Name: patch clamp recordings from mouse retinal neurons in a dark-adapted slice preparation
Uploaded: 2010-09-12T19:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation at JoVE.com

Detta arbete stöddes av NIH Grant EY17606 (APS).

1. Förbereda Elektroder <ol><li> Förbered inspelning och referens elektroder genom att doppa dem i både 1M NaCl och köra 15V mellan dem med hjälp av en 1 Hz sinusvåg för ~ 20 s. </li><li> Gör inspelningen elektroderna med en mikropipett avdragare (Sutter Instruments P-97). För patch-pipetter använda ett borosilikatglas med en yttre diameter på 1,2 mm och en innerdiameter på 0,69 mm (Sutter Instrument, Cat # B120-69-10). Mät serien motståndet genom spetsen på elektroden. Utifrån storleken på målceller...

<ol>
	<li>Weblin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+along+and+between+rods+in+the+tiger+salamander+retina.">Transmission along and between rods in the tiger salamander retina.</a> J Physiol. 280, 449-470 (1978).</li><li>Wu, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+connections+among+retina+neurons+in+living+slices.">Synaptic connections among retina neurons in living slices.</a> J Neurosci Methods. 20, 139-149 (1987).</li><li>Rieke, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+contrast+adaptation+in+salamander+bipolar+cell.">Temporal contrast adaptation in salamander bipolar cell.</a> J Neurosci. 21, 9445-9454 (2001).</li><li>Armstrong-Gold, C., &amp;amp, R. i. e. k. e., F, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bandpass+filtering+at+the+rod+to+second-order+cell+synapse+in+salamander+(Ambystoma+tigrinum)+retina.">Bandpass filtering at the rod to second-order cell synapse in salamander (Ambystoma tigrinum) retina.</a> J Neurosci. 23, 3796-3806 (2003).</li><li>Masland, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fundamental+plan+of+the+retina.">The fundamental plan of the retina.</a> Nat Neurosci. 4, 877-886 (2001).</li><li>Wassle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+processing+in+the+mammalian+retina.">Parallel processing in the mammalian retina.</a> Nat Rev Neurosci. 5, 747-757 (2004).</li></ol>

Skär inspelning från ryggradsdjur näthinnor har gjorts i årtionden 1,2, och har varit ganska framgångsrika i att ge en djupare förståelse av hur näthinnans kretsarna kodar infallande ljus. Fördelarna med att skära med en vibrerande mikrotom snarare än direkt med ett rakblad är att näthinnans skivor drabbas mindre skador på ytan. Med ett sug pipett är det lätt att ta bort denna skada och målet friska celler strax under ytan som har kvar sin anslutning i näthinnans krets, där de flesta cellty...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Micropipette Puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>P-97</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Borosilicate glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>B120-69-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Polyethylene tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Intramedic</td>
<td>PE205</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A7002</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Low gelling temp agarose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A0701</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ames' Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A1420</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P0781</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

patch clamp recordings from mouse retinal neurons in a dark-adapted slice preparation

Vår visuella upplevelsen initieras när den visuella pigment i vår näthinnans fotoreceptorer absorberar fotoner av ljus energi och initierar en kaskad av intracellulära förlopp som leder till nedläggning av cyklisk-nukleotid-gated kanaler i cellmembranet. Den resulterande förändringen i membranpotential i sin tur leder till en minskning av mängden av signalsubstansen släpp från både tappar och stavar synaptiska terminaler. För att mäta hur ljuset-framkallade förändringen i fotoreceptor membranpotential leder till nedströms aktivitet i näthinnan, har forskare gjort elektrofysiologiska inspelningar från näthinnan slice förberedelser för decennier 1,2. I det förflutna dessa skivor har minskat manuellt med ett rakblad på näthinnan vävnad som är ansluten till filtrerpapper, på senare år en annan metod för skivning har utvecklats där näthinnans vävnad är inbäddad i låg gelbildande temperatur agar och skivade i svalt lösning med en vibrerande mikrotom 3,4. Detta preparat ger retinala skivor med mindre skador på ytan och mycket robust ljus-evoked potential. Här har vi dokumentera hur detta förfarande kan göras under infrarött ljus för att undvika blekning den visuella pigment.

Watch this Scientific Journal Video about Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation at JoVE.com

Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation

Här beskriver vi en procedur för att generera mörka anpassad skivor av musen näthinnan för elektrofysiologiska inspelningar.

Patch Clamp Inspelningar från mus näthinnan nervceller i en anpassad Dark-Slice Förberedelser

Our visual experience is initiated when the visual pigment in our retinal photoreceptors absorbs photons of light energy and initiates a cascade of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Paired Patch Clamp Recordings from Motor-neuron and Target Skeletal Muscle in Zebrafish

Kopplade Patch Clamp Inspelningar från Motor-neuron och Target skelettmuskulaturen i Zebrafish

Larval zebrafish represent the first vertebrate model system to allow simultaneous patch clamp recording from a spinal motor-neuron and target muscle.  ...

Patch Clamp Recordings in Inner Ear Hair Cells Isolated from Zebrafish

Patch clamp inspelningar i Inre celler öronhår isolerad från Zebrafish

Patch  clamp analyses of the voltage-gated channels in sensory hair cells isolated  from a variety of species have been described previously1-4 but this  ...

F1FO ATPase Vesicle Preparation and Technique for Performing Patch Clamp Recordings of Submitochondrial Vesicle Membranes

F1FO ATPase Vesicle Preparation and Technique for Performing Patch Clamp Recordings of Submitochondrial Vesicle Membranes

<sub&gt; 1</sub&gt; F<sub&gt; O</sub&gt; ATPas vesikelberedning och teknik for Performing Patch Clamp Inspelningar av Submitochondrial Blås Membran

Mitochondria are involved in many important cellular  functions including metabolism, survival1, development and, calcium signaling2. Two of the most ...

Simultaneous Whole-cell Recordings from Photoreceptors and Second-order Neurons in an Amphibian Retinal Slice Preparation

Samtidiga Hel-Inspelningar från fotoreceptorer och andra ordningens neuron i ett Amfibie näthinnan Slice Förberedelser

One of the central tasks in retinal neuroscience  is to understand the circuitry of retinal neurons and how those connections are  responsible for shaping ...

Isolation of Sensory Neurons of Aplysia californica for Patch Clamp Recordings of Glutamatergic Currents

Isolation of Sensory Neurons of Aplysia californica for Patch Clamp Recordings of Glutamatergic Currents

Isolering av sensoriska neuroner av<em&gt; Aplysia californica</em&gt; För Patch Clamp Inspelningar av glutamaterg Currents

The marine gastropod mollusk Aplysia californica has a venerable  history as a model of nervous system function, with particular significance in  studies ...

Patch Clamp Recordings from Embryonic Zebrafish Mauthner Cells

Patch Clamp Inspelningar från embryonala Zebrafish Mauthner Cells

Mauthner cells (M-cells) are large  reticulospinal neurons located in the hindbrain of teleost fish. They are key  neurons involved in a characteristic ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings from Morphologically- and Neurochemically-identified Hippocampal Interneurons

Hel-cell Patch-clamp Inspelningar från Morphologically- och neurokemiskt identifierade Hippocampus Interneuroner

GABAergic inhibitory interneurons play a central role within neuronal circuits of the brain. Interneurons comprise a small subset of the neuronal ...

Recording Light-evoked Postsynaptic Responses in Neurons in Dark-adapted, Mouse Retinal Slice Preparations Using Patch Clamp Techniques

Inspelning Ljus framkallade Postsynaptiska svar i nervceller i Dark-anpassade, mus näthinnan Slice Förberedelser Använda Patch Clamp Tekniker

The retina is the gateway to the visual system. To understand visual signal processing mechanisms, we investigate retinal neural network functions. ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings in Brain Slices

Hel-cell patch-clamp inspelningar i hjärnan skivor

Whole-cell patch-clamp recording is an electrophysiological technique that allows the study of the&#160;electrical properties of a substantial part of the ...

Subcellular Patch-clamp Recordings from the Somatodendritic Domain of Nigral Dopamine Neurons

Subcellulära Patch-clamp inspelningar från somatodendritisk området nigrala dopaminneuroner

Dendrites of dopaminergic neurons receive and convey synaptic input, support action potential back-propagation and neurotransmitter release. Understanding ...