Name: axoplasm isolation from rat sciatic nerve
Uploaded: 2010-09-24T17:00:00
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이 프로토콜은 glial 및 혈관 조직 오염의 최소화와 axoplasm 고립 수 있습니다. 방법은 하나의 80~10주 이전 위스타 랫 약 70-100 μg 총 axoplasm 단백질을 산출. 1. 좌골 신경을 해부하다 <ol><li> 자궁 경부 전위 다음 CO 2 흡입하여 두 쥐를 안락사. 처음의 해부하기 전에 심장 박동의 부족에 대한 촉진에 의해 죽음을 확인합니다. </li><li> 면봉 70 % 에탄올로 절개 지역. </li><li> 피?...

<ol>
	<li>Hanz, S., Perlson, E., Willis, D., Zheng, J. Q., Massarwa, R., Huerta, J. J., Koltzenburg, M., Kohler, M., van-Minnen, J., Twiss, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axoplasmic+importins+enable+retrograde+injury+signaling+in+lesioned+nerve.">Axoplasmic importins enable retrograde injury signaling in lesioned nerve.</a> Neuron. 40, 1095-1104 (2003).</li><li>Michaelevski, I., Medzihradszky, K. F., Lynn, A., Burlingame, A. L., Fainzilber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+transport+proteomics+reveals+mobilization+of+translation+machinery+to+the+lesion+site+in+injured+sciatic+nerve.">Axonal transport proteomics reveals mobilization of translation machinery to the lesion site in injured sciatic nerve.</a> Mol Cell Proteomics. 9 (5), 976-987 (2010).</li><li>Rishal, I., Michaelevski, I., Rozenbaum, M., Shinder, V., Medzihradszky, K. F., Burlingame, A. L., Fainzilber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axoplasm+isolation+from+peripheral+nerve.">Axoplasm isolation from peripheral nerve.</a> Dev Neurobiol. 70, 126-133 (2010).</li><li>Twiss, J. L., Fainzilber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ribosomes+in+axons--scrounging+from+the+neighbors.">Ribosomes in axons--scrounging from the neighbors.</a> Trends Cell Biol. 19, 236-243 (2009).</li></ol>

생화학 및 proteomic 분석 기계 쥐어 짜기 1 axoplasm 절연 이전에 설명한 방법에 비해이 절차는 혈청과 glial 세포 오염 3 감소 것으로 확인되었습니다. 우리는 좌골 신경 손상이 후 dynein 기반 역행 신호를 탐험하고 축삭 - glia 상호 작용 4를 포함한 성인 말초 신경 여러 프로세스의 탐사에 유틸리티를 기대이 axoplasm 격리 프로토콜을 사용하고 있습니다.

<ul><li> 남성 위스타 쥐 (80-10주 세) </li><li> 50 ML 당 단백 분해 효소 억제제 (Roshe) 2 타블렛을 포함하는 PBS 0.2X와 PBS 1X 솔루션 </li><li> 1.5 ML에 대한 Eppendorfs </li><li> 플라스틱 접시에게 35mm를 살균 </li><li> 가위와 고급 집게 포함 해부 도구 </li><li> 쌍안경과 테이블 조명 </li></ul> 항체 마우스 방지 GFAP 클론 GA - 5 시그마 (G6171)에서했습니다. 토끼 방지 알부민은 시더 레인 (CLAG5140)에서했습니다. 마우스 방지 Tubulin의 β3와 토끼 방지 gERK은 시그마 (T2200 각각 M5670)에서 있었다.

axoplasm isolation from rat sciatic nerve

주변 신경에서 순수 axonal 세포질 (axoplasm)의 분리는 많은 생물 학적 과정의 생화 학적 연구를 위해 매우 중요합니다. 이 문서에서는, 우리는 입증하고 다음 단계에 따라 성인 쥐의 좌골 신경에서 axoplasm 고립에 대한 프로토콜을 설명 : 신경 fascicles 및 결합 조직의 분리 (1) 절개를, hypotonic 매체 신경 fascicles의 짧은 세그먼트 (2) 인큐베이션 myelin을 릴리스 및 비 axonal 구조를 lyse을하며, (3) 남아있는 축삭 - 풍부한 자료의 추출. 이 준비 Proteomic 및 생화 학적 특성은 axonal 구성 요소에 대한 농축 높은 학위를 확인했습니다.

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Axoplasm Isolation from Rat Sciatic Nerve

우리는 myelin를 공개하고 나머지 축삭 - 풍부한 자료의 추출 다음 비 axonal 구조를 lyse에 hypotonic 매체 신경 fascicles과 부화 해부에 따라 성인 쥐의 좌골 신경에서 axoplasm 절연을위한 프로토콜을 보여줍니다.

쥐 좌골 신경에서 Axoplasm 격리

Isolation of pure axonal cytoplasm (axoplasm) from peripheral nerve is crucial for biochemical studies of many biological processes. In this article, we ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

전체 마운트 근육 분석에 의한 재현성 마우스 좌골 신경 크러시와 중생의 후속 평가

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

연구

신경과학

In Vivo Electrophysiological Measurements on Mouse Sciatic Nerves

In Vivo Electrophysiological Measurements on Mouse Sciatic Nerves

마우스 좌골 신경에 생체 전기 생리 측정에서

Electrophysiological studies allow a rational classification of various neuromuscular diseases and are of help, together with neuropathological ...

Minimally-invasive Technique for Injection into Rat Optic Nerve

쥐 시신경에 주입을위한 최소 침습 기술

The rat optic nerve is a useful model for stem cell regeneration research. Direct injection into the rat optic nerve allows delivery into the central ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

실험 시신경의 탈수 초화의 쥐 모델에서 시각 유발 전위 기록

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

Electroporation에 의해 쥐 좌골 신경의 슈반 세포로 생체 내 유전자 전달에

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

In Vivo Electrophysiological Measurement of the Rat Ulnar Nerve with Axonal Excitability Testing

In Vivo Electrophysiological Measurement of the Rat Ulnar Nerve with Axonal Excitability Testing

Vivo에서 Axonal 흥분 테스트 쥐 척 골 신경의 electrophysiological 측정

Electrophysiology enables the objective assessment of peripheral nerve function in vivo. Traditional nerve conduction measures such as amplitude and ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

단일 좌 골 신경 및 Cytometry 사용 하 여 단일 마우스에서 지 루트 신경 절에 면역 세포의 분석

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

축축한 억제 및 재생을 연구하는 쥐 모델의 안면 신경 수술

This protocol describes consistent and reproducible methods to study axonal regeneration and inhibition in a rat facial nerve injury model. The facial ...

Use of In Vivo Single-fiber Recording and Intact Dorsal Root Ganglion with Attached Sciatic Nerve to Examine the Mechanism of Conduction Failure

전도 실패의 메커니즘을 검사하기 위해 연결된 Sciatic 신경을 가진 생체 내 단일 섬유 기록 및 손상되지 않은 등철 루트 신경절의 사용

Single-fiber recording has been a classical and effective electrophysiological technique over the last few decades because of its specific application for ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

Sciatic 신경 호감 상해의 쥐 모형에 있는 기능 평가를 위한 3D 운동학 분석

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...