Name: axoplasm isolation from rat sciatic nerve
Uploaded: 2010-09-24T17:00:00
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Ce protocole permet l&#39;isolement axoplasme avec minimisation de la contamination tissu glial et vasculaire. La méthode des rendements d&#39;environ 70 à 100 mg de protéines totales par axoplasme une semaine de 80 à 10 Wistar vieux rat. 1. Disséquer nerfs sciatiques <ol><li> Euthanasier deux rats par inhalation de CO 2 suivie par dislocation cervicale. Confirmer la mort par la palpation de l&#39;absence de battement avant la dissection début. </li><li> Nettoyer la zone d...

<ol>
	<li>Hanz, S., Perlson, E., Willis, D., Zheng, J. Q., Massarwa, R., Huerta, J. J., Koltzenburg, M., Kohler, M., van-Minnen, J., Twiss, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axoplasmic+importins+enable+retrograde+injury+signaling+in+lesioned+nerve.">Axoplasmic importins enable retrograde injury signaling in lesioned nerve.</a> Neuron. 40, 1095-1104 (2003).</li><li>Michaelevski, I., Medzihradszky, K. F., Lynn, A., Burlingame, A. L., Fainzilber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+transport+proteomics+reveals+mobilization+of+translation+machinery+to+the+lesion+site+in+injured+sciatic+nerve.">Axonal transport proteomics reveals mobilization of translation machinery to the lesion site in injured sciatic nerve.</a> Mol Cell Proteomics. 9 (5), 976-987 (2010).</li><li>Rishal, I., Michaelevski, I., Rozenbaum, M., Shinder, V., Medzihradszky, K. F., Burlingame, A. L., Fainzilber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axoplasm+isolation+from+peripheral+nerve.">Axoplasm isolation from peripheral nerve.</a> Dev Neurobiol. 70, 126-133 (2010).</li><li>Twiss, J. L., Fainzilber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ribosomes+in+axons--scrounging+from+the+neighbors.">Ribosomes in axons--scrounging from the neighbors.</a> Trends Cell Biol. 19, 236-243 (2009).</li></ol>

Les analyses biochimiques et protéomiques ont confirmé que cette procédure réduit la contamination de cellules gliales sérum et 3 par rapport aux méthodes décrites précédemment pour l&#39;isolement axoplasme de Squeeze mécanique 1. Nous avons utilisé ce protocole d&#39;isolement axoplasme à explorer dynéine basé signalisation rétrograde après lésion du nerf sciatique 2, et s&#39;attendre à ce qu&#39;il ont une utilité dans l&#39;exploration de nombreux autres processus...

<ul><li> Des rats Wistar mâles (8-10 semaines) </li><li> PBS 0,2 X et PBS 1X contenant des solutions inhibiteurs de protéase (Roshe) 2 comprimés par 50 ml </li><li> Eppendorfs pour 1,5 ml </li><li> Stérilisé plats en plastique de 35 mm </li><li> Des outils de dissection, y compris: des ciseaux et des pinces fines </li><li> La lumière binoculaire et la table </li></ul> Anticorps Souris anti-GFAP clone GA-5 a été de Sigma (G6171). Lapin anti-albumine a été d&#39;Cedarlane (CLAG5140). Souris anti-tubuline β3 et de lapin anti-Gerk provenaient de chez Sigma (T2200 et M5670, respectivement).

axoplasm isolation from rat sciatic nerve

Isolement du cytoplasme axonal pur (axoplasme) de nerf périphérique est cruciale pour les études biochimiques de nombreux processus biologiques. Dans cet article, nous démontrons et décrire un protocole pour l&#39;isolement du nerf axoplasme sciatique de rat adulte sur la base des étapes suivantes: (1) la dissection des fascicules nerveux et la séparation des tissus conjonctifs; (2) incubation de courts segments de fascicules nerveux au milieu hypotonique pour libérer de la myéline et Lyse non axonale des structures, et (3) l&#39;extraction de l&#39;axone reste-matériau enrichi. Caractérisation protéomique et biochimique de cette préparation a confirmé un haut degré d&#39;enrichissement pour les composants axonale.

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Axoplasm Isolation from Rat Sciatic Nerve

Nous démontrons un protocole pour l&#39;isolement du nerf axoplasme sciatique de rat adulte repose sur la dissection des fascicules nerveux et l&#39;incubation dans le milieu hypotonique pour libérer de la myéline et Lyse non axonale structures, suivie de l&#39;extraction de l&#39;axone reste-matériau enrichi.

Isolement axoplasme du nerf sciatique du rat

Isolation of pure axonal cytoplasm (axoplasm) from peripheral nerve is crucial for biochemical studies of many biological processes. In this article, we ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Reproductible écrasement du nerf sciatique de souris et l&#39;évaluation subséquente de la régénération par l&#39;analyse du Mont muscle entier

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Recherche

Neurosciences

In Vivo Electrophysiological Measurements on Mouse Sciatic Nerves

In Vivo Electrophysiological Measurements on Mouse Sciatic Nerves

En Vivo mesures électrophysiologiques sur les nerfs sciatiques souris

Electrophysiological studies allow a rational classification of various neuromuscular diseases and are of help, together with neuropathological ...

Minimally-invasive Technique for Injection into Rat Optic Nerve

Technique mini-invasive pour injection dans Rat Optic Nerve

The rat optic nerve is a useful model for stem cell regeneration research. Direct injection into the rat optic nerve allows delivery into the central ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

Enregistrement Potentiel évoqué visuel dans un modèle de rat of Experimental Optic Nerve démyélinisation

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Transfert de gènes à des cellules de Schwann dans le nerf sciatique Rongeur par électroporation

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

In Vivo Electrophysiological Measurement of the Rat Ulnar Nerve with Axonal Excitability Testing

In Vivo Electrophysiological Measurement of the Rat Ulnar Nerve with Axonal Excitability Testing

In Vivo Mesures électrophysiologiques du nerf cubital Rat avec test d’excitabilité axonale

Electrophysiology enables the objective assessment of peripheral nerve function in vivo. Traditional nerve conduction measures such as amplitude and ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

Analyse des cellules immunitaires dans unique des nerfs sciatique et Ganglion de la racine dorsale d’une souris à l’aide de cytométrie en flux

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

Chirurgie du nerf facial dans le modèle de rat pour étudier l’inhibition et la régénération axonales

This protocol describes consistent and reproducible methods to study axonal regeneration and inhibition in a rat facial nerve injury model. The facial ...

Use of In Vivo Single-fiber Recording and Intact Dorsal Root Ganglion with Attached Sciatic Nerve to Examine the Mechanism of Conduction Failure

Utilisation de l'enregistrement in vivo à fibre unique et du ganglion de racine dorsal intact avec le nerf sciatique attaché pour examiner le mécanisme de l'échec de conduction

Single-fiber recording has been a classical and effective electrophysiological technique over the last few decades because of its specific application for ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

Analyse cinématique 3D pour l’évaluation fonctionnelle dans le modèle de rat de la blessure d’écrasement de nerf sciatique

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...