Name: diolistic labeling of neurons from rodent and non-human primate brain slices
Uploaded: 2010-07-06T17:00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about DiOLISTIC Labeling of Neurons from Rodent and Non-human Primate Brain Slices at JoVE.com

نود أن نعترف مايكل فيدر وهولواي تيريل على المساعدة التي قدموها خلال مجموعة أولية تتألف من التقنية والمختبرية الدكتور Fumi اونو ثانية للحصول على المجهر مبائر بهم. وقد تم تمويل هذا البحث من قبل المعهد الوطني للصحة من خلال برنامج وجماعية من NIAAA NINDS.

<ol>
	<li>Gan, W. B., Grutzendler, J., Wong, W. T., Wong, R. O., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicolor+"DiOLISTIC"+labeling+of+the+nervous+system+using+lipophilic+dye+combinations.">Multicolor "DiOLISTIC" labeling of the nervous system using lipophilic dye combinations.</a> Neuron. 27, 219-225 (2000).</li><li>Gan, W. B., Grutzendler, J., Wong, R. O., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ballistic+delivery+of+dyes+for+structural+and+functional+studies+of+the+nervous+system.">Ballistic delivery of dyes for structural and functional studies of the nervous system.</a> Cold Spring Harb Protoc. , pdb.prot5202-pdb.prot5202 (2009).</li><li>Grutzendler, J., Tsai, J., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+labeling+of+neuronal+populations+by+ballistic+delivery+of+fluorescent+dyes.">Rapid labeling of neuronal populations by ballistic delivery of fluorescent dyes.</a> Methods. 30, 79-85 (2003).</li><li>Lee, K. W., Kim, Y., Kim, A. M., Helmin, K., Nairn, A. C., Greengard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine-induced+dendritic+spine+formation+in+D1+and+D2+dopamine+receptor-containing+medium+spiny+neurons+in+nucleus+accumbens.">Cocaine-induced dendritic spine formation in D1 and D2 dopamine receptor-containing medium spiny neurons in nucleus accumbens.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 103, 3399-3404 (2006).</li><li>Matsubayashi, Y., Iwai, L., Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+double-labeling+with+carbocyanine+neuronal+tracing+and+immunohistochemistry+using+a+cholesterol-specific+detergent+digitonin.">Fluorescent double-labeling with carbocyanine neuronal tracing and immunohistochemistry using a cholesterol-specific detergent digitonin.</a> J Neurosci Methods. 174, 71-81 (2008).</li><li>Neely, S. t. a. n. w. o. o. d., Deutch, G. D., Y, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+of+diOlistic+labeling+with+retrograde+tract+tracing+and+immunohistochemistry.">Combination of diOlistic labeling with retrograde tract tracing and immunohistochemistry.</a> J Neurosci Methods. 184, 332-336 (2009).</li><li>O'Brien, J. A., Lummis, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diolistics:+incorporating+fluorescent+dyes+into+biological+samples+using+a+gene+gun.">Diolistics: incorporating fluorescent dyes into biological samples using a gene gun.</a> Trends Biotechnol. 25, 530-534 (2007).</li><li>Shen, H. W., Toda, S., Moussawi, K., Bouknight, A., Zahm, D. S., Kalivas, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+dendritic+spine+plasticity+in+cocaine-+withdrawn+rats.">Altered dendritic spine plasticity in cocaine- withdrawn rats.</a> J. Neurosci. 29, 2876-2884 (2009).</li></ol>

تم تنفيذ كافة الإجراءات التالية الحيوانية توجيهات من رعاية الحيوان واللجنة استخدم في NIAAA ومركز الأبحاث الوطني ولاية أوريغون الرئيسيات. الكتاب ليس لديهم ما تكشف.

وسم DiOLISTIC هي واحدة من أكثر التقنيات المتاحة للخلايا متعددة العلامات fluorescently لأنه لا يمكن تطبيقه على أنسجة من المقاطع الأنواع المختلفة ، على مجموعة واسعة من الأعمار ، والأنسجة التي تم الحصول عليها طازجة أو من تثبيتي - perfused الحيوانات (انظر أيضا غان وآخرون . ، 2009). عملية سريعة نسبيا لأنه يأخذ 1-2 أيام ، ويمكن دمجها مع غيرها من الأساليب الكلاسيكية أكثر العلامات مثل immunostaining (لي وآخرون ، 2006). وينبغي إيلاء اهتمام خاص لتجنب حول تحديد واستخدام تركيزات عالية المنظفات في الحضانة ، لأن هذه الحلول سيضم سلامة غشاء محبة للدهون وتؤدي إلى تسرب الصبغة خارج الخلايا. ويمكن تسهيل اختراق الأجسام المضادة التي تركيزات منخفضة من تريتون X - 100 (لي وآخرون ، 2006) ، فضلا عن ديجيتونين أو سابونين في حل الحضانة (Matsubayashi وآخرون ، 2008). بعض التعديلات التي يمكن تطبيقها على هذه التقنية بما في ذلك استخدام الرصاص مع الأصباغ متعددة كما وصفها آخرون غان (2000) أو تغيير طول ونوع من التعرض للأجسام المضادة (نيلي وآخرون ، 2009). تقليديا ، استخدمت الجاذبة لتتبع توقعات العصبية في الدماغ. وسم DiOLISTIC توسع تطبيقها من خلال وصف وسيلة مفيدة لدراسة مورفولوجية الخلية. مورفولوجيا الخلايا العصبية هي ذات أهمية كبيرة وذلك بسبب التنوع الكبير الموجود في الدماغ وتكهنات بأن شكل الخلية قد تنعكس على وظيفة تعدد السكان الخلايا العصبية في الجهاز العصبي. أحد الأمثلة على ذلك هو حقيقة أن الخلايا العصبية الكثيرة في الجهاز العصبي لدى الثدييات عرض نتوء صغير يسمى العمود الفقري شجيري التي هي من نقاط الاشتباك العصبي موقع glutamatergic. بهذه الطريقة ، يمكن أن ترتبط كثافة نقاط الاشتباك العصبي glutamatergic على خلية لكثافة الأشواك الجذعية ، والتي يمكن قياسها باستخدام تقنية وضع العلامات الموضحة في هذه الوثيقة. وعلاوة على ذلك ، يمكن كميا المعلمات المورفولوجية الأخرى مثل إجمالي طول تغصن ، ونمط المتفرعة ، شجيري العمود الفقري شكل وكثافة ودراستها. استخدام العلامات الفلورية لدراسة مورفولوجية العصبية العديد من المزايا بالمقارنة مع التقنيات التقليدية التي تعتمد على الحقل المجهري مشرق (مثل تلطيخ غولجي) لأنه يسمح للتصوير مبائر دقة أعلى. ميزة أخرى لاستخدام الجاذبة بوصفها fluorophore في التجارب التي تهدف إلى قياس كثافة العمود الفقري شجيري ومورفولوجيا وخصائصه محبة للدهون. أقسام الجاذبة في غشاء البلازما ويقدم الخطوط العريضة واضحة المعالم من العمليات العصبية ونتوءات شجيري. نظرا لصغر حجم معظم العمود الفقري شجيري (أقل من 1 فيمتولتر) ، وتلطيخ غشاء هو أكثر كفاءة ويسمح لأفضل تصور نتوءات صغيرة ورقيقة من تلطيخ هيولي.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>1-1&#x2019;-dioctadecyl-3,3,3&#x2019;,3&#x2019;- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate (DiI)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>D-282</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methylene chloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Chemicals</td>
<td>H485-06</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tungsten beads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>165-2269</td>
<td>1.7 &mu;m diameter</td>
</tr>
<tr>
<td>Polyvinylpyrrolidone </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>529504</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tefzel bullet tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>165-2441</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing cutter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>165-2422</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Helios Gene Gun</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>165-2431</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isopore membrane filter paper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>TSTP02500</td>
<td>3.0 &mu;m pore size</td>
</tr>
<tr>
<td>ProLong Gold Antifade</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>P36930</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alfa Aesar</td>
<td>30525-89-4</td>
<td>(16% w/v)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

diolistic labeling of neurons from rodent and non-human primate brain slices

تلطيخ DiOLISTIC يستخدم المسدس لإدخال جينات الأصباغ الفلورية ، مثل الجاذبة ، في الخلايا العصبية في الدماغ من شرائح (غان وآخرون ، 2009 ؛. اوبراين وLummis ، 2007 ؛ غان وآخرون ، 2000). هنا نقدم وصفا تفصيليا لكل خطوة من الخطوات المطلوبة مع صور مثالية من النتائج الجيدة والسيئة التي من شأنها أن تساعد عند إعداد هذه التقنية. في تجربتنا ، ثبت بضع خطوات حاسمة من أجل التطبيق الناجح للDiOLISTICS. هذه الاعتبارات تشمل نوعية الرصاص الجاذبة المغلفة ، ومدى التعرض تثبيتي ، وتركيز المنظفات المستخدمة في حلول الحضانة. وتقدم النصائح والحلول للمشاكل المشتركة. هذا هو أسلوب وضع العلامات متعددة الجوانب التي يمكن تطبيقها على الأنواع الحيوانية متعددة في مجموعة واسعة من الأعمار. خلافا لغيرها من تقنيات الوسم الفلورسنت التي تقتصر على الأعمال التحضيرية من الحيوانات الصغيرة أو تقتصر على الفئران لأنها تعتمد على التعبير عن التحوير فلوري ، يمكن تطبيق وضع العلامات DiOLISTIC للحيوانات من جميع الأعمار والأنواع والأنماط الجينية ويمكن استخدامه في تركيبة مع immunostaining لتحديد subpopulation محددة من الخلايا. نحن هنا لشرح استخدام DiOLISTICS إلى الخلايا العصبية في الدماغ التسمية في شرائح من الفئران البالغين والكبار الرئيسات غير البشرية وذلك بهدف قياس تغصن متفرعة ومورفولوجيا شجيري العمود الفقري.

Watch this Scientific Journal Video about DiOLISTIC Labeling of Neurons from Rodent and Non-human Primate Brain Slices at JoVE.com

DiOLISTIC Labeling of Neurons from Rodent and Non-human Primate Brain Slices

نحن لشرح استخدام المسدس لإدخال جينات الأصباغ الفلورية ، مثل الجاذبة ، في الخلايا العصبية في الدماغ شرائح من القوارض والرئيسات غير البشرية من مختلف الأعمار. في هذه الحالة بالذات ، ونحن نستخدم فئران بالغة (3-6 أشهر من العمر) والقرود cynomologus الكبار (9-15 سنة). هذه التقنية ، ووصف في الأصل من قبل المختبر ليختمن الدكتور (غان<em&gt; وآخرون</em&gt; ، 2000) ، هي مناسبة تماما لدراسة الشجيرية المتفرعة ومورفولوجيا شجيري العمود الفقري ويمكن دمجها مع immunostaining التقليدية ، إذا كان يتم الاحتفاظ المنظفات بتركيز منخفض.

DiOLISTIC وصفها من الخلايا العصبية من القوارض والإنسان غير شرائح الدماغ الرئيسيات

DiOLISTIC staining uses the gene gun to introduce fluorescent dyes, such as DiI, into neurons of brain slices (Gan et al., 2009; O'Brien and Lummis, 2007; ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

Vibrodissociation من الخلايا العصبية من الدماغ القوارض شرائح لدراسة نقل صورة متشابك ومحطات قبل المشبكي

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices

الردود الكالسيوم في الخلايا العصبية التصوير GFP الموسومة تحت المهاد البصري من شرائح مخ الفأر

Despite an enormous increase in our knowledge about the mechanisms underlying the encoding of information in the brain, a central question concerning the ...

Voltage-sensitive Dye Recording from Axons, Dendrites and Dendritic Spines of Individual Neurons in Brain Slices

الجهد حساسة من تسجيل صبغ محاور عصبية، التشعبات والعمود الفقري شجيري الخلايا العصبية الفردية في شرائح الدماغ

Understanding the biophysical properties and functional organization of single neurons and how they process information is fundamental for understanding ...

Growing Neural Stem Cells from Conventional and Nonconventional Regions of the Adult Rodent Brain

تزايد الخلايا الجذعية العصبية من المناطق التقليدية وغير التقليدية من الدماغ الكبار القوارض

Recent work demonstrates that central nervous system (CNS) regeneration and tumorigenesis involves populations of stem cells (SCs) resident within the ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

العزلة والثقافة وطويل الأجل صيانة الابتدائية الدماغ المتوسط ​​الدوبامين العصبية من المخ الجنينية القوارض

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Preparation of Non-human Primate Brain Tissue for Pre-embedding Immunohistochemistry and Electron Microscopy

إعداد أنسجة المخ الرئيسيات غير البشرية لمرحلة ما قبل تضمين المناعية والمجهر الإلكتروني

Despite all the technological advances at the light microscopy&#160;level, electron microscopy remains the only tool in neuroscience to examine and ...

Application of Automated Image-guided Patch Clamp for the Study of Neurons in Brain Slices

تطبيق الآلي صورة موجهة المشبك التصحيح لدراسة الخلايا العصبية في شرائح الدماغ

Whole-cell patch clamp is the gold-standard method to measure the electrical properties of single cells. However, the in vitro patch clamp remains a ...

Evaluation of Synapse Density in Hippocampal Rodent Brain Slices

تقييم كثافة المشبك في الدماغ القوارض هيبوكامبال شرائح

In the brain, synapses are specialized junctions between neurons, determining the strength and spread of neuronal signaling. The number of synapses is ...

Isolation and RNA Extraction of Neurons, Macrophages and Microglia from Larval Zebrafish Brains

العزلة واستخراج الحمض النووي الريبي للخلايا العصبية والضامة وميكروجليا من العقول الزرد اليرقات

To gain a detailed understanding of the role of different CNS cells during development or the establishment and progression of brain pathologies, it is ...

Recording and Modulation of Epileptiform Activity in Rodent Brain Slices Coupled to Microelectrode Arrays

تسجيل وتعديل النشاط صرعية في الدماغ القوارض شرائح بالإضافة إلى صفائف ميكروليكترودي

Temporal lobe epilepsy (TLE) is the most common partial complex epileptic syndrome and the least responsive to medications. Deep brain stimulation (DBS) ...