベルク、及びネズミチフス菌

Current commercial PCRs tests for identifying Salmonella target genes unique to this genus.  However, there are two species, six subspecies, and over ...

Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus

モデルヘルペスウイルスの溶菌レプリケーションにおける解剖ホストウイルス作用

In response to viral infection, a host develops various defensive responses, such as activating innate immune signaling pathways that lead to antiviral ...

Identifying DNA Mutations in Purified Hematopoietic Stem/Progenitor Cells

精製造血幹細胞/前駆細胞のDNAの変異を特定する

In recent years, it has become apparent that genomic instability is tightly related to many developmental disorders, cancers, and aging. Given that stem ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

マウスマクロファージにおける先天性免疫応答を調査するために、RNA干渉を使用

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Rapid and Robust Analysis of Cellular and Molecular Polarization Induced by Chemokine Signaling

ケモカインシグナリングにより誘導される細胞と分子分極の迅速かつ堅牢な分析

Cells respond to chemokine stimulation by losing their round shape in a process called polarization, and by altering the subcellular localization of many ...

Development and Validation of a Quantitative PCR Method for Equid Herpesvirus-2 Diagnostics in Respiratory Fluids

呼吸器流体におけるウマヘルペスウイルス-2の診断のための定量的PCR法の開発と検証

The protocol describes a quantitative RT-PCR method for the detection and quantification of EHV-2 in equine respiratory fluids according to the NF U47-600 ...

Rapid Quantification of Mitogen-induced Blastogenesis in T Lymphocytes for Identifying Immunomodulatory Drugs

免疫調節薬を同定するためのTリンパ球におけるマイトジェン誘導性の幼若の迅速定量

Lymphocyte proliferation in response to antigenic or mitogenic stimulation is a readily quantifiable phenomenon useful for testing immunomodulatory (i.e., ...

A Method to Assess Fc-mediated Effector Functions Induced by Influenza Hemagglutinin Specific Antibodies

インフルエンザ血球凝集素抗体による Fc を介したエフェクター機能を評価する方法

Antibodies play a crucial role in coupling the innate and adaptive immune responses against viral pathogens through their antigen binding domains and ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

高周波超音波による監視マウスのうっ滞による深部静脈血栓症

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...