Name: toxoplasma gondii cyst wall formation in activated bone marrow-derived macrophages and bradyzoite conditions
Uploaded: 2010-08-12T17:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions at JoVE.com

Эта работа была поддержана Университета Висконсин-Мэдисон Герман И. Шапиро Уважаемые стипендий (CMT), NIH награду AI072817 (AMP) и Американской ассоциации сердца премии 0840059N (LJK).

1. Подготовка человеческие фибробласты крайней плоти (HFF)-покрытием покровные <ol><li> Место стерильные круглые покровного стекла на дне лунки 24-луночного планшета для культуры ткани. </li><li> Для уборки HFFS из сливной 150см 2 колбы, промыть колбу дважды 1X PBS и добавить 2,5 мл 0,025% трипсина-EDTA. ...

<ol>
	<li>Tomida, M., Yamamoto-Yamaguchi, Y., Hozumi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+a+factor+inducing+differentiation+of+mouse+myeloid+leukemic+M1+cells+from+conditioned+medium+of+mouse+fibroblast+L929+cells.">Purification of a factor inducing differentiation of mouse myeloid leukemic M1 cells from conditioned medium of mouse fibroblast L929 cells.</a> J Biol Chem. 259 (17), 10978-10980 (1984).</li><li>Matrajt, M., Donald, R. G., Singh, U., Roos, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+differentiation+mutants+in+the+protozoan+parasite+Toxoplasma+gondii.">Identification and characterization of differentiation mutants in the protozoan parasite Toxoplasma gondii.</a> Mol Microbiol. 44, 735-747 (2002).</li><li>Singh, U., Brewer, J. L., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+tachyzoite+to+bradyzoite+differentiation+mutants+in+Toxoplasma+gondii+reveals+a+hierarchy+of+gene+induction.">Genetic analysis of tachyzoite to bradyzoite differentiation mutants in Toxoplasma gondii reveals a hierarchy of gene induction.</a> Mol Microbiol. 44, 721-733 (2002).</li><li>J, P., Knoll, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+Toxoplasma+gondii+development+mutants+identifies+a+potential+proteophosphogylcan+that+enhances+cyst+wall+formation.+Molecular+and+Biochemical+Parasitology.">Isolation of Toxoplasma gondii development mutants identifies a potential proteophosphogylcan that enhances cyst wall formation. Molecular and Biochemical Parasitology.</a> 169 (2), 120-123 (2010).</li><li>Bohne, W., Heesemann, J., Gross, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Bradyzoite-Specific+Toxoplasma+gondii+Antigens+in+Gamma+Interferon-Treated+Mouse+Macrophages.">Induction of Bradyzoite-Specific Toxoplasma gondii Antigens in Gamma Interferon-Treated Mouse Macrophages.</a> Infection and Immunity. 61 (3), 1141-1145 (1993).</li><li>Ibrahim, H. M., Bannai, H., Xuan, X., Nishikawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxoplasma+gondii+Cyclophilin+18-Mediated+Production+of+Nitric+Oxide+Induces+Bradyzoite+Conversion+in+a+CCR5-Dependent+Manner.">Toxoplasma gondii Cyclophilin 18-Mediated Production of Nitric Oxide Induces Bradyzoite Conversion in a CCR5-Dependent Manner.</a> Infection and Immunity. 77 (9), 3686-3695 (2009).</li><li>Lyons, R. E., McLeod, R., Roberts, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxoplasma+gondii+tachyzoite-bradyzoite+interconversion.">Toxoplasma gondii tachyzoite-bradyzoite interconversion.</a> Trends in Parasitology. 18 (5), 198-201 (2002).</li><li>Berghaus, L. J., Moore, J. N., Hurley, D. J., Vandenplas, M. L., Fortes, B. P., Wolfert, M. A., Boons, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immune+responses+of+primary+murine+macrophage-lineage+cells+and+RAW+264.7+cells+to+ligands+of+Toll-like+receptors+2,+3,+and+4.">Innate immune responses of primary murine macrophage-lineage cells and RAW 264.7 cells to ligands of Toll-like receptors 2, 3, and 4.</a> Comp Immunol Microbiol Infect Dis. , (2009).</li><li>Mordue, D. G., Scott-Weathers, C. F., Tobin, C. M., Knoll, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+patatin-like+protein+protects+Toxoplasma+gondii+from+degradation+in+activated+macrophages.">A patatin-like protein protects Toxoplasma gondii from degradation in activated macrophages.</a> Mol Microbiol. 63 (2), 482-496 (2007).</li><li>Bohne, W., Heesemann, J., Gross, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+replication+of+Toxoplasma+gondii+is+necessary+for+induction+of+bradyzoite-specific+antigens:+a+possible+role+for+nitric+oxide+in+triggering+stage+conversion.">Reduced replication of Toxoplasma gondii is necessary for induction of bradyzoite-specific antigens: a possible role for nitric oxide in triggering stage conversion.</a> Infection and Immunity. 62 (5), 1761-1777 (1994).</li></ol>

Хотя механизм развития bradyzoite до конца не изучен, молекулярно-генетический анализ Т. гондий стадии преобразования в культуре тканей привело к открытию генов, которые вовлечены в bradyzoite образованию кист 2,3,4. Анализ также привели к наблюдению, что некоторые bradyzoite маркеров, выраж...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Bovine serum albumin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A7906</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>11960-051</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Atlanta Biologicals</td>
<td>S11150</td>
<td>heat inactivate </td>
</tr>
<tr>
<td>Rhodamine Dolichos biflorus agglutinin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>RL-1032</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formaldehyde (16%)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Polysciences</td>
<td>18814</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glycine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>BP381-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HEPES</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>BP310-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>IFN&gamma;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PeproTech</td>
<td>315-05</td>
<td>Store in single use aliquots</td>
</tr>
<tr>
<td>L-glutamine (200mM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25030</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lipopolysaccharide (LPS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>L4391-1MG</td>
<td>Store in single use aliquots</td>
</tr>
<tr>
<td>Microscope Cover Glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-545-80 12CIR-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RPMI medium 1640 powder (with L-glutamine, without bicarbonate)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>31800-022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Triton-X-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>BP151-500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>VectaShield mounting media with DAPI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H-1200</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

toxoplasma gondii cyst wall formation in activated bone marrow-derived macrophages and bradyzoite conditions

Toxoplasma гондий является облигатным внутриклеточным паразитом, которые могут проникать любые ядерные ячейки теплокровных животных. Во время инфекции, Т. гондий распространяет в качестве быстрого тиражирования форму, которая называется tachyzoite. Tachyzoites превращаются в медленно растущих осумкованный форму, которая называется bradyzoite по сигнализации процесс, который не очень хорошо охарактеризованы. В животных, bradyzoite кисты находятся в центральной нервной системы и мышечной ткани и представляют собой хроническую стадию инфекции. Преобразование в bradyzoites можно смоделировать в культуре ткани СО 2 голод, используя среде с высоким рН, или добавлением интерферона гамма (IFNγ). Bradyzoites характеризуются наличием кисты стене, к которой лектин Dolichos biflorus агглютининов (DBA) связывает. Флуоресцентно меченных DBA используется для визуализации кисты стене у паразитов, выращенные в человеческие фибробласты крайней плоти (HFFS), которые были выставлены низкие CO 2 и высоким рН среды. Кроме того, паразиты, проживающих в мышиной костномозгового происхождения макрофагов (BMMs) дисплей стенки цисты обнаруживаются DBA после BMMs активируются с IFNγ и липополисахарида (ЛПС). Этот протокол будет показано, как вызвать преобразование T. гондий к bradyzoites использованием высокой питательной среде с низким рН 2 CO и активации BMMs. Клетки-хозяева будут культивировали на покровных, инфицированных tachyzoites и либо активированный с добавлением IFNγ и LPS (BMMs) или подвергается высокой питательной среде рН (HFFS) в течение трех дней. После завершения инфекции, клетки-хозяина будет исправлено, проницаемыми, и блокировали. Киста стены будут визуализированы использованием родамина DBA с флуоресцентной микроскопии.

Watch this Scientific Journal Video about Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions at JoVE.com

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma гондий превращается в кисту форме в ответ на экологические стрессы, которые могут быть передразнил в моделях культуры тканей. Это видео демонстрирует методы для проверки образованию кист стене путем активации костномозгового происхождения макрофагов или изменении рН среды роста фибробластов в клетках.

Toxoplasma Киста гондий стены Образование в Активированный костномозгового происхождения Макрофаги и Bradyzoite условия

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that can invade any nucleated cell of warm-blooded animals. During infection, T. gondii ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Obtaining Highly Purified Toxoplasma gondii Oocysts by a Discontinuous Cesium Chloride Gradient

Obtaining Highly Purified Toxoplasma gondii Oocysts by a Discontinuous Cesium Chloride Gradient

Получение высокоочищенного Toxoplasma гондий Ооцист по разрывным градиентом цезия хлорид

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan pathogen that commonly infects humans. It is a well characterized apicomplexan associated with ...

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Мыши с Предустановленные Т Особенности клеточного рецептора Против Toxoplasma гондий, Полученные через SCNT

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

Генерация и маркировки костного мозга мышей-дендритных клеток с Qdot нанокристаллов для отслеживания исследований

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

A Genetic Screen to Isolate Toxoplasma gondii Host-cell Egress Mutants

A Genetic Screen to Isolate Toxoplasma gondii Host-cell Egress Mutants

Генетические экрана изолировать Toxoplasma гондий Клетки-хозяина Мутанты Egress

The widespread, obligate intracellular, protozoan parasite Toxoplasma gondii causes opportunistic disease in immuno-compromised patients and causes birth ...

Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages

Исследование поляризации Использование макрофагов костного мозга макрофагов

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic ...

Genetic Manipulation in &Delta;ku80 Strains for Functional Genomic Analysis of Toxoplasma gondii

Genetic Manipulation in ÃƒÅ½Ã¢â‚¬Âku80 Strains for Functional Genomic Analysis of Toxoplasma gondii

Генетические манипуляции<em&gt; Δku80</em&gt; Штаммов для функционального геномного анализа<em&gt; Токсоплазма</em

Targeted genetic manipulation using homologous recombination is the method of choice for functional genomic analysis to obtain a detailed view of gene ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Количественный<em&gt; В пробирке</em&gt; Анализе на определение адгезию нейтрофилов к активированным Первичные человеческие эндотелиальные клетки микрососудов в статических условиях

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Bone Marrow-derived Macrophage Production

Костного мозга, полученных макрофагов производства

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

Выделение и внутривенное введение мышиных костного мозга моноцитов

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Forward Genetics Screens Using Macrophages to Identify Toxoplasma gondii Genes Important for Resistance to IFN-&#947;-Dependent Cell Autonomous Immunity

Forward Genetics Screens Using Macrophages to Identify Toxoplasma gondii Genes Important for Resistance to IFN-ÃƒÅ½Ã‚Â³-Dependent Cell Autonomous Immunity

Вперед Генетика экранов с помощью макрофагов Определение<em&gt; Токсоплазма</em&gt; Гены важен для достижения стойкости к ИФН-γ-зависимая клеточно автономного Иммунитет

Toxoplasma gondii, the causative agent of toxoplasmosis, is an obligate intracellular protozoan pathogen. The parasite invades and replicates within ...