Name: in situ protocol for butterfly pupal wings using riboprobes
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In situ Protocol for Butterfly Pupal Wings Using Riboprobes at JoVE.com

אנו מודים ג&#39;יין Selegue, מרגרט הולינגסוורת&#39;, ג&#39;ין ברי, ריו Futahashi, Najmus סהר מחפוז, אלכסנדר Popadic, בוב ריד, תמיכה טכנית עבור רוש לסייע לפתרון בעיות בפרוטוקול זה. אנו מודים גם ויליאם Piel עצה על עריכת הסרט.

יום 1 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הפתרונות הבאים: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10x PBS </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1x PBS </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1x PBT </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> DDH 2 O <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-ali...

<ol>
	<li>Carroll, S. B., Gates, J., Keys, D. N., Paddock, S. W., Panganiban, G. E. F., Selegue, J. E., Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+formation+and+eyespot+determination+in+butterfly+wings.">Pattern formation and eyespot determination in butterfly wings.</a> Science. 265, 109-114 (1994).</li><li>Chomczynski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solubilization+in+formamide+protects+RNA+from+degradation.">Solubilization in formamide protects RNA from degradation.</a> Nucleic Acids Research. 20, 3791-3792 (1992).</li><li>Keys, D. N., Lewis, D. L., Selegue, J. E., Pearson, B. J., Goodrich, L. V., Johnson, R. J., Gates, J., Scott, M. P., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+a+hedgehog+regulatory+circuit+in+butterfly+eyespot+evolution.">Recruitment of a hedgehog regulatory circuit in butterfly eyespot evolution.</a> Science. 283, 532-534 (1999).</li><li>Marcus, J. M., Ramos, D. M., Monteiro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ+line+transformation+of+the+butterfly+Bicyclus+anynana.">Germ line transformation of the butterfly Bicyclus anynana.</a> Proc R Soc Lond B (Suppl). 271, S263-S265 (2004).</li><li>Monteiro, A., Glaser, G., Stockslagger, S., Glansdorp, N., Ramos, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+insights+into+questions+of+lepidopteran+wing+pattern+homology.">Comparative insights into questions of lepidopteran wing pattern homology.</a> BMC Developmental Biology. 6, 52 (2006).</li><li>Ramos, D. M., Kamal, F., Wimmer, E. A., Cartwright, A. N., Monteiro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+and+spatial+control+of+transgene+expresson+using+laser+induction+of+the+hsp70+promoter.">Temporal and spatial control of transgene expresson using laser induction of the hsp70 promoter.</a> BMC Developmental Biology. 6, 55 (2006).</li><li>Weatherbee, S. D., Nijhout, H. F., Grunert, L. W., Halder, G., Galant, R., Selegue, J., Carroll, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrabithorax+function+in+butterfly+wings+and+the+evolution+of+insect+wing+patterns.">Ultrabithorax function in butterfly wings and the evolution of insect wing patterns.</a> 9, 109-115 (1999).</li></ol>

אופטימיזציה של הפרוטוקולים הקיימים ב הכלאות באתרם על דיסקים כנף הזחל בוצעו בהצלחה באמצעות דיסקים של פרפרים תמצית coenia (Carroll et al 1994;. Keys et al 1999;. ותרבי et al 1999).. הפרוטוקול הנוכחי הותאם מתוך פרוטוקול כתוב מפורט זמין על פי דרישה מן המעבדה קרול עבור stainings כנף הזח...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Fix Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>4% Paraformaldehyde in PBS</td>
</tr>
<tr>
<td>PBT</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>0.1% Tween 20 in PBS</td>
</tr>
<tr>
<td>Proteinase K solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>2.5&#xF06D;g/ml Proteinase K in PBT</td>
</tr>
<tr>
<td>Digestion Stop Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>2 mg/ml glycine in PBT</td>
</tr>
<tr>
<td>Pre-Hybridization Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>For 50 ml PHB: 12 ml DEPC treated water + 25 ml Formamide + 12.5 ml 20 x SSC + 50 ul Tween 20 + 500 ul 10 mg/ml salmon sperm (Rnase free, heat denatured prior to addition to solution).
</td>
</tr>
<tr>
<td>Hybridization Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Add 1 mg/ml glycogen to prehybridization buffer</td>
</tr>
<tr>
<td>Block Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>50 mM Tris pH 6.8, 150 mM NaCl, 0.5% IGEPAL (NP40), 5 mg/ml BSA
</td>
</tr>
<tr>
<td>Anti-DIG</td>
<td>Ab</td>
<td>Roche Applied Science</td>
<td>11 093 274 910</td>
<td>Alkaline Phosphatase conjugated</td>
</tr>
<tr>
<td>DIG Wash and Block Buffer Set</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche Applied Science</td>
<td>11 585 762 001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Crystal Mount Aqueous Mounting Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C0612</td>
<td>Mounting Medium </td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>

in situ protocol for butterfly pupal wings using riboprobes

כאן אנו מציגים, בפורמט וידיאו, פרוטוקול של הכלאות באתרם גלמי כנפיים של פרפר Bicyclus anynana באמצעות riboprobes. ב הכלאות באתרו, עמוד התווך של הביולוגיה ההתפתחותית, מועילים כדי ללמוד את דפוסי במרחב ובזמן של ביטוי גנים בפיתוח רקמות ברמה של שעתוק. אם נוגדנים היעד מוצרי חלבון של שעתוק הגנים טרם פותחו, ו / או יש גן עותקים מרובים של חלבון מסוים בגנום זה לא יכול להיות מובחן באמצעות נוגדנים זמינים, בכל מנח יכול לשמש במקום. בעוד בטכניקה באתרו עבור דיסקים כנף הזחל כבר זמין לקהילה פרפר במשך כמה שנים, פרוטוקול הנוכחי עבר אופטימיזציה עבור כנפי גלמי גדול יותר ועדין יותר.

Watch this Scientific Journal Video about In situ Protocol for Butterfly Pupal Wings Using Riboprobes at JoVE.com

In situ Protocol for Butterfly Pupal Wings Using Riboprobes

כדי לבחון ביטוי גנים ברקמות הזרוע גלמי של Bicyclus anynana, אנו מציגים פרוטוקול אופטימיזציה של הכלאות באתרו באמצעות riboprobes. כמו כן אנו מספקים הנחיות אופטימיזציה נוספת של פרוטוקול זה לשימוש כנפיים גלמי Lepidopteran של מינים אחרים.

בפרוטוקול באתרו על כנפי פרפר גלמי שימוש Riboprobes

Here we present, in video format, a protocol for in situ hybridizations in pupal wings of the butterfly Bicyclus anynana using riboprobes.  In situ ...

Research

JoVE Journal

Biology

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Non-רדיואקטיבי באתרו הכלאה פרוטוקול ישים עבור נורווגיה Spruce ומגוון של מיני צמחים

The high-throughput expression analysis technologies available today give scientists an overflow of expression profiles but their resolution in terms of ...

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

פלואורסצנציה באתרו הכלאה (FISH) פרוטוקול של זרע אדם

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

Drosophila Pupal Abdomen Immunohistochemistry

Drosophila Pupal Abdomen Immunohistochemistry

תסיסנית גלמי אימונוהיסטוכימיה בטן

The Drosophila pupal abdomen is an established model system for the study of epithelial morphogenesis and the development of sexually dimorphic ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

הדמיה וניתוח של מולקולות ה-mRNA באמצעות הקרינה<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה ב<em&gt; Cerevisiae Saccharomyces</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Quick Fluorescent In Situ Hybridization Protocol for Xist RNA Combined with Immunofluorescence of Histone Modification in X-chromosome Inactivation

Quick Fluorescent In Situ Hybridization Protocol for Xist RNA Combined with Immunofluorescence of Histone Modification in X-chromosome Inactivation

המהיר פלורסנט<em&gt; באתר</em&gt; הכלאת פרוטוקול לXist RNA משולב עם Immunofluorescence של היסטון שינוי באיון כרומוזום X

Combining RNA fluorescent in situ hybridization (FISH) with immunofluorescence (immuno-FISH) creates a technique that can be employed at the single cell ...

Dissection and Mounting of Drosophila Pupal Eye Discs

Dissection and Mounting of Drosophila Pupal Eye Discs

נתיחה והתקנה<em&gt; דרוזופילה</em&gt; גלמי דיסקי העין

The Drosophila melanogaster eye disc is a powerful system that can be used to study many different biological processes.  It contains approximately 800 ...

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

שיטות מדידה של אגף פיגמנטציה של דרוזופילה guttifera ותקופות הגולמי הזמני

Diversified species of Drosophila (fruit fly) provide opportunities to study mechanisms of development and genetic changes responsible for evolutionary ...

A Protocol for Laboratory Housing of Turquoise Killifish (Nothobranchius furzeri)

A Protocol for Laboratory Housing of Turquoise Killifish Nothobranchius furzeri

פרוטוקול עבור המעבדה דיור של טורקיז דגים גמבוזיים (Nothobranchius furzeri)

The development of husbandry practices in non-model laboratory fish used for experimental purposes has greatly benefited from the establishment of ...

At-Risk Butterfly Captive Propagation Programs to Enhance Life History Knowledge and Effective Ex Situ Conservation Techniques

בסיכון בשבי פרפר תוכניות התפשטות כדי לשפר את ההיסטוריה החיים ידע ויעיל לשעבר שימור באתרו טכניקות

Improving knowledge of ex situ best practices for at-risk butterflies is important for generating successful conservation and recovery program outcomes. ...

Probing mRNA Kinetics in Space and Time in Escherichia coli using Two-Color Single-Molecule Fluorescence In Situ Hybridization

Probing mRNA Kinetics in Space and Time in Escherichia coli using Two-Color Single-Molecule Fluorescence In Situ Hybridization

חיטוט mRNA קינטיקה בחלל וזמן ב Escherichia קולי באמצעות שני צבעים פלואורסצנטיות מולקולה אחת ב סיטו הכלאה

Single-molecule fluorescence in situ hybridization (smFISH) allows for counting the absolute number of mRNAs in individual cells. Here, we describe an ...