Name: studying the effects of matrix stiffness on cellular function using acrylamide-based hydrogels
Uploaded: 2010-08-10T17:00:00
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काम है हमारी प्रयोगशाला के राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान से अनुदान द्वारा समर्थित है.

तैयार <ul><li> Coverslips autoclaved होना चाहिए. </li><li> बाँझ आसुत या विआयनीकृत जल के समाधान तैयार करने और coverslips धोने के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए. </li><li> (40% w / v) एसी और बीआईएस एसी (1% w / ध्) समाधान 0.2 सुक्ष्ममापी निस्पंदन द्वारा निष्...

<ol>
	<li>Beattie, D., Xu, C., Vito, R., Glagov, S., Whang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+analysis+of+heterogeneous,+atherosclerotic+human+aorta.">Mechanical analysis of heterogeneous, atherosclerotic human aorta.</a> J Biomech Eng. 120, 602-607 (1998).</li><li>Bernini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+stiffness,+intima-media+thickness+and+carotid+artery+fibrosis+in+patients+with+primary+aldosteronism.">Arterial stiffness, intima-media thickness and carotid artery fibrosis in patients with primary aldosteronism.</a> J Hypertens. 26, 2399-2405 (2008).</li><li>Boonyasirinant, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aortic+stiffness+is+increased+in+hypertrophic+cardiomyopathy+with+myocardial+fibrosis:+novel+insights+in+vascular+function+from+magnetic+resonance+imaging.">Aortic stiffness is increased in hypertrophic cardiomyopathy with myocardial fibrosis: novel insights in vascular function from magnetic resonance imaging.</a> J Am Coll Cardiol. 54, 255-2562 (2009).</li><li>Discher, D. E., Janmey, P., Wang, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+cells+feel+and+respond+to+the+stiffness+of+their+substrate.">Tissue cells feel and respond to the stiffness of their substrate.</a> Science. 310, 1139-1143 (2005).</li><li>Duprez, D. A., Cohn, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+stiffness+as+a+risk+factor+for+coronary+atherosclerosis.">Arterial stiffness as a risk factor for coronary atherosclerosis.</a> Curr Atheroscler Rep. 9, 139-144 (2007).</li><li>Lee, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+of+mechanical+properties+of+human+atherosclerotic+tissue+by+high-frequency+intravascular+ultrasound+imaging.+An+in+vitro+study.">Prediction of mechanical properties of human atherosclerotic tissue by high-frequency intravascular ultrasound imaging. An in vitro study.</a> Arterioscler Thromb. 12, 1-5 (1992).</li><li>Levental, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+crosslinking+forces+tumor+progression+by+enhancing+integrin+signaling.">Matrix crosslinking forces tumor progression by enhancing integrin signaling.</a> Cell. 139, 891-906 (2009).</li><li>Paszek, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tensional+homeostasis+and+the+malignant+phenotype.">Tensional homeostasis and the malignant phenotype.</a> Cancer Cell. 8, 241-254 (2005).</li><li>Samani, A., Zubovits, J., Plewes, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+moduli+of+normal+and+pathological+human+breast+tissues:+an+inversion-technique-based+investigation+of+169+samples.">Elastic moduli of normal and pathological human breast tissues: an inversion-technique-based investigation of 169 samples.</a> Phys Med Biol. 52, 1565-1576 (2007).</li><li>Wells, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+matrix+stiffness+in+regulating+cell+behavior.">The role of matrix stiffness in regulating cell behavior.</a> Hepatology. 47, 1394-1400 (2008).</li><li>Pelham, R. J., Wang, Y. -. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+locomotion+and+focal+adhesions+are+regulated+by+substrate+flexibility.">Cell locomotion and focal adhesions are regulated by substrate flexibility.</a> Proc. Natl. Acad Sci USA. 94, 13661-13665 (1997).</li><li>Klein, E. A., Yung, Y., Castagnino, P., Kothapalli, D., Assoian, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+adhesion,+cellular+tension,+and+cell+cycle+control.">Cell adhesion, cellular tension, and cell cycle control.</a> Methods Enzymol. 426, 155-175 (2007).</li><li>Klein, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-cycle+control+by+physiological+matrix+elasticity+and+in+vivo+tissue+stiffening.">Cell-cycle control by physiological matrix elasticity and in vivo tissue stiffening.</a> Current Biology. 19, 1511-1518 (2009).</li></ol>

Hydrogel polymerization की प्रक्रिया का एक महत्वपूर्ण तत्व हवा बुलबुला गठन है जो कोशिकाओं को ECM-लेपित ही hydrogel बजाय कांच coverslip करने के लिए बाध्य करने के लिए अनुमति देगा से बचने के है. यह ध्यान से polymerization के समाधान pipetting बाद vortexing औ?...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Glutaraldehyde, 70%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>G7776</td>
<td>Store at -20&deg;C</td>
</tr>
<tr>
<td>3-APTMS (3-Aminopropyltrimethosysilane 97%)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>281778</td>
<td>Store at room temperature</td>
</tr>
<tr>
<td>SurfaSil Siliconizing Fluid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>42800</td>
<td>Store at room temperature</td>
</tr>
<tr>
<td>NHS (N-hydroxysucinimide Ester)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A-8060</td>
<td>Store at 4&deg;C Replace monthly</td>
</tr>
<tr>
<td>Albumin, bovine serum, essentially fatty acid free</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>A6003-100G</td>
<td>Store at 4&deg;C</td>
</tr>
<tr>
<td>Coverslips (25mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-545-86 25 Cir 1D</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips (18mm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-545-84 18 Cir 1D</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

studying the effects of matrix stiffness on cellular function using acrylamide-based hydrogels

ऊतक कठोरता सेलुलर समारोह का एक महत्वपूर्ण निर्धारक है, और ऊतक कठोरता में परिवर्तन सामान्यतः तंतुमयता, कैंसर और हृदय रोग 1-11 के साथ जुड़े रहे हैं . पारंपरिक सेल सेलुलर समारोह का अध्ययन जैविक दृष्टिकोण संवर्धन कोशिकाओं (प्लास्टिक के बर्तन या कांच coverslips) एक कठोर बुनियाद पर जो एक लोचदार ईसीएम या ऊतकों के बीच ECM कठोरता में बदलाव के प्रभाव के लिए खाते में नहीं कर सकते हैं शामिल हैं. इन विट्रो में vivo ऊतक अनुपालन की स्थिति में मॉडल करने के लिए, और हम दूसरों ECM-लेपित hydrogels उपयोग. हमारी प्रयोगशाला में, hydrogels polyacrylamide जो ऊतक 12 जैविक देखा अनुपालन की सीमा की नकल कर सकते पर आधारित हैं. &quot;प्रतिक्रियाशील&quot; कवर फिसल जाता है NaOH साथ ऊष्मायन 3 APTMS के अलावा द्वारा पीछा द्वारा उत्पन्न कर रहे हैं. Glutaraldehyde 3-APTMS और polyacrylamide जेल पार से लिंक के लिए प्रयोग किया जाता है. (एसी) acrylamide, बीआईएस acrylamide (बीआईएस - एसी) और अमोनियम persulfate के समाधान hydrogel के polymerization के लिए प्रयोग किया जाता है. एन hydroxysuccinimide (एनएचएस) एसी crosslink ईसीएम hydrogel करने के लिए प्रोटीन के समाधान में शामिल है. Hydrogel के polymerization के बाद, जेल सतह fibronectin, vitronectin, मज्जा, आदि जैसे पसंद का एक ECM प्रोटीन के साथ लेपित है एक hydrogel की कठोरता rheology या परमाणु शक्ति माइक्रोस्कोपी (AFM) द्वारा निर्धारित किया जा सकता है और 12 समाधान में एसी और / या बीआईएस - एसी का प्रतिशत अलग से समायोजित . इस तरीके में, बुनियाद कठोरता जो भी rheology या AFM का उपयोग मात्रा निर्धारित किया जा सकता है जैविक ऊतकों की कठोरता के लिए मिलान किया जा सकता है. कोशिकाओं तो इन hydrogels और सुसंस्कृत प्रयोगात्मक आवश्यक शर्तों पर आधारित पर वरीयता प्राप्त किया जा सकता है. कोशिकाओं और आणविक विश्लेषण के लिए उनकी वसूली की इमेजिंग सीधा है. इस लेख के लिए, हम उन 20,000 पास्कल &lt;ई के साथ उन लोगों के रूप में 3000 पास्कल और कड़ी substrata / ऊतकों&gt; लोचदार (ई) के moduli होने के रूप में नरम substrata परिभाषित.

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Studying the Effects of Matrix Stiffness on Cellular Function using Acrylamide-based Hydrogels

सेलुलर समारोह पर substrata कठोरता के प्रभाव modeled किया जा सकता है<em&gt; इन विट्रो में</em&gt; अनुपालन बदलती के polyacrylamide hydrogels का उपयोग.

मैट्रिक्स कठोरता के सेलुलर Acrylamide-आधारित Hydrogels का उपयोग कर समारोह पर प्रभाव का अध्ययन

Tissue stiffness is an important determinant of cellular function, and changes in tissue stiffness are commonly associated with fibrosis, cancer and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Microinjection Techniques for Studying Mitosis in the Drosophila melanogaster Syncytial Embryo

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This protocol describes the use of the Drosophila melanogaster syncytial embryo  for studying mitosis1.  Drosophila has useful genetics with a sequenced ...

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ऊतक इंजीनियरिंग के लिए 3 डी Hydrogels में सेलुलर इनकैप्सुलेशन

The 3D encapsulation of cells within hydrogels represents an increasingly important and popular technique for culturing cells and towards the development ...

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बैक्टीरियल कोशिकाओं के झुका कठोरता मापने एक ऑप्टिकल जाल का प्रयोग

We developed a protocol to measure the bending rigidity of filamentous rod-shaped bacteria. Forces are applied with an optical trap, a microscopic ...

Identifying the Effects of BRCA1 Mutations on Homologous Recombination using Cells that Express Endogenous Wild-type BRCA1

कोशिकाओं है कि एक्सप्रेस अंतर्जात बीआरसीए 1 जंगली प्रकार का उपयोग मुताबिक़ पुनर्संयोजन पर बीआरसीए 1 उत्परिवर्तन के प्रभाव की पहचान

The functional analysis of missense mutations can be complicated by the presence in the cell of the endogenous protein. Structure-function analyses of the ...

Analyzing the Function of Small GTPases by Microinjection of Plasmids into Polarized Epithelial Cells

प्लास्मिड के Microinjection द्वारा Polarized उपकला कोशिकाओं में छोटे GTPases के फंक्शन का विश्लेषण

Epithelial cells polarize their plasma membrane into biochemically and functionally distinct apical and basolateral domains where the apical domain faces ...

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Mitochondrial श्वसन समारोह के विज़ुअलाइज़ेशन साइटोक्रोम का उपयोग सी डिहाइड्रोजनेज / oxidase Succinate (/ कॉक्स SDH) डबल - लेबलिंग ऊतकरसायनशास्त्र

Mitochondrial DNA (mtDNA) defects are an important cause of disease and may underlie aging and aging-related alterations 1,2. The mitochondrial theory of ...

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निर्धारित गैसीय वातावरण बनाना पर Hypoxia के प्रभाव का अध्ययन<em&gt; सी. एलिगेंस</em

Oxygen is essential for all metazoans to survive, with one known exception1. Decreased O2 availability (hypoxia) can arise during states of disease, ...

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पर बैक्टीरिया के प्रभाव को मापने<em&gt; सी. एलिगेंस</emएक अंडा प्रतिधारण परख का उपयोग&gt; व्यवहार

C. elegans egg-laying behavior is  affected by environmental cues such as osmolarity1 and  vibration2. In the total absence of food C. elegans also cease ...

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Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

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