Name: axoplasm isolation from rat sciatic nerve
Uploaded: 2010-09-24T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Axoplasm Isolation from Rat Sciatic Nerve at JoVE.com

Detta protokoll möjliggör axoplasm isolering med minimering av stödjeceller och kärlvävnad föroreningar. Metoden ger cirka 70-100 mikrogram totalt axoplasm protein per en 8-10 vecka gammal Wistar råtta. 1. Dissekera ischiasliknande Nerver <ol><li> Euthanize två råttor av CO 2 inandning följt av halsdislokation. Bekräfta döds av palperas för bristande hjärtslag innan du börjar dissekering. </li><li> Tvätta dissektion området med 70% etanol. </li><li> Skär huden,...

<ol>
	<li>Hanz, S., Perlson, E., Willis, D., Zheng, J. Q., Massarwa, R., Huerta, J. J., Koltzenburg, M., Kohler, M., van-Minnen, J., Twiss, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axoplasmic+importins+enable+retrograde+injury+signaling+in+lesioned+nerve.">Axoplasmic importins enable retrograde injury signaling in lesioned nerve.</a> Neuron. 40, 1095-1104 (2003).</li><li>Michaelevski, I., Medzihradszky, K. F., Lynn, A., Burlingame, A. L., Fainzilber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+transport+proteomics+reveals+mobilization+of+translation+machinery+to+the+lesion+site+in+injured+sciatic+nerve.">Axonal transport proteomics reveals mobilization of translation machinery to the lesion site in injured sciatic nerve.</a> Mol Cell Proteomics. 9 (5), 976-987 (2010).</li><li>Rishal, I., Michaelevski, I., Rozenbaum, M., Shinder, V., Medzihradszky, K. F., Burlingame, A. L., Fainzilber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axoplasm+isolation+from+peripheral+nerve.">Axoplasm isolation from peripheral nerve.</a> Dev Neurobiol. 70, 126-133 (2010).</li><li>Twiss, J. L., Fainzilber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ribosomes+in+axons--scrounging+from+the+neighbors.">Ribosomes in axons--scrounging from the neighbors.</a> Trends Cell Biol. 19, 236-243 (2009).</li></ol>

Biokemisk och proteomik analyser har bekräftat att detta förfarande minskar serum och gliacellsmarkörer kontamination 3 jämfört med tidigare beskrivna metoder för axoplasm isolering genom mekanisk klämma 1. Vi har använt denna axoplasm isolering protokoll att utforska dynein-baserade retrograd signalering efter ischiasnerven skada 2, och förväntar sig att ha nytta i utforskandet av många andra processer i vuxen perifer nerv, inklusive axon-Glia interaktioner 4.

<ul><li> Man Wistar råttor (8-10 veckor) </li><li> PBS 0,2 X och PBS 1X lösningar innehållande proteashämmare (Roshe) 2 tabletter per 50 ml </li><li> Eppendorfs för 1,5 ml </li><li> Steriliserad plastskålar 35 mm </li><li> Analysera verktyg inklusive: sax och fin pincett </li><li> Kikare och bordslampa </li></ul> Antikroppar Mus-anti-GFAP klon GA-5 var från Sigma (G6171). Kanin anti-Albumin var från Cedarlane (CLAG5140). Mus-anti-tubulin β3 och kanin anti-gERK var från Sigma (T2200 och M5670 respektive).

axoplasm isolation from rat sciatic nerve

Isolering av ren axonal cytoplasma (axoplasm) från perifer nerv är avgörande för biokemiska studier av många biologiska processer. I den här artikeln visar vi och beskriva ett protokoll för axoplasm isolering från vuxna råttor ischiasnerven bygger på följande steg: (1) dissekering av nerv fascicles och separation av bindväv, (2) inkubering av korta segment av nerven fascicles i hypoton medelstora att släppa myelin och Lyse icke-axonal strukturer, och (3) utvinning av kvarvarande axon berikade material. Proteomik och biokemisk karakterisering av detta preparat har bekräftat en hög grad av anrikning för axonal komponenter.

Watch this Scientific Journal Video about Axoplasm Isolation from Rat Sciatic Nerve at JoVE.com

Axoplasm Isolation from Rat Sciatic Nerve

Vi visar ett protokoll för axoplasm isolering från vuxna råttor ischiasnerven bygger på dissekering av nerv fascicles och inkubation i hypoton medel för att släppa myelin och Lyse icke-axonal strukturer, följt av extraktion av kvarvarande axon berikade material.

Axoplasm Isolering från Rat ischiasnerven

Isolation of pure axonal cytoplasm (axoplasm) from peripheral nerve is crucial for biochemical studies of many biological processes. In this article, we ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Reproducerbar Mouse ischiasnerv krossa och påföljande bedömningen av Regeneration av Whole Mount Muscle Analys

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

In Vivo Electrophysiological Measurements on Mouse Sciatic Nerves

In Vivo Electrophysiological Measurements on Mouse Sciatic Nerves

In Vivo Elektro Mätningar på Mouse ischiasnerver

Electrophysiological studies allow a rational classification of various neuromuscular diseases and are of help, together with neuropathological ...

Minimally-invasive Technique for Injection into Rat Optic Nerve

Minimal-invasiv teknik för injektion i Rat Optic Nerve

The rat optic nerve is a useful model for stem cell regeneration research. Direct injection into the rat optic nerve allows delivery into the central ...

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

Visual evoked potential inspelning i en råttmodell av experimentell Optic Nerve Demyelinisering

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

In Vivo Gene Transfer to Schwann Cells in the Rodent Sciatic Nerve by Electroporation

Genöverföring in vivo till Schwann-celler i gnagare ischiasnerven genom elektroporering

The formation of the myelin sheath by Schwann cells (SCs) is essential for rapid conduction of nerve impulses along axons in the peripheral nervous ...

In Vivo Electrophysiological Measurement of the Rat Ulnar Nerve with Axonal Excitability Testing

In Vivo Electrophysiological Measurement of the Rat Ulnar Nerve with Axonal Excitability Testing

In Vivo Elektrofysiologisk mätning av råtta ulnarisnerven med Axonal retbarhet testning

Electrophysiology enables the objective assessment of peripheral nerve function in vivo. Traditional nerve conduction measures such as amplitude and ...

Analysis of Immune Cells in Single Sciatic Nerves and Dorsal Root Ganglion from a Single Mouse Using Flow Cytometry

Analys av immunceller i enda höftnerver och dorsalrotsganglier Ganglion från ett enda musklick med hjälp av flödescytometri

Nerve-resident immune cells in the peripheral nervous system (PNS) are essential to maintaining neuronal integrity in a healthy nerve. The immune cells of ...

Facial Nerve Surgery in the Rat Model to Study Axonal Inhibition and Regeneration

Facial nervkirurgi i råtta modell för att studera axonal hämning och regenerering

This protocol describes consistent and reproducible methods to study axonal regeneration and inhibition in a rat facial nerve injury model. The facial ...

Use of In Vivo Single-fiber Recording and Intact Dorsal Root Ganglion with Attached Sciatic Nerve to Examine the Mechanism of Conduction Failure

Användning av in vivo Single-fiber inspelning och intakt dorsala root ganglion med bifogade ischiasnerven att undersöka mekanismen för överledning misslyckande

Single-fiber recording has been a classical and effective electrophysiological technique over the last few decades because of its specific application for ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

3D Kinematic Analys för funktionell utvärdering i Rat Modell av Sciatic Nerve Crush Skada

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...