Name: identifying dysregulated genes induced by kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (kshv)
Uploaded: 2010-09-14T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus KSHV at JoVE.com

Мы благодарим Джеймса К. Хилдрет, Мехарри медицинский колледж, за его советы и обзор этой рукописи. Мы также благодарим Диана Marver для редактирования рукописи. Эта работа была поддержана Мехарри Вандербильта Центр исследований СПИДа (NIH грант P30 AI054999-05); Центра исследований СПИДа неравенствам в отношении здоровья, NIH грант 5U54 RR019192-05; Мехарри Центра клинических исследований, грант NIH P20RR011792, а к NIH грант P01 CA113239. DJA частично финансировалась пилот гранты от Вандербильт-Мехарри Центра исследований СПИДа (CFAR) и Мехарри Центра клинических исследований (КПР).

1. KSVH Выращивание и Заражение DMVEC <ol><li> BCBL-1 клеточная линия, первоначально выделенные из человеческого тела полости основаны лимфома, культивируют в полной RPMI 1640 средств массовой информации (Gibco, Grand Island, NY). BCBL-1 клетки удаляются из жидкого азота, перевозимых на сухой лед, и быстро талых в ?...

<ol>
	<li>Sitas, F., Newton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma+in+South+Africa.">Kaposi's sarcoma in South Africa.</a> J Natl Cancer Inst Monogr. 28, 1-4 (2001).</li><li>Moore, P. S., Chang, Y., Knipe, D. M., Howley, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma+associated+herpesvirus.">Kaposi's sarcoma associated herpesvirus.</a> Field's Virology. , 2803-2833 (2002).</li><li>Chang, Y., Cesarman, E., Pessin, M. S., Lee, F., Culpepper, J., Knowles, D. M., Moore, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+herpesvirus-like+DNA+sequences+in+AIDS-associated+Kaposi's+sarcoma.">Identification of herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-associated Kaposi's sarcoma.</a> Science. 266, 1865-1869 (1994).</li><li>Cesarman, E., Chang, Y., Moore, P., Said, J. W., Knowles, D. M., M, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus-like+DNA+sequences+in+AIDS-related+body-cavity-based+lymphomas.">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-related body-cavity-based lymphomas.</a> N Engl J Med. 18, 1186-1191 (1995).</li><li>Cesarman, E., Knowles, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus:+a+lymphotropic+human+herpesvirus+associated+with+Kaposi's+sarcoma,+primary+effusion+lymphoma,+and+multicentric+Castleman's+disease.">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus: a lymphotropic human herpesvirus associated with Kaposi's sarcoma, primary effusion lymphoma, and multicentric Castleman's disease.</a> Semin Diagn Pathol. 14, 54-66 (1997).</li><li>Chiou, C. J., Poole, L. J., Kim, P. S., Ciufo, D. M., Cannon, J. S., ap Rhys, C. M., Alcendor, D. J., Zong, J. C., Ambinder, R. F., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+gene+expression+and+a+transactivation+function+exhibited+by+the+vGCR+(ORF74)+chemokine+receptor+protein+of+Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus.">Patterns of gene expression and a transactivation function exhibited by the vGCR (ORF74) chemokine receptor protein of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus.</a> J Virol. 76, 3421-3439 (2002).</li><li>Staskus, K. A., Zhong, W., Gebhard, K., Herndier, B., Wang, H., Renne, R., Beneke, J., Pudney, J., Anderson, D. J., Ganem, D., Haase, A. T., T, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus+gene+expression+in+endothelial+(spindle)+tumor+cells.">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus gene expression in endothelial (spindle) tumor cells.</a> J Virol. 71, 715-719 (1997).</li><li>Alcendor, D. J., Zhu, W. Q., Desai, P., Vigil, H. E., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KSHV+downregulation+of+galectin-3+in+kaposi's+sarcoma.">KSHV downregulation of galectin-3 in kaposi's sarcoma.</a> Glycobiology. , (2009).</li><li>Ciufo, D. M., Cannon, J. S., Poole, L. J., Wu, F. Y., Murray, P., Ambinder, R. F., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spindle+cell+conversion+by+Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus:+formation+of+colonies+and+plaques+with+mixed+lytic+and+latent+gene+expression+in+infected+primary+dermal+microvascular+endothelial+cell+cultures.">Spindle cell conversion by Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus: formation of colonies and plaques with mixed lytic and latent gene expression in infected primary dermal microvascular endothelial cell cultures.</a> J Virol. 75, 5614-5626 (2001).</li><li>Long, E., Ilie, M., Hofman, V., Havet, K., Selva, E., Butori, C., Lacour, J. P., Nelson, A. M., Cathomas, G., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LANA-1,+Bcl-2,+Mcl-1+and+HIF-1alpha+protein+expression+in+HIV-associated+Kaposi+sarcoma.">LANA-1, Bcl-2, Mcl-1 and HIF-1alpha protein expression in HIV-associated Kaposi sarcoma.</a> Virchows Arch. 2, 159-170 (2009).</li></ol>

Методологий, используемых в этом отчете могут быть выполнены в различных лабораторных условиях. Они требуют специального оборудования или доступ к основным объектов. Надлежащие меры предосторожности должны быть приняты при выполнении экспериментов инфекционных вирусных патогенов, ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>RPMI 1640</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>05-0001DJ</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TPA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P1585</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS pH 7.4</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10010-023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium butyrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>19364 (FLUKA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EBM-2 media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>CC-3156</td>
<td>+ bullet kits supplement </td>
</tr>
<tr>
<td>DMVEC cells (HMVEC)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>CC2543</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal calf serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30066.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chamber slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene</td>
<td>154461</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KSHV LANA Mab</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Labs</td>
<td>VP-H913</td>
<td>1:50 dilution/IFA</td>
</tr>
<tr>
<td>Galectin-3 goat pAb</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&D Systems</td>
<td>AF1154</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Donkey-anti-goat FITC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson ImmunoRessearch</td>
<td>705-095-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Donkey-anti-goat Rho</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson ImmunoRessearch</td>
<td>705-295-003</td>
<td>1:100 dilution/IFA</td>
</tr>
<tr>
<td>Mounting media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Labs</td>
<td>H 1500</td>
<td>Vectashield with DAPI</td>
</tr>
<tr>
<td>BCA Protein Assay Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pierce</td>
<td>23235</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nitrocellulose </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>161-0112</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Donkey-anti-goat-conj. </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Santa Cruz</td>
<td>SC 2020</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Western substrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pierce</td>
<td>34075</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotin-rabbit-anti goat</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO</td>
<td>305-065-045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>AP-Strepavidin conj.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO</td>
<td>K 0492 (kit)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNase DNase Free Set</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>79254</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MJ Mini Cycler</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>PTC-1148C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bio-Photometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>952000006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RC 6 Plus Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sorvall</td>
<td>46910</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coulter Optima L-90K Ultracentrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>392052</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MYiQ iCycler Real Time PCR Detection System</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>170-9770</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TE 2000S Fluorescent microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NIKON</td>
<td>TE2000S</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2100 Bioanalyzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Agilent</td>
<td>G2938C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Eclipse E 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NIKON</td>
<td>E 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sorvall Legend RT Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo</td>
<td>75004377</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

identifying dysregulated genes induced by kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (kshv)

В настоящее время КС является наиболее преобладающим вопросам ВИЧ / СПИДа злокачественности в Южной Африке и, следовательно, мира. 1,2 Он характеризуется как angioproliferative опухоли сосудистых эндотелиальных клеток и производит редкие ячейки B лимфопролиферативных заболеваний в виде плеврального выпота лимфомы (PEL) и некоторые формы болезни многоцентровое Кастельмана. 3-5 Только 1-5% клеток в KS поражения активно поддерживать литической репликации саркомой Капоши связанные герпеса (KSHV), этиологическим агентом связанные с КС, и ясно, что клеточные факторы должны взаимодействовать с вирусными факторами в процессе онкогенеза и опухолевой прогрессии. 6,7 Выявление новых хост-фактора детерминанты, которые способствуют KS патологии имеет важное значение для разработки прогностических маркеров для прогрессирования опухоли и метастазов, а также для разработки новых терапевтических средств для лечения KS 8. сопровождающих детали видео методы мы используем, чтобы идентифицировать клетки-хозяина экспрессии генов программ изменены в кожных капилляров эндотелиальные клетки (DMVEC) после заражения KSHV и в опухолевой ткани KS. 9 После дизрегуляции генов идентифицированы с помощью анализа микрочипов, изменения в экспрессии белка являются подтверждается иммуноблота и двойной помечены иммунофлюоресценции. Изменения в экспрессии транскрипционных генов дизрегуляции подтверждены в пробирке количественными реальном времени полимеразной цепной реакции (QRT-PCR). Проверка в пробирке результаты, используя архивные опухоли KS ткани, проводится методом двойной помечены иммунохимии и тканей микрочипов. 8,10 Наш подход к определению дизрегуляции генов в ткани опухоли микроокружения KS позволит развития в пробирке, а затем в естественных условиях модельных систем для обнаружение и оценка потенциальных терапевтических роман для лечения КС.

Watch this Scientific Journal Video about Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus KSHV at JoVE.com

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus KSHV

Факторов клетки-хозяина играет важную роль в установлении и поддержании саркома Капоши (СК). Мы выделяем методы выявления факторов клетки-хозяина изменены KSHV-инфицированных DMVEC клеток, и в ткани опухоли KS. Сотовая гены изменены вирус будет служить потенциальной мишенью (ы) для терапии романа.

Определение дизрегуляции Гены индуцированные саркомы связанных герпеса Капоши (KSHV)

Currently KS is the most predominant HIV/AIDS related malignancy in Southern Africa and hence the world.1,2 It is characterized as an angioproliferative ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus (KSHV)

Transfection and Mutagenesis of Target Genes in Mosquito Cells by Locked Nucleic Acid-modified Oligonucleotides

Трансфекция и мутагенеза генов-мишеней в Mosquito ячейки путем Закрытые нуклеиновых кислот модифицированных олигонуклеотидов

Plasmodium parasites, the causative agent of malaria, are transmitted through the bites of infected Anopheles mosquitoes resulting in over 250 million new ...

An Allelotyping PCR for Identifying Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, and Typhimurium

An Allelotyping PCR for Identifying Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, and Typhimurium

Allelotyping ПЦР для выявления Salmonella enterica Сероваров Enteritidis, Хадар, Гейдельберг, и Typhimurium

Current commercial PCRs tests for identifying Salmonella target genes unique to this genus.  However, there are two species, six subspecies, and over ...

Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus

Пройдя Host-вирус Взаимодействие в Литические репликации Модель Herpesvirus

In response to viral infection, a host develops various defensive responses, such as activating innate immune signaling pathways that lead to antiviral ...

Identifying DNA Mutations in Purified Hematopoietic Stem/Progenitor Cells

Выявление ДНК мутации в Очищенная гемопоэтических стволовых / клеток-предшественников

In recent years, it has become apparent that genomic instability is tightly related to many developmental disorders, cancers, and aging. Given that stem ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

Использование РНК-интерференции по расследованию врожденного иммунного ответа у мышей макрофагов

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Rapid and Robust Analysis of Cellular and Molecular Polarization Induced by Chemokine Signaling

Быстрая и надежная Анализ клеточной и молекулярной поляризации, индуцированной хемокинового сигнализации

Cells respond to chemokine stimulation by losing their round shape in a process called polarization, and by altering the subcellular localization of many ...

Development and Validation of a Quantitative PCR Method for Equid Herpesvirus-2 Diagnostics in Respiratory Fluids

Разработка и проверка количественной ПЦР метод для Equid герпесвирусных-2 Диагностика в Респираторные жидкостям

The protocol describes a quantitative RT-PCR method for the detection and quantification of EHV-2 in equine respiratory fluids according to the NF U47-600 ...

Rapid Quantification of Mitogen-induced Blastogenesis in T Lymphocytes for Identifying Immunomodulatory Drugs

Быстрое Количественное митоген-индуцированной бластогенеза в Т-лимфоцитах для идентификации иммуномодулирующих препаратов

Lymphocyte proliferation in response to antigenic or mitogenic stimulation is a readily quantifiable phenomenon useful for testing immunomodulatory (i.e., ...

A Method to Assess Fc-mediated Effector Functions Induced by Influenza Hemagglutinin Specific Antibodies

Метод оценки Fc опосредованной эффекторных функций, вызванных гриппа гемагглютинин специфические антитела

Antibodies play a crucial role in coupling the innate and adaptive immune responses against viral pathogens through their antigen binding domains and ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Тромбоз глубоких вен, индуцированных застой в мышей, под контролем УЗИ высокой частоты

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...