Name: axoplasm isolation from rat sciatic nerve
Uploaded: 2010-09-24T17:00:00
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Dieses Protokoll ermöglicht Axoplasma Isolation mit der Minimierung der Glia-und Gefäßgewebe Kontamination. Die Methode liefert etwa 70-100 ug Gesamt Axoplasma Protein pro 8-10 Wochen alte Wistar-Ratte. 1. Dissect Ischiasnerven <ol><li> Euthanize zwei Ratten durch CO 2-Inhalation durch Genickbruch folgte. Bestätigen Tod durch Palpation wegen fehlender Herzschlag vor Beginn der Dissektion. </li><li> Swab der Präparation mit 70% Ethanol. </li><li> Schneiden Sie die Haut, sepa...

<ol>
	<li>Hanz, S., Perlson, E., Willis, D., Zheng, J. Q., Massarwa, R., Huerta, J. J., Koltzenburg, M., Kohler, M., van-Minnen, J., Twiss, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axoplasmic+importins+enable+retrograde+injury+signaling+in+lesioned+nerve.">Axoplasmic importins enable retrograde injury signaling in lesioned nerve.</a> Neuron. 40, 1095-1104 (2003).</li><li>Michaelevski, I., Medzihradszky, K. F., Lynn, A., Burlingame, A. L., Fainzilber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+transport+proteomics+reveals+mobilization+of+translation+machinery+to+the+lesion+site+in+injured+sciatic+nerve.">Axonal transport proteomics reveals mobilization of translation machinery to the lesion site in injured sciatic nerve.</a> Mol Cell Proteomics. 9 (5), 976-987 (2010).</li><li>Rishal, I., Michaelevski, I., Rozenbaum, M., Shinder, V., Medzihradszky, K. F., Burlingame, A. L., Fainzilber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axoplasm+isolation+from+peripheral+nerve.">Axoplasm isolation from peripheral nerve.</a> Dev Neurobiol. 70, 126-133 (2010).</li><li>Twiss, J. L., Fainzilber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ribosomes+in+axons--scrounging+from+the+neighbors.">Ribosomes in axons--scrounging from the neighbors.</a> Trends Cell Biol. 19, 236-243 (2009).</li></ol>

Biochemische und Proteom-Analysen haben bestätigt, dass dieses Verfahren Serum und Gliazellen Verschmutzungsgrad 3 reduziert wie zuvor beschriebenen Verfahren zur Isolierung Axoplasma durch mechanische Squeeze 1 verglichen. Wir haben diese Axoplasma Isolation Protokoll verwendet, um Dynein-basierte retrograde Signalisierung nach Ischiasnerv Verletzung 2 zu erforschen, und erwarten, dass es Nutzen in der Erforschung von vielen anderen Prozessen in der Erwachsenenbildung peripheren Nerven...

<ul><li> Männliche Wistar-Ratten (8-10 Wochen alt) </li><li> PBS von 0,2 und PBS 1X Lösungen mit Protease-Inhibitoren (Rosche) 2 Tabletten pro 50 ml </li><li> Eppendorfs für 1,5 ml </li><li> Sterilisiert Plastikschalen 35 mm </li><li> Dissecting Tools wie: Schere und feinen Pinzette </li><li> Fernglas und Tischleuchte </li></ul> Antibodies Maus anti-GFAP Klon GA-5 wurde von Sigma (G6171). Kaninchen-anti-Albumin wurde aus Cedarlane (CLAG5140). Maus anti-Tubulin β3 und Kaninchen-Anti-Gerk wurden von Sigma (T2200 und M5670 jeweils).

axoplasm isolation from rat sciatic nerve

Isolierung von reinem axonalen Zytoplasma (Axoplasma) von peripheren Nerven ist entscheidend für biochemische Untersuchungen von vielen biologischen Prozessen. In diesem Artikel zeigen wir, und beschreiben Sie ein Protokoll für Axoplasma Isolierung von adulten Ratten Ischiasnerv auf den folgenden Schritten: (1) Zerlegung der Nervenfaszikel und Trennung von Bindegewebe, (2) Inkubation von kurzen Segmenten Nervenfaszikel in hypotonischen Medium Myelin Freigabe und lysieren nicht axonalen Strukturen, und (3) Extraktion der verbleibenden Axon-angereichertem Material. Proteomik und biochemische Charakterisierung dieser Zubereitung hat einen hohen Grad der Anreicherung für axonale Komponenten bestätigt.

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Axoplasm Isolation from Rat Sciatic Nerve

Wir zeigen, ein Protokoll für Axoplasma Isolierung von adulten Ratten Ischiasnerv auf Dissektion Nervenfaszikel und Inkubation in hypotonischen Medium Myelin Freigabe und lysieren nicht axonaler Strukturen, die durch Extraktion der restlichen Axon-angereichertem Material gefolgt basiert.

Axoplasma Isolation von Rat Ischiasnerv

Isolation of pure axonal cytoplasm (axoplasm) from peripheral nerve is crucial for biochemical studies of many biological processes. In this article, we ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Reproduzierbare Maus Ischiasnerv Crush und anschließende Bewertung der Regeneration von Whole mount Muskelanalyse

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Forschung

Neurowissenschaften

In Vivo Electrophysiological Measurements on Mouse Sciatic Nerves

In Vivo Electrophysiological Measurements on Mouse Sciatic Nerves

In-vivo-Elektrophysiologische Messungen an Maus Ischiasnerven

Electrophysiological studies allow a rational classification of various neuromuscular diseases and are of help, together with neuropathological ...

Minimally-invasive Technique for Injection into Rat Optic Nerve

Minimal-invasive Technik für die Injektion in Ratten-Optic Nerve

The rat optic nerve is a useful model for stem cell regeneration research. Direct injection into the rat optic nerve allows delivery into the central ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

Visuell evozierten Potential-Aufnahme in einem Rattenmodell für Experimentelle Optic Nerve Demyelinisierung

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In vivo - Gentransfer auf Schwann - Zellen in der Nagerischiasnerv durch Elektroporation

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

In Vivo Electrophysiological Measurement of the Rat Ulnar Nerve with Axonal Excitability Testing

In Vivo Electrophysiological Measurement of the Rat Ulnar Nerve with Axonal Excitability Testing

In Vivo Elektrophysiologische Messungen der Ratte ulnaris mit axonalen Erregbarkeit testen

Electrophysiology enables the objective assessment of peripheral nerve function in vivo. Traditional nerve conduction measures such as amplitude and ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

Analyse von Immunzellen in einzelnen Ischias Nerven und Dorsal Root Ganglion aus einem einzigen Mausklick mit Durchflusszytometrie

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

Gesichtsnervenchirurgie im Rattenmodell zur Untersuchung der axonalen Hemmung und Regeneration

This protocol describes consistent and reproducible methods to study axonal regeneration and inhibition in a rat facial nerve injury model. The facial ...

Use of In Vivo Single-fiber Recording and Intact Dorsal Root Ganglion with Attached Sciatic Nerve to Examine the Mechanism of Conduction Failure

Verwendung von In Vivo Single-Faser-Aufnahme und intakten DorsalWurzel Ganglion mit angeschlossenem Ischiasnerv, um den Mechanismus des Leitungsversagens zu untersuchen

Single-fiber recording has been a classical and effective electrophysiological technique over the last few decades because of its specific application for ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

3D Kinematische Analyse zur funktionellen Bewertung im Rattenmodell von Ischias-Nerven-Crush-Verletzungen

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...