Name: identifying dysregulated genes induced by kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (kshv)
Uploaded: 2010-09-14T17:00:00
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Damos las gracias a James EK Hildreth, Meharry Medical College, por su asesoramiento y revisión de este manuscrito. También queremos agradecer a Diana Marver para la edición del manuscrito. Este trabajo fue apoyado por el Centro de Meharry Vanderbilt para la Investigación del SIDA (NIH P30 AI054999-05), el Centro de Salud SIDA disparidades de Investigación, NIH RR019192 5U54-05, el Centro de Meharry de Investigación Clínica, de Subvenciones del NIH P20RR011792, y por el NIH conceder P01 CA113239. DJA fue parcialmente financiado por las subvenciones piloto del Centro Vanderbilt-Meharry for AIDS Research (CFAR) y el Centro para la Investigación Clínica Meharry (CRC).

1. KSVH cultivo y la infección de DMVEC <ol><li> La línea celular BCBL-1, originalmente aislado de un linfoma de cavidades corporales basados ​​en humanos, se cultiva en completo RPMI 1640 (Gibco, Grand Island, NY). BCBL-1 se extraen células del nitrógeno líquido, transportado en hielo seco, y rápidamente se descongela durante 1 minuto a 37 ° C. Una alícuota de 50 L de BCBL-1 en las células a una densidad de 1x10 4 células / ml a 500 ml de medio RPMI 1640 suplementado con 10% de suero fetal bo...

<ol>
	<li>Sitas, F., Newton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma+in+South+Africa.">Kaposi's sarcoma in South Africa.</a> J Natl Cancer Inst Monogr. 28, 1-4 (2001).</li><li>Moore, P. S., Chang, Y., Knipe, D. M., Howley, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma+associated+herpesvirus.">Kaposi's sarcoma associated herpesvirus.</a> Field's Virology. , 2803-2833 (2002).</li><li>Chang, Y., Cesarman, E., Pessin, M. S., Lee, F., Culpepper, J., Knowles, D. M., Moore, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+herpesvirus-like+DNA+sequences+in+AIDS-associated+Kaposi's+sarcoma.">Identification of herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-associated Kaposi's sarcoma.</a> Science. 266, 1865-1869 (1994).</li><li>Cesarman, E., Chang, Y., Moore, P., Said, J. W., Knowles, D. M., M, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus-like+DNA+sequences+in+AIDS-related+body-cavity-based+lymphomas.">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-related body-cavity-based lymphomas.</a> N Engl J Med. 18, 1186-1191 (1995).</li><li>Cesarman, E., Knowles, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus:+a+lymphotropic+human+herpesvirus+associated+with+Kaposi's+sarcoma,+primary+effusion+lymphoma,+and+multicentric+Castleman's+disease.">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus: a lymphotropic human herpesvirus associated with Kaposi's sarcoma, primary effusion lymphoma, and multicentric Castleman's disease.</a> Semin Diagn Pathol. 14, 54-66 (1997).</li><li>Chiou, C. J., Poole, L. J., Kim, P. S., Ciufo, D. M., Cannon, J. S., ap Rhys, C. M., Alcendor, D. J., Zong, J. C., Ambinder, R. F., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+gene+expression+and+a+transactivation+function+exhibited+by+the+vGCR+(ORF74)+chemokine+receptor+protein+of+Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus.">Patterns of gene expression and a transactivation function exhibited by the vGCR (ORF74) chemokine receptor protein of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus.</a> J Virol. 76, 3421-3439 (2002).</li><li>Staskus, K. A., Zhong, W., Gebhard, K., Herndier, B., Wang, H., Renne, R., Beneke, J., Pudney, J., Anderson, D. J., Ganem, D., Haase, A. T., T, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus+gene+expression+in+endothelial+(spindle)+tumor+cells.">Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus gene expression in endothelial (spindle) tumor cells.</a> J Virol. 71, 715-719 (1997).</li><li>Alcendor, D. J., Zhu, W. Q., Desai, P., Vigil, H. E., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KSHV+downregulation+of+galectin-3+in+kaposi's+sarcoma.">KSHV downregulation of galectin-3 in kaposi's sarcoma.</a> Glycobiology. , (2009).</li><li>Ciufo, D. M., Cannon, J. S., Poole, L. J., Wu, F. Y., Murray, P., Ambinder, R. F., Hayward, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spindle+cell+conversion+by+Kaposi's+sarcoma-associated+herpesvirus:+formation+of+colonies+and+plaques+with+mixed+lytic+and+latent+gene+expression+in+infected+primary+dermal+microvascular+endothelial+cell+cultures.">Spindle cell conversion by Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus: formation of colonies and plaques with mixed lytic and latent gene expression in infected primary dermal microvascular endothelial cell cultures.</a> J Virol. 75, 5614-5626 (2001).</li><li>Long, E., Ilie, M., Hofman, V., Havet, K., Selva, E., Butori, C., Lacour, J. P., Nelson, A. M., Cathomas, G., Hofman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LANA-1,+Bcl-2,+Mcl-1+and+HIF-1alpha+protein+expression+in+HIV-associated+Kaposi+sarcoma.">LANA-1, Bcl-2, Mcl-1 and HIF-1alpha protein expression in HIV-associated Kaposi sarcoma.</a> Virchows Arch. 2, 159-170 (2009).</li></ol>

Las metodologías utilizadas en este informe se puede realizar en una variedad de entornos de laboratorio. Que requieren algún equipo especial o acceso a instalaciones básicas. Las debidas precauciones se deben tomar al hacer experimentos con virus patógenos infecciosos como HVSK que puede requerir el uso de un nivel biosaftey 3 (BSL-3) instalaciones. Adquisiciones de los tejidos también debe ser aprobado por las juntas de revisión institucional adecuado (IRB). Estas metodologías en co...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>RPMI 1640</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>05-0001DJ</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TPA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P1585</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS pH 7.4</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10010-023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium butyrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>19364 (FLUKA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EBM-2 media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>CC-3156</td>
<td>+ bullet kits supplement </td>
</tr>
<tr>
<td>DMVEC cells (HMVEC)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lonza</td>
<td>CC2543</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal calf serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30066.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin/streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chamber slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene</td>
<td>154461</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KSHV LANA Mab</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Labs</td>
<td>VP-H913</td>
<td>1:50 dilution/IFA</td>
</tr>
<tr>
<td>Galectin-3 goat pAb</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&D Systems</td>
<td>AF1154</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Donkey-anti-goat FITC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson ImmunoRessearch</td>
<td>705-095-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Donkey-anti-goat Rho</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jackson ImmunoRessearch</td>
<td>705-295-003</td>
<td>1:100 dilution/IFA</td>
</tr>
<tr>
<td>Mounting media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Labs</td>
<td>H 1500</td>
<td>Vectashield with DAPI</td>
</tr>
<tr>
<td>BCA Protein Assay Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pierce</td>
<td>23235</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nitrocellulose </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>161-0112</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Donkey-anti-goat-conj. </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Santa Cruz</td>
<td>SC 2020</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Western substrate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pierce</td>
<td>34075</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotin-rabbit-anti goat</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO</td>
<td>305-065-045</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>AP-Strepavidin conj.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DAKO</td>
<td>K 0492 (kit)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNase DNase Free Set</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>79254</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MJ Mini Cycler</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>PTC-1148C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bio-Photometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>952000006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RC 6 Plus Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sorvall</td>
<td>46910</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coulter Optima L-90K Ultracentrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Beckman</td>
<td>392052</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MYiQ iCycler Real Time PCR Detection System</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>170-9770</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TE 2000S Fluorescent microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NIKON</td>
<td>TE2000S</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2100 Bioanalyzer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Agilent</td>
<td>G2938C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Eclipse E 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NIKON</td>
<td>E 200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sorvall Legend RT Centrifuge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo</td>
<td>75004377</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

identifying dysregulated genes induced by kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (kshv)

Actualmente KS es el más predominante del VIH / SIDA relacionados con tumores malignos en el sur de África y de ahí el mundo. 1,2 Se caracteriza por ser un tumor angioproliferative de las células endoteliales vasculares y produce enfermedades raras células B linfoproliferativos en forma de linfomas derrame pleural (PEL) y algunas formas de enfermedad de Castleman multicéntrica. 5.3 Sólo 1.5% de las células KS lesiones apoyar activamente la replicación lítica del sarcoma de Kaposi asociado al virus del herpes (HVSK), el agente etiológico asociado con sarcoma de Kaposi, y está claro que los factores celulares que interactuar con factores virales en el proceso de oncogénesis y la progresión del tumor 6,7. Identificación de la novela factor del huésped determinantes que contribuyen a la patología de KS es esencial para el desarrollo de marcadores de pronóstico para la progresión tumoral y la metástasis, así como para el desarrollo de nuevas terapias para el tratamiento del sarcoma de Kaposi 8. Los detalles del vídeo que acompaña a los métodos que utilizamos para identificar a la célula huésped programas de expresión de genes alterados en las células endoteliales microvasculares dérmicas (DMVEC) después de la infección HVSK y en el tejido tumoral KS. 9 Una vez que los genes desregulados son identificados por análisis de microarrays, los cambios en la expresión de la proteína se confirmada por inmunoblot y la inmunofluorescencia doble etiquetado. Cambios en la expresión transcripcional de genes desregulados se confirmó in vitro por cuantitativa en tiempo real de reacción en cadena de la polimerasa (QRT-PCR). La validación de los resultados in vitro usando tejidos de archivo tumor KS también se realiza por inmunohistoquímica doble etiquetado y de microarrays de tejidos 8,10. Nuestro enfoque para identificar los genes que están alteradas en el microambiente del tejido del tumor KS permitirá el desarrollo de la in vitro y, posteriormente, en los sistemas modelo in vivo para descubrimiento y evaluación de nuevos terapéuticos potenciales para el tratamiento del sarcoma de Kaposi.

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Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus KSHV

Factores de la célula huésped juegan un papel crítico en el establecimiento y mantenimiento de sarcoma de Kaposi (SK). Resumimos los métodos para identificar los factores de la célula huésped alterada en las células infectadas por HVSK DMVEC, y en el tejido tumoral KS. Genes celulares alteradas por el virus servirá como posible objetivo (s) de nuevas terapias.

La identificación de genes inducida por la desregulación de Sarcoma de Kaposi asociado al virus del herpes (HVSK)

Currently KS is the most predominant HIV/AIDS related malignancy in Southern Africa and hence the world.1,2 It is characterized as an angioproliferative ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Identifying Dysregulated Genes Induced by Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus (KSHV)

Transfection and Mutagenesis of Target Genes in Mosquito Cells by Locked Nucleic Acid-modified Oligonucleotides

Transfección y mutagénesis de los genes diana en células de mosquito por nucleico cerrado modificado ácido oligonucleótidos

Plasmodium parasites, the causative agent of malaria, are transmitted through the bites of infected Anopheles mosquitoes resulting in over 250 million new ...

Investigación

Inmunología e Infección

An Allelotyping PCR for Identifying Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, and Typhimurium

An Allelotyping PCR for Identifying Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, and Typhimurium

Una PCR para la identificación de Allelotyping Salmonella enterica Serotipos Enteritidis, Hadar, Heidelberg, y Typhimurium

Current commercial PCRs tests for identifying Salmonella target genes unique to this genus.  However, there are two species, six subspecies, and over ...

Dissecting Host-virus Interaction in Lytic Replication of a Model Herpesvirus

Disección de Host-virus Interacción en la replicación lítica de un Herpesvirus Modelo

In response to viral infection, a host develops various defensive responses, such as activating innate immune signaling pathways that lead to antiviral ...

Identifying DNA Mutations in Purified Hematopoietic Stem/Progenitor Cells

La identificación de mutaciones del ADN en Purificada hematopoyéticas células madre / progenitoras

In recent years, it has become apparent that genomic instability is tightly related to many developmental disorders, cancers, and aging. Given that stem ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

El uso de ARN de interferencia para Investigar la respuesta inmune innata en macrófagos de ratón

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Rapid and Robust Analysis of Cellular and Molecular Polarization Induced by Chemokine Signaling

Análisis rápido y robusto de Celular y Molecular Polarización Inducida por Chemokine Señalización

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Development and Validation of a Quantitative PCR Method for Equid Herpesvirus-2 Diagnostics in Respiratory Fluids

Desarrollo y validación de un método de PCR cuantitativa para Equid herpesvirus-2 Diagnóstico en los flujos respiratorios

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Rapid Quantification of Mitogen-induced Blastogenesis in T Lymphocytes for Identifying Immunomodulatory Drugs

La cuantificación rápida de Blastogénesis inducida por mitógeno de linfocitos T para identificar fármacos inmunomoduladores

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A Method to Assess Fc-mediated Effector Functions Induced by Influenza Hemagglutinin Specific Antibodies

Un método para evaluar las funciones efectoras mediadas por Fc inducidas por los anticuerpos específicos de la hemaglutinina de la gripe

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Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Trombosis venosa profunda inducida por estasis en los ratones controlados por sonografía de alta frecuencia

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