Name: study glial cell heterogeneity influence on axon growth using a new coculture method
Uploaded: 2010-09-06T17:00:00
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Diese Studie wurde von FMMU neue Erkenntnis Stiftung und teilweise NIH finanziell unterstützt.

1. Glia Cell Culture Gliazellen können aus verschiedenen Regionen des zentralen Nervensystems gezüchtet werden. Der gesamte Prozess ist in Bearbeitung Abbildung dargestellt. <img src="/files/ftp_upload/2111/2111process.jpg" alt="Prozess 1" /> Tag 1 Coating Kultur Platte und Deckgläser <ol><li> Dry sterilisiert Glas Mikroskop runde Deckgläser in einem Autoklaven. </li><li> Platte der sterilisierten Deckgläschen in sterilisierte 24-we...

<ol>
	<li>Rossignol, S., Schwab, M., Schwartz, M., Fehlings, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+cord+injury:+time+to+move?.">Spinal cord injury: time to move?.</a> J Neurosci. 27 (44), 11782-11792 (2007).</li><li>Yiu, G., He, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+inhibition+of+CNS+axon+regeneration.">Glial inhibition of CNS axon regeneration.</a> Nat Rev Neurosci. 7 (8), 617-627 (2006).</li><li>Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mystery+and+magic+of+glia:+a+perspective+on+their+roles+in+health+and+disease.">The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease.</a> Neuron. 60 (3), 430-440 (2008).</li><li>Matyash, V., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+in+astrocyte+morphology+and+physiology.">Heterogeneity in astrocyte morphology and physiology.</a> Brain Res Rev. , (2009).</li><li>Wanner, I. B., Deik, A., Torres, M., Rosendahl, A., Neary, J. T., Lemmon, V. P., Bixby, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+in+vitro+model+of+the+glial+scar+inhibits+axon+growth.+Glia.">A new in vitro model of the glial scar inhibits axon growth. Glia.</a> 56 (15), 1691-1709 (2008).</li><li>Kuffler, D. P., Sosa, I. J., Reyes, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+chondroitin+sulfate+proteoglycan+inhibits+dorsal+root+ganglion+neuron+neurite+outgrowth+and+substrate+specificity+via+a+soma+and+not+a+growth+cone+mechanism.">Schwann cell chondroitin sulfate proteoglycan inhibits dorsal root ganglion neuron neurite outgrowth and substrate specificity via a soma and not a growth cone mechanism.</a> J Neurosci Res. 87 (13), 2863-2871 (2009).</li><li>Kleitman, N., Wood, P. M., Bunge, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+culture+method+for+the+study+of+myelination.">Tissue culture method for the study of myelination.</a> Culturing nerve cells. , P559-P559 (1998).</li></ol>

This experiment protocol was designed to reach two goals to study glial cells, especially astrocyte heterogeneity's influence on neuron adhesion and neurite growth. The first goal was to maintain astrocyte heterogeneity as much as possible, in this experiment, the confluent glial cell culture enriched astrocytes was mixed primary culture without any chemical treatment and digestion propagation, which may further damage the cell and induce injury response of astrocytes. The final astrocyte purity is more than 90% GFAP pos...

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		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
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		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM(high glucose)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10313-039</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L15 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11415-114</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10437-077</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Neurobasal Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>21103-049</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>poly-lysine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P4832</td>
<td>culture grade</td>
</tr>
<tr>
<td>NGF(2.5S)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>13257-019</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>B27 supplyment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17504-044</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.25% trypsin-EDTA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>25200-056</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FUDR</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>F0503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>neurofilament antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Abcam</td>
<td>ab24575</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

study glial cell heterogeneity influence on axon growth using a new coculture method

In dem zentralen Nervensystem von Säugetieren, sind abgetrennte Axone nach einer Verletzung nicht in ihre ursprünglichen Ziele und funktionelle Wiederherstellung zu regenerieren ist sehr schlecht 1. Das Scheitern der Axonregeneration ist ein kombiniertes Ergebnis von mehreren Faktoren ab, einschließlich der feindlichen Gliazellen Umwelt, hemmende Myelin verwandten Molekülen und verminderte innere Neuron regenerative Kapazität 2. Astrozyten sind der vorherrschende Typ Gliazellen im zentralen Nervensystem und spielen eine wichtige Rolle bei der Axon-Funktionen unter Physiologie und Pathologie Bedingungen 3. Gegensatz zu den homologen Oligodendrozyten, Astrozyten sind eine heterogene Zellpopulation durch verschiedene Astrozyten Subpopulationen mit unterschiedlichen Morphologien und Genexpression 4 zusammen. Die funktionelle Bedeutung dieser Heterogenität, wie ihre Einflüsse auf die Axon-Wachstum, ist weitgehend unbekannt. Zur Untersuchung der Gliazellen, vor allem die Funktion der Astrozyten Heterogenität in Neuron Verhalten, haben wir eine neue Methode durch Co-Kultivierung hoch gereinigten Spinalganglien Neuronen mit Gliazellen aus der Ratte Cortex erhalten. Mit dieser Technik konnten wir den direkten Vergleich Neuron Haftung und Axon-Wachstum auf verschiedenen Astrozyten Subpopulationen unter den gleichen Bedingungen. In diesem Bericht geben wir die ausführliche Protokoll dieser Methode für Astrozyten Isolation und Kultur, Spinalganglien Neuronen Isolierung und Aufreinigung, und die Co-Kultur von DRG-Neuronen mit Astrozyten. Diese Methode könnte auch auf andere Hirnregionen erweitert werden, um zelluläre oder regional spezifische Wechselwirkung zwischen Neuronen und Gliazellen zu studieren.

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Study Glial Cell Heterogeneity Influence on Axon Growth Using a New Coculture Method

In diesem Protokoll beschrieben wir eine neue Methode, um den Einfluss von Gliazellen Heterogenität auf Axon Wachstum mit einer Studie<em&gt; In-vitro-</em&gt; Co-Kultur-System. Rat kortikalen Gliazellen wurden bis zur Konfluenz kultiviert und kokultiviert mit hoch gereinigtem Ratten Spinalganglien Neuronen. Verschiedene Gliazellen Einfluss auf Neuronen Haftung und Axon-Wachstum wurde direkt in der gleichen Kultur verglichen. Diese Methode bietet eine neue Möglichkeit, direkt Studie der Gliazellen Heterogenität Einfluss auf Neuron Adhäsion und Wachstum der Axone.

Study Gliazellen Heterogenität Einfluss auf Axon Wachstum Mit einer neuen Methode Cokultur

In the central nervous system of all mammals, severed axons after injury are unable to regenerate to their original targets and functional recovery is ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

A<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Modell-System für Amylopathy Study

Amylopathy is a term that describes abnormal synthesis and accumulation of amyloid beta (A&beta;) in tissues with time. A&beta; is a hallmark of ...

Forschung

Neurowissenschaften

A Method to Make a Craniotomy on the Ventral Skull of Neonate Rodents

Eine Methode, um eine Kraniotomie auf der Bauch Schädel des Neugeborenen Nagetiere Stellen

The use of a craniotomy for in vivo experiments provides an opportunity to investigate the dynamics of diverse cellular processes in the mammalian brain ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

Induktion von Plastizität Astrozytäre Rezeptoren durch Manipulation der neuronalen Feuerraten

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

Preparation of Primary Mixed Glial Cultures from Adult Mouse Spinal Cord Tissue

Herstellung von primären gemischten Gliazellen Kulturen von erwachsenen Maus Rückenmarksgewebe

It has been well-accepted that spinal cord glial responses contribute significantly to the development of neuropathic pain. Tremendous information ...

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Linear Agarose Kanäle zu studieren<em&gt; Drosophila</em&gt; Larval Krabbeln Verhalten

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat ...

Time-dependent Increase in the Network Response to the Stimulation of Neuronal Cell Cultures on Micro-electrode Arrays

Zeitabhängige Erhöhung der Netzwerkreaktion auf die Stimulation von neuronalen Zellkulturen auf Mikroelektroden-Arrays

Micro-electrode arrays (MEAs) can be used to investigate drug toxicity, design paradigms for next-generation personalized medicine, and study network ...

New Methods to Study Gustatory Coding

Neue Methoden zum Studieren der Gustatory Coding

The sense of taste allows animals to detect chemicals in the environment, giving rise to behaviors critical for survival. When Gustatory Receptor Neurons ...

Visualization of Motor Axon Navigation and Quantification of Axon Arborization In Mouse Embryos Using Light Sheet Fluorescence Microscopy

Visualisierung von motorischen Axon Navigation und Quantifizierung der Axon Arborization In Mausembryonen mit Fluoreszenz-Lichtblattmikroskopie

Spinal motor neurons (MNs) extend their axons to communicate with their innervating targets, thereby controlling movement and complex tasks in ...

Using Optical Coherence Tomography and Optokinetic Response As Structural and Functional Visual System Readouts in Mice and Rats

Mit optischen Kohärenztomographie und optokinetischen Antwort als strukturelle und funktionelle visuelles System auslesen bei Mäusen und Ratten

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for ...

A Method for 3D Reconstruction and Virtual Reality Analysis of Glial and Neuronal Cells

Eine Methode zur 3D-Rekonstruktion und Virtual Reality-Analyse von Glia- und Neuronalzellen

Serial sectioning and subsequent high-resolution imaging of biological tissue using electron microscopy (EM) allow for the segmentation and reconstruction ...