Name: toxoplasma gondii cyst wall formation in activated bone marrow-derived macrophages and bradyzoite conditions
Uploaded: 2010-08-12T17:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل جامعة ويسكونسن ماديسون هيرمان أولا شابيرو زمالة دراسات عليا المميز (CMT) ، المعاهد الوطنية للصحة جائزة AI072817 (AMP) ، والاميركي جائزة جمعية القلب 0840059N (LJK).

1. إعداد الإنسان الليفية القلفة (HFF) المغلفة coverslips <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان معقم ساترة زجاجية مستديرة حول الجزء السفلي من الآبار لوحة نسيج الثقافة 24 أيضا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لحصاد HFFs من قارورة 2 150cm متموجة ، وشطف القارورة مرتي...

<ol>
	<li>Tomida, M., Yamamoto-Yamaguchi, Y., Hozumi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+a+factor+inducing+differentiation+of+mouse+myeloid+leukemic+M1+cells+from+conditioned+medium+of+mouse+fibroblast+L929+cells.">Purification of a factor inducing differentiation of mouse myeloid leukemic M1 cells from conditioned medium of mouse fibroblast L929 cells.</a> J Biol Chem. 259 (17), 10978-10980 (1984).</li><li>Matrajt, M., Donald, R. G., Singh, U., Roos, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+differentiation+mutants+in+the+protozoan+parasite+Toxoplasma+gondii.">Identification and characterization of differentiation mutants in the protozoan parasite Toxoplasma gondii.</a> Mol Microbiol. 44, 735-747 (2002).</li><li>Singh, U., Brewer, J. L., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+tachyzoite+to+bradyzoite+differentiation+mutants+in+Toxoplasma+gondii+reveals+a+hierarchy+of+gene+induction.">Genetic analysis of tachyzoite to bradyzoite differentiation mutants in Toxoplasma gondii reveals a hierarchy of gene induction.</a> Mol Microbiol. 44, 721-733 (2002).</li><li>J, P., Knoll, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Toxoplasma+gondii+development+mutants+identifies+a+potential+proteophosphogylcan+that+enhances+cyst+wall+formation.+Molecular+and+Biochemical+Parasitology.">Isolation of Toxoplasma gondii development mutants identifies a potential proteophosphogylcan that enhances cyst wall formation. Molecular and Biochemical Parasitology.</a> 169 (2), 120-123 (2010).</li><li>Bohne, W., Heesemann, J., Gross, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Bradyzoite-Specific+Toxoplasma+gondii+Antigens+in+Gamma+Interferon-Treated+Mouse+Macrophages.">Induction of Bradyzoite-Specific Toxoplasma gondii Antigens in Gamma Interferon-Treated Mouse Macrophages.</a> Infection and Immunity. 61 (3), 1141-1145 (1993).</li><li>Ibrahim, H. M., Bannai, H., Xuan, X., Nishikawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxoplasma+gondii+Cyclophilin+18-Mediated+Production+of+Nitric+Oxide+Induces+Bradyzoite+Conversion+in+a+CCR5-Dependent+Manner.">Toxoplasma gondii Cyclophilin 18-Mediated Production of Nitric Oxide Induces Bradyzoite Conversion in a CCR5-Dependent Manner.</a> Infection and Immunity. 77 (9), 3686-3695 (2009).</li><li>Lyons, R. E., McLeod, R., Roberts, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxoplasma+gondii+tachyzoite-bradyzoite+interconversion.">Toxoplasma gondii tachyzoite-bradyzoite interconversion.</a> Trends in Parasitology. 18 (5), 198-201 (2002).</li><li>Berghaus, L. J., Moore, J. N., Hurley, D. J., Vandenplas, M. L., Fortes, B. P., Wolfert, M. A., Boons, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immune+responses+of+primary+murine+macrophage-lineage+cells+and+RAW+264.7+cells+to+ligands+of+Toll-like+receptors+2,+3,+and+4.">Innate immune responses of primary murine macrophage-lineage cells and RAW 264.7 cells to ligands of Toll-like receptors 2, 3, and 4.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. , (2009).</li><li>Mordue, D. G., Scott-Weathers, C. F., Tobin, C. M., Knoll, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+patatin-like+protein+protects+Toxoplasma+gondii+from+degradation+in+activated+macrophages.">A patatin-like protein protects Toxoplasma gondii from degradation in activated macrophages.</a> Mol Microbiol. 63 (2), 482-496 (2007).</li><li>Bohne, W., Heesemann, J., Gross, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+replication+of+Toxoplasma+gondii+is+necessary+for+induction+of+bradyzoite-specific+antigens:+a+possible+role+for+nitric+oxide+in+triggering+stage+conversion.">Reduced replication of Toxoplasma gondii is necessary for induction of bradyzoite-specific antigens: a possible role for nitric oxide in triggering stage conversion.</a> Infection and Immunity. 62 (5), 1761-1777 (1994).</li></ol>

في حين ليست آلية التنمية المتباطئة مفهومة تماما ، والتحليلات الجينية الجزيئية ت. وقد أدى الغوندية مرحلة التحويل في مجال زراعة الأنسجة إلى اكتشاف الجينات التي تشارك في تشكيل كيسة المتباطئة 2،3،4. التحليلات أدى أيضا إلى ملاحظة أن يتم التعبير عن بعض علام?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Bovine serum albumin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A7906</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>11960-051</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Atlanta Biologicals</td>
<td>S11150</td>
<td>heat inactivate </td>
</tr>
<tr>
<td>Rhodamine Dolichos biflorus agglutinin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>RL-1032</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formaldehyde (16%)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Polysciences</td>
<td>18814</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glycine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>BP381-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HEPES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>BP310-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IFN&gamma;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PeproTech</td>
<td>315-05</td>
<td>Store in single use aliquots</td>
</tr>
<tr>
<td>L-glutamine (200mM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25030</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lipopolysaccharide (LPS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>L4391-1MG</td>
<td>Store in single use aliquots</td>
</tr>
<tr>
<td>Microscope Cover Glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-545-80 12CIR-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI medium 1640 powder (with L-glutamine, without bicarbonate)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>31800-022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Triton-X-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>BP151-500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>VectaShield mounting media with DAPI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H-1200</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

toxoplasma gondii cyst wall formation in activated bone marrow-derived macrophages and bradyzoite conditions

المقوسة الغوندية هو طفيلي تلزم بين الخلايا التي يمكن أن تغزو أي خلية الأنوية من الحيوانات من ذوات الدم الحار. خلال العدوى ، T. كما تنشر الغوندية شكل سريع تكرار يسمى tachyzoite. Tachyzoites تحويلها الى شكل بطيء النمو المتباطئة متكيس يسمى بعملية الإشارات التي لا تتميز بشكل جيد. داخل الحيوانات ، تم العثور على أكياس المتباطئة في النظام العصبي المركزي والأنسجة العضلية وتمثل المرحلة المزمنة من المرض. يمكن تحويلها إلى bradyzoites تكون محاكاة في مجال زراعة الأنسجة عن طريق التجويع CO 2 ، وذلك باستخدام المتوسطة مع الحموضة عالية ، أو إضافة انترفيرون غاما (IFNγ). تتميز Bradyzoites عن وجود جدار الكيس ، والتي lectin Dolichos biflorus راصة (DBA) بربط. يستخدم DBA fluorescently المسمى لتصور جدار الكيس في الطفيليات التي تزرع في الخلايا الليفية الإنسان القلفة (HFFs) التي تعرضت لانخفاض CO 2 ، وارتفاع متوسط ​​درجة الحموضة. وبالمثل ، والطفيليات المقيمين في نخاع العظام المستمدة من الفئران الضامة (BMMs) عرض الحائط كيسة كشفها بواسطة DBA بعد تنشيط BMMs مع IFNγ وlipopolysaccharide (LPS). وهذا البروتوكول لشرح كيفية إحداث تحويل T. الغوندية لbradyzoites باستخدام الرقم الهيدروجيني نمو عالية متوسطة منخفضة مع CO 2 وتفعيل BMMs. وسيتم تربيتها في الخلايا المضيفة coverslips ، tachyzoites المصابين هم من يمكنهم إما مع اضافة IFNγ وLPS (BMMs) أو تعرضها لدرجة الحموضة المتوسطة النمو العالية (HFFs) لمدة ثلاثة أيام. عند الانتهاء من العدوى ، وسوف تكون ثابتة الخلايا المضيفة ، permeabilized ، وحظرها. وسيتم استخدام الجدران كيسة تصور DBA رودامين مع المجهري مضان.

Watch this Scientific Journal Video about Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions at JoVE.com

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

المقوسة الغوندية يحول الى شكل كيس ردا على الضغوط البيئية ، والتي يمكن في نماذج تحاكي زراعة الأنسجة. هذا الفيديو يوضح التقنيات لدراسة تشكيل جدار الكيس عن طريق تنشيط نخاع العظام المستمدة الضامة أو تغيير درجة الحموضة المتوسطة النمو في الخلايا الليفية.

التوكسوبلازما جدار الكيس الغوندية تشكيل المنشط تقوم البلاعم في نخاع العظام والمستمدة من الشروط المتباطئة

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that can invade any nucleated cell of warm-blooded animals. During infection, T. gondii ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Obtaining Highly Purified Toxoplasma gondii Oocysts by a Discontinuous Cesium Chloride Gradient

Obtaining Highly Purified Toxoplasma gondii Oocysts by a Discontinuous Cesium Chloride Gradient

الحصول على عالي النقاء المقوسة الغوندية البيضات من قبل التدرج كلوريد السيزيوم متقطع

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan pathogen that commonly infects humans. It is a well characterized apicomplexan associated with ...

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear الفئران مع الخصوصيات المحددة مسبقا ضد مستقبلات الخلايا T المقوسة الغوندية الحصول عليها عن طريق SCNT

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

جيل ووسمها الفئران خلايا نخاع العظام المستمدة من البلورات النانوية مع شجيري Qdot تتبع للدراسات

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

A Genetic Screen to Isolate Toxoplasma gondii Host-cell Egress Mutants

A Genetic Screen to Isolate Toxoplasma gondii Host-cell Egress Mutants

شاشة الوراثية لعزل التوكسوبلازما جوندياي المسوخ الخروج المضيف الخلية

The widespread, obligate intracellular, protozoan parasite Toxoplasma gondii causes opportunistic disease in immuno-compromised patients and causes birth ...

Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages

التحقيق في الاستقطاب البلاعم عن طريق نخاع العظم الضامة المشتقة

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic ...

Genetic Manipulation in &Delta;ku80 Strains for Functional Genomic Analysis of Toxoplasma gondii

Genetic Manipulation in ÃƒÅ½Ã¢â‚¬Âku80 Strains for Functional Genomic Analysis of Toxoplasma gondii

التلاعب الجيني في<em&gt; Δku80</em&gt; سلالات لتحليل الجينوم الوظيفي لل<em&gt; التوكسوبلازما جوندياي</em

Targeted genetic manipulation using homologous recombination is the method of choice for functional genomic analysis to obtain a detailed view of gene ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

كمي<em&gt; في المختبر</em&gt; الفحص لقياس التصاق العدلات إلى تنشيط الخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة الإنسان الأساسية بموجب الشروط ثابت

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Bone Marrow-derived Macrophage Production

نخاع العظام المستمدة من بلعم الإنتاج

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

عزل وحقن في الوريد من الفئران نخاع العظام المستمدة حيدات

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Forward Genetics Screens Using Macrophages to Identify Toxoplasma gondii Genes Important for Resistance to IFN-&#947;-Dependent Cell Autonomous Immunity

Forward Genetics Screens Using Macrophages to Identify Toxoplasma gondii Genes Important for Resistance to IFN-ÃƒÅ½Ã‚Â³-Dependent Cell Autonomous Immunity

الى الامام علم الوراثة شاشات طريق الضامة لتحديد<em&gt; التوكسوبلازما</em&gt; الجينات هامة الحصانة الذاتية للمقاومة إلى الإنترفيرون γ التي تعتمد على خلية

Toxoplasma gondii, the causative agent of toxoplasmosis, is an obligate intracellular protozoan pathogen. The parasite invades and replicates within ...