Name: in situ protocol for butterfly pupal wings using riboprobes
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In situ Protocol for Butterfly Pupal Wings Using Riboprobes at JoVE.com

私たちは、ジェーンSelegue、マーガレットホリングスワース、ジンベリー、亮Futahashi、NajmusサハルMahfooz、アレクサンダルPopadic、ボブリード、このプロトコルのトラブルシューティングに役立つためにロシュテクニカルサポートに感謝。我々はまた、ムービーの編集上のアドバイスをウィリアムピールに感謝。

1日目<ol><li>以下のソリューションを準備します。 <ul><li> 10倍PBS </li><li> 1X PBS </li><li> 1X PBT </li><li>のddH 2 O <ul><li> 0.1パーセント合計ボリュームに対して、DEPCを追加し、積極的にソリューションを振る。 </li><li>オートクレーブ。 </li></ul></li><li> 4％パラホルムアルデヒド修正 - PBS - DEPCを使用して</li><li>プロテイナーゼK溶液 - アリコートを取り外す前に、精力的に沈殿物が存在する場合?...

<ol>
	<li>Carroll, S. B., Gates, J., Keys, D. N., Paddock, S. W., Panganiban, G. E. F., Selegue, J. E., Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+formation+and+eyespot+determination+in+butterfly+wings.">Pattern formation and eyespot determination in butterfly wings.</a> Science. 265, 109-114 (1994).</li><li>Chomczynski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solubilization+in+formamide+protects+RNA+from+degradation.">Solubilization in formamide protects RNA from degradation.</a> Nucleic Acids Research. 20, 3791-3792 (1992).</li><li>Keys, D. N., Lewis, D. L., Selegue, J. E., Pearson, B. J., Goodrich, L. V., Johnson, R. J., Gates, J., Scott, M. P., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+a+hedgehog+regulatory+circuit+in+butterfly+eyespot+evolution.">Recruitment of a hedgehog regulatory circuit in butterfly eyespot evolution.</a> Science. 283, 532-534 (1999).</li><li>Marcus, J. M., Ramos, D. M., Monteiro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ+line+transformation+of+the+butterfly+Bicyclus+anynana.">Germ line transformation of the butterfly Bicyclus anynana.</a> Proc R Soc Lond B (Suppl). 271, S263-S265 (2004).</li><li>Monteiro, A., Glaser, G., Stockslagger, S., Glansdorp, N., Ramos, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+insights+into+questions+of+lepidopteran+wing+pattern+homology.">Comparative insights into questions of lepidopteran wing pattern homology.</a> BMC Developmental Biology. 6, 52 (2006).</li><li>Ramos, D. M., Kamal, F., Wimmer, E. A., Cartwright, A. N., Monteiro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+and+spatial+control+of+transgene+expresson+using+laser+induction+of+the+hsp70+promoter.">Temporal and spatial control of transgene expresson using laser induction of the hsp70 promoter.</a> BMC Developmental Biology. 6, 55 (2006).</li><li>Weatherbee, S. D., Nijhout, H. F., Grunert, L. W., Halder, G., Galant, R., Selegue, J., Carroll, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrabithorax+function+in+butterfly+wings+and+the+evolution+of+insect+wing+patterns.">Ultrabithorax function in butterfly wings and the evolution of insect wing patterns.</a> 9, 109-115 (1999).</li></ol>

既存のプロトコルの最適化 （。。らキーズ1999;。ウェザーら1999。キャロルら1994）幼虫の翼ディスクが正常にPRECIS coeniaの蝶からディスクを使用して実行されているのin situハイブリダイゼーション。現在のプロトコルは、幼虫の翼stainingsのためのキャロルの研究室からのリクエストも承ります詳細な書面によるプロトコルから適応されています。我々が行った変更は、幼虫と蛹の翅の組織の違いに対応?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Fix Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>4% Paraformaldehyde in PBS</td>
</tr>
<tr>
<td>PBT</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>0.1% Tween 20 in PBS</td>
</tr>
<tr>
<td>Proteinase K solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>2.5&#xF06D;g/ml Proteinase K in PBT</td>
</tr>
<tr>
<td>Digestion Stop Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>2 mg/ml glycine in PBT</td>
</tr>
<tr>
<td>Pre-Hybridization Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>For 50 ml PHB: 12 ml DEPC treated water + 25 ml Formamide + 12.5 ml 20 x SSC + 50 ul Tween 20 + 500 ul 10 mg/ml salmon sperm (Rnase free, heat denatured prior to addition to solution).
</td>
</tr>
<tr>
<td>Hybridization Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Add 1 mg/ml glycogen to prehybridization buffer</td>
</tr>
<tr>
<td>Block Buffer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>50 mM Tris pH 6.8, 150 mM NaCl, 0.5% IGEPAL (NP40), 5 mg/ml BSA
</td>
</tr>
<tr>
<td>Anti-DIG</td>
<td>Ab</td>
<td>Roche Applied Science</td>
<td>11 093 274 910</td>
<td>Alkaline Phosphatase conjugated</td>
</tr>
<tr>
<td>DIG Wash and Block Buffer Set</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche Applied Science</td>
<td>11 585 762 001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Crystal Mount Aqueous Mounting Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>C0612</td>
<td>Mounting Medium </td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>

in situ protocol for butterfly pupal wings using riboprobes

ここでは、ビデオフォーマットで、リボプローブを使用して蝶Bicyclus anynanaの蛹の翼のサイチュハイブリダイゼーションのためのプロトコルを提示する。サイチュハイブリダイゼーションでは、発生生物学の主流は、転写レベルでの組織を開発する際に遺伝子発現の空間的および時間的パターンを研究するのに便利です。遺伝子の転写のタンパク質産物はまだ開発、および/または内臓で、入手可能な抗体を用いて区別することができないゲノムの特定のタンパク質の複数の遺伝子のコピーが存在していないターゲット抗体が代わりに使用することができる場合。幼虫の翼のディスクの現場テクニックで数年間、蝶のコミュニティに利用されていますが、現在のプロトコルは、より大規模で脆弱な蛹の翼のために最適化されています。

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In situ Protocol for Butterfly Pupal Wings Using Riboprobes

Bicyclus anynanaの蛹の翼の組織における遺伝子発現を調べるために、我々はリボプローブを用いてサイチュハイブリダイゼーションのために最適化されたプロトコルを提示する。我々はまた、他のチョウ目の種の蛹の翼で使用するためにこのプロトコルのさらなる最適化のためのガイドラインを提供しています。

リボプローブを用いたバタフライ蛹ウィングスのためのその場プロトコルで

Here we present, in video format, a protocol for in situ hybridizations in pupal wings of the butterfly Bicyclus anynana using riboprobes.  In situ ...

Research

JoVE Journal

Biology

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蛍光を用いたmRNA分子の可視化と分析<em&gt;その場で</emで&gt;ハイブリダイゼーション<em&gt;サッカロミセス·セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）</em

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