Name: diolistic labeling of neurons from rodent and non-human primate brain slices
Uploaded: 2010-07-06T17:00:00
Duration: 9 min 21 s
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हम उनकी सहायता के लिए तकनीक और उनके confocal खुर्दबीन उपयोग के लिए डा. Fumi ओनो प्रयोगशाला के प्रारंभिक सेट अप के दौरान माइकल Feyder और Terrell होलोवे स्वीकार करते हैं करना चाहते हैं. इस शोध NIAAA और NINDS के अंदर कार्यक्रम के माध्यम से स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा वित्त पोषित किया गया था.

<ol>
	<li>Gan, W. B., Grutzendler, J., Wong, W. T., Wong, R. O., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicolor+"DiOLISTIC"+labeling+of+the+nervous+system+using+lipophilic+dye+combinations.">Multicolor "DiOLISTIC" labeling of the nervous system using lipophilic dye combinations.</a> Neuron. 27, 219-225 (2000).</li><li>Gan, W. B., Grutzendler, J., Wong, R. O., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ballistic+delivery+of+dyes+for+structural+and+functional+studies+of+the+nervous+system.">Ballistic delivery of dyes for structural and functional studies of the nervous system.</a> Cold Spring Harb Protoc. , pdb.prot5202-pdb.prot5202 (2009).</li><li>Grutzendler, J., Tsai, J., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+labeling+of+neuronal+populations+by+ballistic+delivery+of+fluorescent+dyes.">Rapid labeling of neuronal populations by ballistic delivery of fluorescent dyes.</a> Methods. 30, 79-85 (2003).</li><li>Lee, K. W., Kim, Y., Kim, A. M., Helmin, K., Nairn, A. C., Greengard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine-induced+dendritic+spine+formation+in+D1+and+D2+dopamine+receptor-containing+medium+spiny+neurons+in+nucleus+accumbens.">Cocaine-induced dendritic spine formation in D1 and D2 dopamine receptor-containing medium spiny neurons in nucleus accumbens.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 103, 3399-3404 (2006).</li><li>Matsubayashi, Y., Iwai, L., Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+double-labeling+with+carbocyanine+neuronal+tracing+and+immunohistochemistry+using+a+cholesterol-specific+detergent+digitonin.">Fluorescent double-labeling with carbocyanine neuronal tracing and immunohistochemistry using a cholesterol-specific detergent digitonin.</a> J Neurosci Methods. 174, 71-81 (2008).</li><li>Neely, S. t. a. n. w. o. o. d., Deutch, G. D., Y, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+of+diOlistic+labeling+with+retrograde+tract+tracing+and+immunohistochemistry.">Combination of diOlistic labeling with retrograde tract tracing and immunohistochemistry.</a> J Neurosci Methods. 184, 332-336 (2009).</li><li>O'Brien, J. A., Lummis, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diolistics:+incorporating+fluorescent+dyes+into+biological+samples+using+a+gene+gun.">Diolistics: incorporating fluorescent dyes into biological samples using a gene gun.</a> Trends Biotechnol. 25, 530-534 (2007).</li><li>Shen, H. W., Toda, S., Moussawi, K., Bouknight, A., Zahm, D. S., Kalivas, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+dendritic+spine+plasticity+in+cocaine-+withdrawn+rats.">Altered dendritic spine plasticity in cocaine- withdrawn rats.</a> J. Neurosci. 29, 2876-2884 (2009).</li></ol>

सभी पशु की प्रक्रिया पशु और NIAAA और ओरेगन नेशनल प्राइमेट रिसर्च सेंटर में उपयोग समिति की देखभाल से मार्गदर्शन के बाद प्रदर्शन किया गया. लेखकों खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

DiOLISTIC लेबलिंग fluorescently लेबलिंग कोशिकाओं के लिए सबसे बहुमुखी उपलब्ध तकनीकों में से एक है क्योंकि यह विभिन्न प्रजातियों से ऊतक वर्गों के लिए लागू किया जा सकता है, उम्र की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए, और ऊतकों को ताजा या लगानेवाला perfused पशुओं से प्राप्त ( गण मन एट अल , 2009). प्रक्रिया अपेक्षाकृत तेजी से है के रूप में यह 1-2 दिन लगते हैं और यह immunostaining (ली एट अल., 2006) जैसे अन्य अधिक शास्त्रीय लेबलिंग दृष्टिकोण के साथ संयुक्त किया जा सकता है. विशेष ध्यान फिक्सिंग और ऊष्मायन समाधान में उच्च डिटर्जेंट सांद्रता का उपयोग अधिक से बचने के लिए भुगतान किया जाना चाहिए है क्योंकि इन lipophilic झिल्ली की अखंडता शामिल है और डाई कोशिकाओं के बाहर रिसाव के कारण होगा. एंटीबॉडी प्रवेश की कम मात्रा द्वारा मदद की जा सकती है Triton एक्स 100 (ली एट अल., 2006) के रूप में के रूप में अच्छी तरह से digitonin या ऊष्मायन समाधान में सैपोनिन (Matsubayashi एट अल. 2008) . कुछ संशोधनों कि इस तकनीक को लागू किया जा सकता है एकाधिक गण मन एट अल (2000) या एंटीबॉडी जोखिम (नीली एट अल, 2009) की लंबाई और प्रकार बदलने के द्वारा वर्णित के रूप में रंगों के साथ गोलियों का उपयोग शामिल है. परंपरागत रूप से, DiI मस्तिष्क में neuronal अनुमानों को ट्रेस करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. DiOLISTIC लेबलिंग एक सेल आकारिकी की जांच करने के लिए उपयोगी विधि का वर्णन करके अपने आवेदन का विस्तार है. Neuronal morphology बड़े मस्तिष्क और अटकलें हैं कि सेल आकार तंत्रिका तंत्र में neuronal आबादी के समारोह बहुलता पर प्रतिबिंबित हो सकता है में पाया विविधता की वजह से ब्याज की एक महान है. इस का एक उदाहरण तथ्य यह है कि स्तनधारी तंत्रिका तंत्र प्रदर्शन छोटे फलाव में कई न्यूरॉन्स वृक्ष के समान spines कि glutamatergic synapses के साइट रहे हैं बुलाया है. इस रास्ते में, किसी कक्ष पर glutamatergic synapses के घनत्व वृक्ष के समान spines के घनत्व, जो लेबलिंग तकनीक के साथ साथ वर्णित का उपयोग करके मापा जा सकता है के लिए सहसंबद्ध किया जा सकता है. इसके अलावा, dendrite कुल लंबाई, शाखाओं में बंटी पैटर्न, वृक्ष के समान रीढ़ की हड्डी आकार और घनत्व के रूप में इस तरह के अन्य morphological मापदंडों और मात्रा निर्धारित किया जा सकता है है अध्ययन. neuronal आकारिकी अध्ययन के लिए फ्लोरोसेंट लेबलिंग का उपयोग कई फायदे हैं जब अधिक परंपरागत तकनीक है कि उज्ज्वल क्षेत्र माइक्रोस्कोपी (जैसे Golgi धुंधला) पर भरोसा करने के लिए तुलना में है क्योंकि यह उच्च संकल्प इमेजिंग confocal के लिए अनुमति देता है. वृक्ष के समान रीढ़ घनत्व को मापने के उद्देश्य से प्रयोगों में एक fluorophore के रूप में DiI का उपयोग और आकारिकी का एक अन्य लाभ अपनी lipophilic गुण है. प्लाज्मा झिल्ली में DiI विभाजन और neuronal प्रक्रियाओं और वृक्ष के समान protrusions की एक अच्छी तरह से परिभाषित रूपरेखा प्रदान करता है. सबसे वृक्ष के समान spines (1 से कम femtoliter) की छोटी मात्रा को देखते हुए, झिल्ली धुंधला हो जाना और अधिक कुशल है और cytoplasmic धुंधला की तुलना में छोटे, पतले protrusions के बेहतर दृश्य के लिए अनुमति देता है.

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
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		<tbody>
		
<tr>
<td>1-1&#x2019;-dioctadecyl-3,3,3&#x2019;,3&#x2019;- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate (DiI)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>D-282</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methylene chloride</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Chemicals</td>
<td>H485-06</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tungsten beads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>165-2269</td>
<td>1.7 &mu;m diameter</td>
</tr>
<tr>
<td>Polyvinylpyrrolidone </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>529504</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tefzel bullet tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>165-2441</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing cutter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>165-2422</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Helios Gene Gun</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bio-Rad</td>
<td>165-2431</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isopore membrane filter paper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>TSTP02500</td>
<td>3.0 &mu;m pore size</td>
</tr>
<tr>
<td>ProLong Gold Antifade</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>P36930</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alfa Aesar</td>
<td>30525-89-4</td>
<td>(16% w/v)</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

diolistic labeling of neurons from rodent and non-human primate brain slices

DiOLISTIC धुंधला जीन बंदूक का उपयोग करता है DiI जैसे फ्लोरोसेंट रंजक, मस्तिष्क स्लाइसें (गण मन एट अल, 2009, ओ &#39;ब्रायन और Lummis, 2007, गण मन एट अल, 2000) के न्यूरॉन्स में , परिचय. यहाँ हम प्रत्येक अनुकरणीय छवियों के साथ अच्छे और बुरे परिणाम है कि जब तक तकनीक की स्थापना में मदद मिलेगी साथ आवश्यक कदम के एक विस्तृत वर्णन प्रदान करते हैं. हमारे अनुभव में, कुछ कदम DiOLISTICS के सफल आवेदन के लिए महत्वपूर्ण साबित हुई. इन विचारों DiI लेपित गोलियों की गुणवत्ता, लगानेवाला जोखिम की हद तक, एकाग्रता और डिटर्जेंट के ऊष्मायन समाधान में प्रयोग किया जाता शामिल हैं. युक्तियाँ और आम समस्याओं के लिए समाधान प्रदान कर रहे हैं. यह एक बहुमुखी लेबलिंग तकनीक है कि उम्र के एक विस्तृत रेंज में कई जानवरों की प्रजातियों के लिए लागू किया जा सकता है. अन्य फ्लोरोसेंट लेबलिंग तकनीक है कि युवा जानवरों से तैयारी करने के लिए सीमित कर रहे हैं या चूहों को प्रतिबंधित क्योंकि वे एक फ्लोरोसेंट transgene अभिव्यक्ति पर भरोसा के विपरीत, DiOLISTIC लेबलिंग सभी उम्र, प्रजातियों और जीनोटाइप के जानवरों के लिए लागू किया जा सकता है और इसके साथ संयोजन में इस्तेमाल किया जा सकता है कक्षों की एक विशेष subpopulation की पहचान immunostaining. यहाँ हम और बढ़ाता dendrite शाखाओं में बंटी और वृक्ष के समान रीढ़ आकारिकी के उद्देश्य के साथ वयस्क चूहों वयस्क गैर मानव प्राइमेट से मस्तिष्क स्लाइसें में DiOLISTICS के लेबल न्यूरॉन्स उपयोग करने के लिए प्रदर्शित करता है.

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DiOLISTIC Labeling of Neurons from Rodent and Non-human Primate Brain Slices

हम जीन बंदूक का उपयोग करने के लिए rodents और अलग अलग उम्र के गैर मानव प्राइमेट से मस्तिष्क स्लाइसें में न्यूरॉन्स में DiI जैसे फ्लोरोसेंट रंजक, परिचय प्रदर्शित करता है. इस विशेष मामले में, हम वयस्क (3-6 महीने पुरानी) चूहों और वयस्क cynomologus बंदरों (9-15 साल पुराने) का उपयोग करें. इस तकनीक है, मूल रूप से डा. Lichtman की प्रयोगशाला द्वारा वर्णित (गण मन<em&gt; एट अल</em&gt;, 2000), अच्छी तरह से वृक्ष के समान शाखाओं में बंटी और वृक्ष के समान रीढ़ आकारिकी के अध्ययन के लिए अनुकूल है और पारंपरिक immunostaining के साथ जोड़ा जा सकता है, अगर डिटर्जेंट एक कम एकाग्रता में रखा जाता है.

कृंतक से न्यूरॉन्स और गैर मानव प्राइमेट मस्तिष्क स्लाइसें के DiOLISTIC लेबल

DiOLISTIC staining uses the gene gun to introduce fluorescent dyes, such as DiI, into neurons of brain slices (Gan et al., 2009; O'Brien and Lummis, 2007; ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

कृंतक मस्तिष्क स्लाइसें से न्यूरॉन्स की Vibrodissociation Synaptic पारेषण और छवि presynaptic टर्मिनल अध्ययन करने के लिए

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices

इमेजिंग Hypothalamic माउस मस्तिष्क स्लाइस की GFP टैग न्यूरॉन्स में कैल्शियम प्रतिक्रियाएँ

Despite an enormous increase in our knowledge about the mechanisms underlying the encoding of information in the brain, a central question concerning the ...

Voltage-sensitive Dye Recording from Axons, Dendrites and Dendritic Spines of Individual Neurons in Brain Slices

Axons, Dendrites और मस्तिष्क स्लाइसें में व्यक्तिगत न्यूरॉन्स के वृक्ष के समान spines से वोल्टेज के प्रति संवेदनशील डाई रिकॉर्डिंग

Understanding the biophysical properties and functional organization of single neurons and how they process information is fundamental for understanding ...

Growing Neural Stem Cells from Conventional and Nonconventional Regions of the Adult Rodent Brain

वयस्क कृंतक मस्तिष्क के पारंपरिक और nonconventional क्षेत्र से तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं से बढ़

Recent work demonstrates that central nervous system (CNS) regeneration and tumorigenesis involves populations of stem cells (SCs) resident within the ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

भ्रूण कृंतक दिमाग से प्राथमिक Mesencephalic डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स के अलगाव, संस्कृति और लंबी अवधि के रखरखाव

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Preparation of Non-human Primate Brain Tissue for Pre-embedding Immunohistochemistry and Electron Microscopy

पूर्व embedding Immunohistochemistry और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए गैर मानव प्राइमेट मस्तिष्क के ऊतकों की तैयारी

Despite all the technological advances at the light microscopy&#160;level, electron microscopy remains the only tool in neuroscience to examine and ...

Application of Automated Image-guided Patch Clamp for the Study of Neurons in Brain Slices

ब्रेन स्लाइस में न्यूरॉन्स के अध्ययन के लिए स्वचालित छवि-निर्देशित पैच दबाना का आवेदन

Whole-cell patch clamp is the gold-standard method to measure the electrical properties of single cells. However, the in vitro patch clamp remains a ...

Evaluation of Synapse Density in Hippocampal Rodent Brain Slices

हिप्पोकैम्पस कुतर ब्रेन स्लाइसेस में Synapse घनत्व का मूल्यांकन

In the brain, synapses are specialized junctions between neurons, determining the strength and spread of neuronal signaling. The number of synapses is ...

Isolation and RNA Extraction of Neurons, Macrophages and Microglia from Larval Zebrafish Brains

अलगाव और आरएनए लार्वा Zebrafish दिमाग से न्यूरॉन्स, मैक्रोफेज और Microglia का निष्कर्षण

To gain a detailed understanding of the role of different CNS cells during development or the establishment and progression of brain pathologies, it is ...

Recording and Modulation of Epileptiform Activity in Rodent Brain Slices Coupled to Microelectrode Arrays

Microelectrode सरणियों के साथ मिलकर मूषक मस्तिष्क स्लाइस में रिकॉर्डिंग और Epileptiform गतिविधि का मॉडुलन

Temporal lobe epilepsy (TLE) is the most common partial complex epileptic syndrome and the least responsive to medications. Deep brain stimulation (DBS) ...