Name: study glial cell heterogeneity influence on axon growth using a new coculture method
Uploaded: 2010-09-06T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Study Glial Cell Heterogeneity Influence on Axon Growth Using a New Coculture Method at JoVE.com

Denna studie stöddes av FMMU nya finna grunden och delvis NIH finansiering.

1. Glia Cell Culture Gliaceller kan odlas från olika regioner i centrala nervsystemet. Hela processen visas i processen figur. <img src="/files/ftp_upload/2111/2111process.jpg" alt="Process 1" /> Dag 1 Beläggning kultur plattan och täckglas <ol><li> Torr steriliserade glas mikroskop runt täckglas i en autoklav. </li><li> Tavla de steriliserade täckglas i steriliserade 24-bra kultur plattan. </li><li> Täck täckglas med poly-lysin o...

<ol>
	<li>Rossignol, S., Schwab, M., Schwartz, M., Fehlings, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+cord+injury:+time+to+move?.">Spinal cord injury: time to move?.</a> J Neurosci. 27 (44), 11782-11792 (2007).</li><li>Yiu, G., He, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+inhibition+of+CNS+axon+regeneration.">Glial inhibition of CNS axon regeneration.</a> Nat Rev Neurosci. 7 (8), 617-627 (2006).</li><li>Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mystery+and+magic+of+glia:+a+perspective+on+their+roles+in+health+and+disease.">The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease.</a> Neuron. 60 (3), 430-440 (2008).</li><li>Matyash, V., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+in+astrocyte+morphology+and+physiology.">Heterogeneity in astrocyte morphology and physiology.</a> Brain Res Rev. , (2009).</li><li>Wanner, I. B., Deik, A., Torres, M., Rosendahl, A., Neary, J. T., Lemmon, V. P., Bixby, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+in+vitro+model+of+the+glial+scar+inhibits+axon+growth.+Glia.">A new in vitro model of the glial scar inhibits axon growth. Glia.</a> 56 (15), 1691-1709 (2008).</li><li>Kuffler, D. P., Sosa, I. J., Reyes, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schwann+cell+chondroitin+sulfate+proteoglycan+inhibits+dorsal+root+ganglion+neuron+neurite+outgrowth+and+substrate+specificity+via+a+soma+and+not+a+growth+cone+mechanism.">Schwann cell chondroitin sulfate proteoglycan inhibits dorsal root ganglion neuron neurite outgrowth and substrate specificity via a soma and not a growth cone mechanism.</a> J Neurosci Res. 87 (13), 2863-2871 (2009).</li><li>Kleitman, N., Wood, P. M., Bunge, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+culture+method+for+the+study+of+myelination.">Tissue culture method for the study of myelination.</a> Culturing nerve cells. , P559-P559 (1998).</li></ol>

Detta experiment protokoll var utformad för att nå två mål för att studera gliaceller, speciellt astrocyternas heterogenitet påverkan på neuron vidhäftning och neurite tillväxt. Det första målet var att upprätthålla astrocyternas heterogenitet så mycket som möjligt, i detta experiment var konfluenta gliacellsmarkörer kultur berikat astrocyter blandade primära kulturen utan kemisk behandling och rötning spridning, vilket ytterligare kan skada cellen och orsaka skador svar astrocyter. Den slutliga astroc...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM(high glucose)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10313-039</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L15 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11415-114</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10437-077</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Neurobasal Medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>21103-049</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>poly-lysine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P4832</td>
<td>culture grade</td>
</tr>
<tr>
<td>NGF(2.5S)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>13257-019</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>B27 supplyment</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17504-044</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.25% trypsin-EDTA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>25200-056</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FUDR</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>F0503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>neurofilament antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Abcam</td>
<td>ab24575</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

study glial cell heterogeneity influence on axon growth using a new coculture method

I det centrala nervsystemet hos alla däggdjur, avhuggna axoner efter skada inte kan förnya sina ursprungliga mål och funktionell återhämtning är mycket dålig 1. Felet av Axon förnyelse är en kombinerad resultatet av flera faktorer, inklusive fientliga gliacellsmarkörer miljö, hämmande myelin relaterade molekyler och minskade inneboende neuron regenerativ kapacitet 2. Astrocyterna är de mest dominerande gliaceller celltyp i centrala nervsystemet och spelar en viktig roll i axonet uppdrag enligt fysiologi och patologi villkor 3. Kontrast till den homologa oligodendrocyter, astrocyter är en heterogen cellpopulation består av olika astrocyternas subpopulationer med olika morfologier och genuttryck 4. Den funktionella betydelsen av denna heterogenitet, till exempel deras påverkan på Axon tillväxten är i stort sett okänd. För att studera gliacellsmarkörer, speciellt funktion astrocyternas heterogenitet i neuron beteende har vi etablerat en ny metod genom samtidig odling renat hög rygg nervceller rotganglier med gliaceller från råttan cortex. Genom denna teknik kunde vi direkt jämföra neuron vidhäftning och axon tillväxt på olika astrocyter delpopulationer på samma villkor. I denna rapport ger vi den detaljerade protokoll av denna metod för astrocyter isolering och kultur, dorsala nervceller ganglier isolering och rening, samt co-kultur DRG nervceller med astrocyter. Denna metod skulle även kunna utvidgas till andra delar av hjärnan för att studera cellulära eller regionala specifika interaktionen mellan nervceller och gliaceller.

Watch this Scientific Journal Video about Study Glial Cell Heterogeneity Influence on Axon Growth Using a New Coculture Method at JoVE.com

Study Glial Cell Heterogeneity Influence on Axon Growth Using a New Coculture Method

I detta protokoll beskrivs vi en ny metod för att studera inverkan av gliacellsmarkörer heterogenitet på axon tillväxt med en<em&gt; In vitro</em&gt; Co-kultur-system. Rat kortikala gliaceller odlades till sammanflödet och cocultured med renat råtta dorsala neuron rotganglier. Olika gliacellsmarkörer påverkan på nervceller vidhäftning och axon tillväxt jämfördes direkt i samma kultur. Denna metod ger ett nytt sätt att direkt studera gliaceller inflytande cellen heterogenitet på neuron vidhäftning och Axon tillväxt.

Studie gliacellsmarkörer Heterogenitet Påverkan på Axon tillväxt Använda ett nytt Coculture metod

In the central nervous system of all mammals, severed axons after injury are unable to regenerate to their original targets and functional recovery is ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

A Caenorhabditis elegans Model System for Amylopathy Study

ETT<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Modellsystem för Amylopathy Study

Amylopathy is a term that describes abnormal synthesis and accumulation of amyloid beta (A&beta;) in tissues with time. A&beta; is a hallmark of ...

A Method to Make a Craniotomy on the Ventral Skull of Neonate Rodents

En metod för att göra en Kraniotomi på den ventrala Skull of Neonatal Gnagare

The use of a craniotomy for in vivo experiments provides an opportunity to investigate the dynamics of diverse cellular processes in the mammalian brain ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

Induktion Plasticitet hos astrocytiska Receptorer genom manipulering av neuron priser

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

Preparation of Primary Mixed Glial Cultures from Adult Mouse Spinal Cord Tissue

Framställning av primära blandade Glial kulturer från vuxen mus ryggmärg

It has been well-accepted that spinal cord glial responses contribute significantly to the development of neuropathic pain. Tremendous information ...

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

Använda Linear Agarose kanaler att studera<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvernas Genomsökning Behavior

Drosophila larval crawling is emerging as a powerful model to study neural control of sensorimotor behavior. However, larval crawling behavior on flat ...

Time-dependent Increase in the Network Response to the Stimulation of Neuronal Cell Cultures on Micro-electrode Arrays

Tidsberoende ökning av nätverkssvaret till stimulering av neuronala cellkulturer på mikroelektroder

Micro-electrode arrays (MEAs) can be used to investigate drug toxicity, design paradigms for next-generation personalized medicine, and study network ...

New Methods to Study Gustatory Coding

Nya metoder för att studera gustatorisk kodning

The sense of taste allows animals to detect chemicals in the environment, giving rise to behaviors critical for survival. When Gustatory Receptor Neurons ...

Visualization of Motor Axon Navigation and Quantification of Axon Arborization In Mouse Embryos Using Light Sheet Fluorescence Microscopy

Visualisering av Motor Axon navigering och kvantifiering av Axon Arborization i musembryon som använder ljus ark fluorescensmikroskopi

Spinal motor neurons (MNs) extend their axons to communicate with their innervating targets, thereby controlling movement and complex tasks in ...

Using Optical Coherence Tomography and Optokinetic Response As Structural and Functional Visual System Readouts in Mice and Rats

Med optisk koherenstomografi och Optokinetic svar som strukturella och funktionella visuella systemet avläsning på möss och råttor

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for ...

A Method for 3D Reconstruction and Virtual Reality Analysis of Glial and Neuronal Cells

En metod för 3D-rekonstruktion och virtuell verklighet analys av Glial och neuronala celler

Serial sectioning and subsequent high-resolution imaging of biological tissue using electron microscopy (EM) allow for the segmentation and reconstruction ...