Name: single cell transfection in chick embryos
Uploaded: 2010-09-25T17:00:00
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हम न्यूरल ट्यूब छवि के लिए Shlomi Krispin धन्यवाद. विशेष रूप में, हम GFP अभिकर्मक तकनीक की शुरुआत के लिए Yuval दालचीनी स्वीकार करते हैं. इस काम में इसराइल विज्ञान फाउंडेशन, एसोसिएशन Francaise contre les myopathies, और ड्यूश Forschungsgemeinshaft, सहयोगात्मक अनुसंधान केन्द्र 488 से सी.के. अनुदान द्वारा समर्थित किया गया

1. Micropipettes की तैयारी हम एक मानक Narishige पीपी 83 विंदुक डांड़ी पर 13.5 के एक गर्मी की स्थापना के साथ हमारे pipettes खींच. सटीक सेटिंग, कैलिब्रेटेड के बीच 8 और 10 microns के एक विंदुक टिप व्यास में लक्ष्य होना चाहिए. हम रे?...

<ol>
	<li>Ben-Yair, R., Kalcheim, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+analysis+of+the+avian+dermomyotome+sheet+reveals+the+existence+of+single+cells+with+both+dermal+and+muscle+progenitor+fates.">Lineage analysis of the avian dermomyotome sheet reveals the existence of single cells with both dermal and muscle progenitor fates.</a> Development. 132, 689-701 (2005).</li><li>Ben-Yair, R., Kalcheim, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+and+bone+morphogenetic+protein+differentially+act+on+dermomyotome+cells+to+generate+endothelium,+smooth,+and+striated+muscle.">Notch and bone morphogenetic protein differentially act on dermomyotome cells to generate endothelium, smooth, and striated muscle.</a> J Cell Biol. 180, 607-618 (2008).</li><li>Cinnamon, Y., Kahane, N., Kalcheim, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+early+development+of+specific+hypaxial+muscles+from+the+ventrolateral+myotome.+.">Characterization of the early development of specific hypaxial muscles from the ventrolateral myotome. .</a> Development. 126, 4305-4315 (1999).</li><li>Stark, D. A., Kulesa, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoactivatable+green+fluorescent+protein+as+a+single-cell+marker+in+living+embryos.">Photoactivatable green fluorescent protein as a single-cell marker in living embryos.</a> Dev Dyn. 233, 983-992 (2005).</li><li>Haas, K., Jensen, K., Sin, W. C., Foa, L., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+electroporation+in+Xenopus+tadpoles+in+vivo--from+single+cells+to+the+entire+brain.">Targeted electroporation in Xenopus tadpoles in vivo--from single cells to the entire brain.</a> Differentiation. 70, 148-154 (2002).</li><li>Haas, K., Sin, W. C., Javaherian, A., Li, Z., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+electroporation+for+gene+transfer+in+vivo.">Single-cell electroporation for gene transfer in vivo.</a> Neuron. 29, 583-591 (2001).</li><li>Hewapathirane, D. S., Haas, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+electroporation+in+vivo+within+the+intact+developing+brain.">Single cell electroporation in vivo within the intact developing brain.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Nagai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+variant+of+yellow+fluorescent+protein+with+fast+and+efficient+maturation+for+cell-biological+applications.">A variant of yellow fluorescent protein with fast and efficient maturation for cell-biological applications.</a> Nat Biotechnol. 20, 87-90 (2002).</li><li>Sato, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+integration+and+conditional+expression+of+electroporated+transgenes+in+chicken+embryos.">Stable integration and conditional expression of electroporated transgenes in chicken embryos.</a> Dev Biol. 305, 616-624 (2007).</li></ol>

ऊपर वर्णित विधि छोटे सेल सबसेट या एक 3 progenitors lipophilic रंजक देने के लिए एक पहले से वर्णित तकनीक के एक संशोधन है. यह मानक electroporation तकनीक पर तीन मुख्य लाभ है. सबसे पहले, यह लक्ष्य ऊतकों में विश्वास असतत साइटों के स?...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Pipette tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sutter Instrument</td>
<td>B100-75-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Capillaries</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Drummond Scientific</td>
<td>2-000-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Insect needles</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Watkins &amp; Doncaster</td>
<td>E6871</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pen-Strep solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biological Industries</td>
<td>03-031-1B</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

single cell transfection in chick embryos

विकास जीव विज्ञान में एक केंद्रीय विषय प्रजातियों के विविधीकरण और अंतर्निहित आणविक तंत्र की व्याख्या है. यह सामान्य और प्रयोगात्मक शर्तों के तहत एकल कक्षों के भाग्य का एक गहन विश्लेषण की जरूरत पर जोर देता है. यह अंत करने के लिए, अभिकर्मक तरीकों कि एकल progenitors लक्ष्य एक शर्त रहे हैं. हम यहाँ ओवो में चिकन ऊतकों में एकल कक्षों transfecting अनुमति आनुवंशिक हेरफेर के रूप में विश्वसनीय के रूप में अच्छी तरह से अनुरेखण वंश के लिए एक तकनीकी रूप से सरल तरीका वर्णन. विशिष्ट ऊतकों डोमेन somite या तंत्रिका ट्यूब के भीतर लक्षित कर रहे हैं, और डीएनए सीधे ब्याज की उपकला में अंतःक्षिप्त है, एकल कक्षों की छिटपुट अभिकर्मक में जिसके परिणामस्वरूप. संवाददाताओं का प्रयोग, clonal आबादी फलस्वरूप लिए पता लगाया जा सकता है तीन दिन के लिए, और आनुवंशिक छेड़छाड़ clonal आबादी के व्यवहार नियंत्रणों के साथ तुलना की जा सकती है. इस विधि लड़की भ्रूण की पहुंच के आनुवंशिक हेरफेर के लिए उभरते उपकरणों के साथ साथ लाभ लेता है. हम तुलना और व्यापक रूप से इस्तेमाल electroporation पद्धति पर अपने फायदे है, और संभव अनुप्रयोगों पर चर्चा और अतिरिक्त में vivo मॉडल में भी सुझाव दिया उपयोग . हम एक महत्वपूर्ण इसके अलावा और मौजूदा वंश अनुरेखण और आनुवंशिक हस्तक्षेप उपकरण के लिए पूरक के रूप में इस विधि का उपयोग समर्थन करते हैं.

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Single Cell Transfection in Chick Embryos

ठीक टिप का उपयोग micropipettes हम चिकन somites या तंत्रिका ट्यूब की उपडोमेन में प्लास्मिड डीएनए इंजेक्षन. प्लाज्मिड की एकाग्रता एकल ट्रांसफ़ेक्ट कोशिकाओं को उत्पन्न करने के लिए समायोजित किया गया है. हम तो कोशिकाओं clonal आबादी में विकसित करने के लिए अनुमति देते हैं.

चिकी भ्रूण में एकल सेल अभिकर्मक

A central theme in developmental biology is the diversification of lineages and the elucidation of underlying molecular mechanisms. This entails a ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

6.5 डीपीसी माउस भ्रूण के विच्छेदन

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

एचएच स्टेज 10 चिकन भ्रूण के ओवो Electroporations में

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

प्रारंभिक चिकी भ्रूण पूर्व vivo (नई संस्कृति) की संस्कृति के लिए विधि

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

प्रारंभिक चिकी भ्रूण के स्वस्थानी संकरण में डबल पूरा पर्वत

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

भ्रूण की इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए तैयार ड्रोसोफिला भ्रूण दिल ट्यूब

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

एकल सेल माउस शंकु photoreceptors से सक्शन रिकॉर्डिंग

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

दो फोटॉन आधारित लाइव Zebrafish भ्रूण में photoactivation

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos

जहाँ रहते इमेजिंग सेल आकार बदलें ड्रोसोफिला भ्रूण

The developing Drosophila melanogaster embryo undergoes a number of cell shape changes that are highly amenable to live confocal imaging.  Cell shape ...

Single Cell Fate Mapping in Zebrafish

Zebrafish में सिंगल सेल भाग्य मानचित्रण

The ability to differentially label single cells has important implications in developmental biology. For instance, determining how hematopoietic, ...

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

में चेहरे प्रत्यारोपण<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; भ्रूण

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...